微生物实验中为什么细菌在染色前需要固定？

微生物实验中为什么细菌在染色前需要固定？~

在细菌染色过程中，固定的操作是快速将载玻片通过火焰2-3次，其目的是让细菌细胞膜贴玻片部分局部蛋白质变性，从而固定于载玻片上而不易被染液或水冲掉。若玻片上的菌膜未能干燥，则2-3次火焰的固定作用就会很差，细菌极易被染液或水冲掉。所以固定操作一定是在玻片干燥之后再进行的步骤。
之所以不能利用火焰烘烤进行固定操作，是因为如果菌膜受热时间过长，轻则细胞壁变性，使染色结果出现严重偏差；重则细菌死亡，菌体形态发生重大变化，最终导致染色失败与结果误判。

由于细菌细胞小且无色透明，直接用光学显微镜观察时，菌体和背景反差很小，难以看清细菌的形态，更不易识别某些细胞结构，因此，一般都需要先将细菌进行染色，借助于颜色的反衬作用，以提高观察样品不同部位的反差，能更清楚地进行观察和研究。此外，某些染色法还可用于鉴别不同类群的细菌，故细菌的染色是工业微生物学实验中重要的基本技术。染色前必须先对涂在载玻片上的细菌样品进行固定，固定的作用一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上，一是增加菌体对染料的亲和力。一般常用酒精灯火焰加热固定的方法，但应注意防止细胞膨胀和收缩，尽量保持细胞原形。

微生物实验中细菌在染色前需要固定的原因：
一：杀死细胞，是染料易于着色。
二：使细菌附着于玻片上，不易被水冲掉。
在固定时，是要慢慢晾干，如果得确要加快速度，可以处于酒精灯火焰上部远处稍微烘几下，切忌烘得玻片升温，否则有可能会破坏细菌生命形态
细菌的革兰氏染色与显微观察
一、 实验原理
革兰氏染色原理：细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同造成的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结，当用乙醇处理时，由于脱水而引发网状结构的孔径变小，通透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。革兰氏阴性菌的细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂质被乙醇(或丙酮)溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫-碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。 显微镜成像原理：现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常 被称为复式显微镜。显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，油镜的放大倍数最大，对微生物学研究最为重要。在载玻片与镜头之间加滴镜油主要是为了增加照明亮度和增加显微镜的分辨率。以油代替空气作为光的传播介质，减少光线的折射或全反射，使观察到的像更加清晰。
二、 实验器材
1. 菌落：
大肠杆菌24h营养琼脂斜面培养物、
金黄色葡萄球菌约24h营养琼脂斜面培养物、 枯草芽孢杆菌12～18h营养琼脂斜面培养物。
2. 溶液或试剂：
蒸馏水、碘液、结晶紫染色液、95%酒精、番红染色液、香柏油。 3. 仪器：
显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、镊子、擦镜纸。
三、 实验步骤
革兰氏染色：
1. 涂片
取出载玻片，点燃载玻片，燃尽载玻片上的酒精和灭菌，在中间轻轻点一小滴蒸馏水，用接种环在试管的斜面培养基上，轻轻挑取少量菌体，整个过程试管口都要处在酒精灯的上方，而且速度要快，以防污染培养基。然后在载玻片的小水滴以转圈的动作涂片，待水滴混浊后停住，等其干燥、固定。
2. 初染
滴加结晶紫(以刚好将菌膜覆盖为宜)于菌落上，染色1～2min ，倾去染色液，有细水从载玻片上方向下冲洗，至洗出液为无色，将载玻片上水甩净。
3. 媒染
滴加碘液冲去残水，并覆盖约1min，水洗。
4. 脱色
将载玻片上面的水甩净，将载玻片倾斜，在白色背景下，用滴管加95%的酒精脱色，直至流出的酒精刚好不出现蓝色，立即用水冲净酒精，将载玻片上水甩净。
5. 复染
用番红液复染约1～2min，水洗，然后再吸水纸吸干
6. 镜检：

在低倍镜下寻找要观察的细菌菌落（在不停地移动载玻片，若感觉到有红色阴影，立刻停止，调整倍数，若不是菌落，继续找），将镜筒升高，然后转换到油镜。在样品区域加滴香柏油，用粗调节器将镜筒小心地降下，使油镜浸在镜油中并几乎与标本相接。将聚光器升至最高位置并开足光圈，用粗调节器将镜筒徐徐上升，直至视野中出现物像并用细调节器使其清晰准焦为止。

染色前固定的目的有三个：

1、杀死微生物，固定细胞结构。

2、保证菌体能更牢的粘附在载玻片上，防止标本被水冲洗掉。

3、改变染料对细胞的通透性，因为死的原生质比活的原生质易于染色。

固定时应注意：手持玻片，菌膜朝上，在微火过3次（手指触摸玻片反面，不烫手为宜），固定时应尽可能维持细胞原有形态，防止细胞膨胀或收缩。

细菌染色的过程

1、涂片：临床标本或液体培养物可直接涂抹于洁净的载玻片上，固体培养的细菌先在玻璃片上滴一滴生理盐水，然后取菌少许在盐水中磨匀，呈轻度混浊。涂好的菌膜大小一般以1cm2左右为宜。

2、干燥：涂片最好在室温下自然干燥，或将标本面向上，置于酒精灯火焰高处慢慢烘干，切不可在火焰上烧干。

3、固定：细菌的固定常用火焰加热法，即将上述已干的涂片在火焰中迅速通过3～5次，温度以手能摸时热而不烫为度。目的在于杀死细菌，凝固细胞质，改变细菌对染料的通透性。

4、初染：不同的染色方法，所用染液也不同。染液以覆盖菌膜为度。

5、媒染：通过媒染可增加染料和被染物质的亲和力。媒染剂还可用于固定之后，亦可含在固定液或染液中。

6、脱色：此步骤主要目的是观察细菌与染料间结合的稳定程度，作为鉴别染色之用。

7、复染：细菌初染色被脱色后常以复染液复染，便于观察。复染液的颜色与初染液有明显不同。

微生物实验中细菌在染色前需要固定的原因：

一：杀死细胞，是染料易于着色。

二：使细菌附着于玻片上，不易被水冲掉。

在固定时，是要慢慢晾干，如果得确要加快速度，可以处于酒精灯火焰上部远处稍微烘几下，切忌烘得玻片升温，否则有可能会破坏细菌生命形态。

革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：

1）涂片固定。

2）草酸铵结晶紫染1分钟。

3）蒸馏水冲洗。

4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。

5）水洗，用吸水纸吸去水分。

6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。

7）蕃红染色液（稀）染1分钟后，蒸馏水冲洗。干燥，镜检。

原理：染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。

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昌江黎族自治县19381038271： 微生物实验中为什么细菌在染色前需要固定? - ？
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昌江黎族自治县19381038271： 观察细菌时,为什么一般都需要先将细菌进行染色 - ？
慕衬维普： 由于细菌细胞小且无色透明,直接用光学显微镜观察时,菌体和背景反差很小,难以看清细菌的形态,更不易识别某些细胞结构,因此,一般都需要先将细菌进行染色,借助于颜色的反衬作用,以提高观察样品不同部位的反差,能更清楚地进行观察和研究.此外,某些染色法还可用于鉴别不同类群的细菌,故细菌的染色是工业微生物学实验中重要的基本技术.染色前必须先对涂在载玻片上的细菌样品进行固定,固定的作用一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上,一是增加菌体对染料的亲和力.一般常用酒精灯火焰加热固定的方法,但应注意防止细胞膨胀和收缩,尽量保持细胞原形.

昌江黎族自治县19381038271： 细菌染色前为什么必须进行固定 - ？
慕衬维普： 染色后有一个冲洗过程,防止把细菌冲掉 .另外固定的同时也杀死了细菌,失细胞膜失去选择透过性,利于染液进入细胞中进行染色

昌江黎族自治县19381038271： 用光学显微镜观察细菌时,为什么一般都需要先将细菌进 - ？
慕衬维普： 虽然各种类型的显微镜能够观察到细菌的各种形态结构,但一般实验室常用的是普通光学显微镜.由于细菌体积小且透明,在活体细胞内又含有大量的水分,因此,对光线的吸收和反射与水溶液相差不大.当把细菌悬浮在水滴内,放在显微镜下观察时,由于与周围背景没有显著的明暗差,难于看清它们的形状,更谈不上识别其细微结构.而经过染色,就可借助颜色的反衬作用比较清楚地看到菌体形态,亦即菌体表面及内部结构着色与背景形成鲜明对比,这样便可在普通光学显微镜下清晰地观察到微生物的形状和结构,而且还可以通过不同的染色反应来鉴别微生物的类型和区分死、活细菌等,因此,染色技术是观察细菌形态结构的重要手段.

昌江黎族自治县19381038271： 为什么油镜的放大倍数比普通物镜大?2,单染色的原理是什么 - ？
慕衬维普： 微生物实验中细菌在染色前需要固定的原因: 一:杀死细胞,是染料易于着色. 二:使细菌附着于玻片上,不易被水冲掉. 在固定时,是要慢慢晾干,如果得确要加快速度,可以处于酒精灯火焰上部远处稍微烘几下,切忌烘得玻片升温,否则...

昌江黎族自治县19381038271： 观察细菌为什么要染色? - ？
慕衬维普： 因为细菌细胞微小,透明,不易观察,需染上颜色.利用单一染料对细菌进行染色,使经染色后的菌体与背景形成明显的色差,从而能更清楚地观察到其形态和结构

昌江黎族自治县19381038271： 微生物实验 简单染色法的目的是什么 - ？
慕衬维普： 若想观察细菌的形态,必须进行染色,这就是染色的原因.如果不染色的话,在显微镜下无法观察.也需注意,这种简单染色法无法辨别细菌细胞结构.

昌江黎族自治县19381038271： 涂片在染色前为什么要先固定?固定时应注意什么问题? - ？
慕衬维普： 1、涂片后固定的目的是为了涂布在玻片上的物质固定在玻片上,防止在后续的操作中因为冲洗等操作将涂布的物质洗去.注意事项:固定时不宜太烫,以免因为高温导致玻片上的标本性质发生改变带来错误的结果.2、涂片的含义涂片是检测血...

昌江黎族自治县19381038271： 进行简单染色的目的及原理是什么 - ？
慕衬维普： 目的: 破坏膜的选择透过性,再使用染色剂,将生物组织浸入染色剂内细胞的某一部分染上与其他部分不同的颜色或深度不同的颜色,产生不同的折射率,以便观察.原理: 使组织细胞的某一部分染上与其他部分不同的颜色或深度不同的颜色...