单克隆抗体的提纯实验
单克隆抗体问世以来，由于其独有的特征已迅速应用于医学很多领域。主要表现在以下几个方面。
1．检验医学诊断试剂
作为检验医学实验室的诊断试剂，单克隆抗体以其特异性强、纯度高、均一性好等优点，广泛应用于酶联免疫吸附试验、放射免疫分析、免疫组化和流式细胞仪等技术。并且单克隆抗体的应用，很大程度上促进了商品化试剂盒的发展。目前，应用单克隆抗体制作的商品化试剂盒广泛应用于：
①病原微生物抗原、抗体的检测；
②肿瘤抗原的检测；
③免疫细胞及其亚群的的检测；
④激素测定；
⑤细胞因子的测定。
单克隆抗体对抗原的识别，与多克隆抗体有很大的不同。不同试剂盒因使用的单克隆抗体不同，识别抗原的位点不同，导致检测结果有一定差异。因此，标准化问题还需要进一步研究。
2．蛋白质的提纯
单克隆抗体是亲和层析中重要的配体。将单克隆抗体吸附在一个惰性的固相基质（如Speharose 2B、4B、6B等）上，并制备成层析柱。当样品流经层析柱时，待分离的抗原可与固相的单克隆抗体发生特异性结合，其余成分不能与之结合。将层析柱充分洗脱后，改变洗脱液的离子强度或pH，欲分离的抗原与抗体解离，收集洗脱液便可得到欲纯化的抗原。
3． 肿瘤的导向治疗和放射免疫显像技术
将针对某一肿瘤抗原的单克隆抗体与化疗药物或放疗物质连接，利用单克隆抗体的导向作用，将药物或放疗物质携带至靶器官，直接杀伤靶细胞，称为肿瘤导向治疗。另外，将放射性标记物与单克隆抗体连接，注入患者体内可进行放射免疫显像，协助肿瘤的诊断。
不会的。。。
超滤浓缩对于缓冲液成分不会有任何改变的，因为PBS中的磷酸根离子也好，氯离子也好，钠离子也好都是很小的离子，可以在溶液中自由扩散，不会因为超滤离心就被甩到下层滤液中去。
你可以做个简单的实验，取一定体积PBS溶液测一下pH值和电导率值，之后用超滤管去离心。取出上层未被滤完的溶液再测一下pH值和电导率值，会发现pH值和电导率值和之前测的是一样的。即可证明未被滤完的溶液还是PBS溶液，而不是水。
1．材料(1)20mMol/LpH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液
20mMol/LNaCl
(2)20mMol/LpH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液
40mMol/LNaCl
(3)20mMol/LpH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液
80mMol/LNaCl
(4)20mMol/LpH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液
(5)饱和硫酸铵液
(6)DEAE—纤维素柱
2．操作方法
（1）小鼠腹水用冷PBS液稀释4倍后，于1.00×105转离心30min，去沉淀。
（2）在4℃于上清中缓缓滴加饱和硫酸铵液，边加边搅拌，使溶液最终为50%硫酸铵浓度。
（3）此溶液置冰中30min~60min，然后5000r/min离心10min，去上清。
（4）将沉淀溶于Tris－HCl缓冲液（40mMol/LNaCl）中（溶液可能混浊）。
（5）装入透析袋于Tris－HCl缓冲液（20mMol/LNaCl）中透析除盐。
（6）离心去沉淀。（7）溶液稀释（1:100或更高倍稀释）后，于280nm测蛋白含量，估计蛋白质含量1A280unit=0.8mg蛋白质一般每ml腹水中，含有总蛋白约25mg~36mg。
（8）过DEAE—纤维素柱：纤维素柱高40cm，以20mMol/LNaClTris缓冲液平衡。透析样品以Tris缓冲液等量稀释。
样品进入柱床速度为1ml~2ml/min，以NaCl线形梯度洗脱。大部分单克隆IgG于40mMol/L和80mMol/LNaCl洗脱，也有极少例外的单克隆抗体于120mMol/L~150mMol/LNaCl洗脱。测OD280nm收集蛋白峰，单克隆IgG保存备用。
杂交瘤产生各种免疫球蛋白，但主要是IgG和IgM，究竟是哪种为主，则决定于抗原的免疫程序。免疫一次，且3天后就取脾，多为产生IgM的B淋巴细胞。免疫多次的多为IgG。
...怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白,制备抗HCG单克隆抗体可...
（1）制备单克隆抗体的诱导过程有：正常小鼠免疫处理、动物细胞的融合、杂交瘤细胞的筛选与培养、专一抗体检验阳性细胞培养、单克隆抗体的提纯．要用到动物细胞培养和动物细胞融合技术．（2）如图是抗HCG单克隆抗体制备流程示意图，给小鼠注射的HCG相当于注射抗原，使小鼠产生分泌抗HCG抗体相应的效应B淋巴细胞...
一种细菌刺激机体产生的抗体是单抗还是多抗?为什么?
当然是多抗了。单抗是单克隆细胞分泌后提纯的。一种细菌会有多种抗原，比如各不相同的外膜蛋白，LPS，荚膜等结构，进入机体被识别后，机体可以产生各种抗原的抗体。你自己查查单抗是怎么制备的就明白了 有明白的随时交流。
病毒的血清学技术有什么作用?
选择其中能产生某单一抗体的细胞株,所产抗体称“单克隆抗体”。单克隆抗体开创了在动物体外产生抗体的新时代。 这里介绍几种常用的血清学检测技术。 1 免疫双扩散法 又称奥氏琼脂双扩散法。琼脂在水中加热溶解,冷却时成为凝胶平板,在上打数孔,分别放入抗原和抗体,它们各自向凝胶中扩散,于抗原和抗体比例最适的位置...
血清中禽流感抗体含量的检测方法
在流感病毒微量中和实验中,酶结合物(HRP标记的羊抗鼠IgG抗体)与存在于MDCK细胞膜上的病毒核蛋白抗原-核蛋白单克隆抗体复合物结合,HRP酶催化OPD,使无色底物形成橙黄色化合物,再由ELISA检测仪测定吸光度值,从而获得中和抗体滴度[11]。1974年Jenning等首先用ELISA对注射流感病毒所产生的抗体消长规律进行了检测。Lanbre...
单克隆抗体在医学中的应用
1．检验医学诊断试剂 作为检验医学实验室的诊断试剂，单克隆抗体以其特异性强、纯度高、均一性好等优点，广泛应用于酶联免疫吸附试验、放射免疫分析、免疫组化和流式细胞仪等技术。并且单克隆抗体的应用，很大程度上促进了商品化试剂盒的发展。目前，应用单克隆抗体制作的商品化试剂盒广泛应用于： ①病原...
诊断试剂基础知识
将免疫的脾细胞(含产生抗体的 B 细胞)与小鼠肿瘤细胞融合,分离杂交瘤细胞,接种于小鼠腹腔,产生的腹水中含有浓度很高的单克隆抗体。 1.3 抗原抗体反应 1.3.1 可逆性 抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡,其反应式为: Ag+Ab → Ag · Ab 。 . 抗体的亲和力( affinity )是抗原抗体间的固有...
ibdv中文翻译
3基因的克隆与原核表达 Effect of qinchuankang granule on the immune organs of chickens infected by...上述结果说明烟草中产生的ibdvvp2重组蛋白具有免疫学功能,能与ibdv特异性抗体反应。 Indirect immuno ...本实验可以帮助我们进一步探讨ibdv抗原性漂移和毒力变化的分子生物学机制,追溯ibdv的起源,理解病毒的传播...
软骨藻酸的检测方法
Tsao等采用单克隆抗体ELISA检测法检测DA,并建立了基于单克隆抗体的胶体金免疫条检测法,免疫条检测法的检测限为5ng\/mL,在十分钟内就可完成检测。Tsao等的实验结果表明,用免疫条检测得到的结果与用ELISA方法得到的结果有很好的吻合性,可以用来快速检测贝类样品中的DA。另外,Shaw等建立了基于基因工程单链抗体(scFv)...
单克隆抗体植入小鼠腹腔和体外培养哪种方法好?
本方法即将杂交瘤细胞接种于小鼠腹腔内，在小鼠腹腔内生长杂交瘤，并产生腹水，因而可得到大量的腹水单抗且抗体浓度很高。可见该法操作简便、经济，不过，腹水中常混有小鼠的各种杂蛋白（包括Ig），因此在很多情况下要提纯后才能使用，而且还有污染动物病毒的危险，故而最好用SPF级小鼠。（2）体外培养生产...
什么是DNA疫苗?作为抗原成分的是什么?
含有ORF5基因质粒DNA能诱导猪抗GP5特异性中和抗体的产生;且免疫猪的外周血单核细胞在GP5重组蛋白存在时能够发生转化反应,显示了GP5特异性细胞免疫的产生(Pirzadeh B等,1998)。Meng(2000)将GP5基因克隆入巨细胞病毒(CMV)早期启动子的控制之下构建成真核表达质粒而制备出DNA疫苗,用其免疫仔猪后可诱导抗体的产生,实验...
钱戴益迈： 单克隆抗体的纯化现在有很多种方法,主要还是要根据你后面实验的需要选择合适的纯化方法!目前用的比较多的是辛酸-硫酸铵沉淀法!该方法较硫酸铵沉淀法来讲,纯化的效果更好并且单抗纯化后的效价不会受很大的影响,操作也相当简便...
广南县19757842889： 制备单克隆抗体的技术流程是怎样的呢? ？
钱戴益迈： (一)抗原提纯与动物免疫 对抗原的要求是纯度越高越好,尤其是初次免疫所用的抗原.如为细胞抗原,可取1*107个细胞作腹腔免疫.可溶性抗原需加完全福氏佐剂并经...
广南县19757842889： 单克隆抗体细胞的选择的实验步骤. - ？
钱戴益迈： 1. 材料1) 小鼠(Balb/c或C57小白鼠)若干只.2) 11.6%蔗糖溶液(经10磅30min高压灭菌).2. 操作方法1) 拉颈处死小鼠.2) 70%酒精浸泡消毒10min.3) 用手copy术剪将小鼠腹部剪开一小口,剥开皮肤,露出腹腔.4) 用注射器将4ml ...
广南县19757842889： 《单克隆抗体制备及纯化》 - ？
钱戴益迈： 单抗的用途:单克隆抗体具有高度特异性、高纯度特点,使其在很大浓度范围内获得低背景,所以在组织免疫染色中特别有用,但是大多数单抗在深固定的组织中不能很好的与抗原反应.还可以应用于免疫沉淀,免疫印迹技术,虽然都具有特异...
广南县19757842889： 有关单克隆抗体的问题 - ？
钱戴益迈： Tris-HCL缓冲液就是用三羟甲基氨基甲烷和盐酸制备的缓冲液. 具体方法如下 Tris-盐酸缓冲液(20mMol/L,25℃) 50毫升0.1 mol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris)溶液与X毫升0.1 mol/L盐酸混匀后,加水稀释至100毫升. pH X (ml)ph7.80加13.8ml盐...
广南县19757842889： 如图是通过动物纤维母细胞等获得单克隆抗体的实验研究.据图回答相关问题.(1)上图单克隆抗体的制备过程中,运用了动物细胞工程中的___和___两大技... - ？
钱戴益迈：[答案] (1)上图单克隆抗体的制备过程中,运用了动物细胞工程中的③动物细胞融合和②动物细胞培养两大技术.(2)①过程将已经分化的细胞培养成分化程度低的细胞过程,类似于植物组织培养技术中脱分化.与纤维母细胞相比,...
广南县19757842889： 有关单克隆抗体在单克隆抗体制备的实验中,大致过程是将抗原注射到小鼠体内,然后从小鼠脾脏中获得能够产生抗体的B淋巴细胞,然后与小鼠骨髓瘤细... - ？
钱戴益迈：[答案] 1.这个B淋巴细胞就是效应B细胞,书上不是加了限定词么“能产生抗体的”2.LZ要明确一点,不是只要是融合的细胞,它就一定能表达,可能会因为诸多因素使得融合细胞不能分泌抗体,这是个复杂的过程.所以这一步是确定融合细胞...
广南县19757842889： 单克隆抗体的鉴定实验 - ？
钱戴益迈： 1.杂交瘤细胞染色体的检查采用秋水仙素裂解法进行.2.单克隆抗体的类型、亚型的测定:购买兔抗小鼠Ig类型和亚型的标准抗血清,采用琼脂扩散法或ELISA夹心法测定单抗的Ig类型和亚型. ELISA夹心法测定单抗的Ig类型和亚型的试剂盒说明...
广南县19757842889： 简述单克隆抗体的制备过程 - ？
钱戴益迈： 1.对小鼠注射特定的抗原蛋白,使小鼠产生免疫反应;2.得到相应的B淋巴细胞;3.将小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合,再用特定的选择培养基进行筛选;4.在该培养基上,未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡,只有融合的杂种细胞才能生长(这种杂种细胞的特点是既能迅速大量繁殖又能产生专一的抗体)5.对上述杂交瘤细胞还需进行克隆化培养和抗体检测,经多次筛选,就可获得足量的能分泌所需抗体的细胞;6.最后,将杂交瘤细胞在体外条件下做大规模培养,或注射到小鼠腹腔内增殖,这样,从细胞培养液或小鼠腹水中,就可以提取出大量的单克隆抗体了!
