如何看流式细胞周期结果图?
(1)细胞培养
取对数生长期的细胞,按1X106个/mL以1mL体积接种于6孔板内。培养24h后,加入不同浓度样品。在37 ℃、5 % 的CO2恒温箱中培养24h后终止。
(2)细胞固定
胰酶消化并离心收集细胞(800rpm/min),弃上清,用预冷PBS洗细胞两次,加入预冷70%乙醇, -20℃固定保存。
(3) 细胞染色
离心收集细胞(800rpm/min),以1mL的PBS洗细胞一次,加入500uLPBS含50ug/mL溴化乙锭(PI),100ug/mL RNase A, 4℃避光孵育20分钟。
(4)检测
以标准程序用流式细胞仪检测,汞激发波长488nm,计数8千个细胞,结果用软件WinMDI Version 2.9分析。
你这个实验如果只是做了PI单染,是不能得出这个结论的,只能说明S期比例减少。PI的染色结果不能说明动态原因。可能的原因既可以是G1阻滞,也可能是S期加速了。
所以要看具体的动态原因,必须做BrdU+PI的动态实验。你同时做几个盘子的细胞,BrdU 短暂染色后,在不同时间取样本上机检测。如果是G1阻滞,那BrdU 出现在S期和G2期的就会减少。
G1期 S期 G2期各占的比例啊
给我看一下吧,谢谢
流式细胞周期结果 怎么分析
这个是BrdU和7-AAD方法检测细胞周期。红色的gate就是G1期,绿色的就是S期,橙色的就是G2\/M期。BrdU, PI, 或者EdU方法和这个一样分析 如果单用PI等DNA染料染色,需要专业软件来分析计算了。比如这个图,是DNA染料单染,其中粉色部分是G1期,黄色部分是S期,绿色部分是G2\/M期。中间的分布一般是通过...
如何看流式细胞周期结果图?
流式细胞术分析细胞周期结果示图 首先来认识下图:1、纵坐标Cell Number:即计数到的有效细胞数;2、横坐标DNA Content:即DNA量,为什么用DNA量来区别各周期我们等下再讲;3、G1、G2、S三期在上图已经用箭头标示;4、右侧数字含义:Mean G1=195.4即G1期DNA含量平均值为195.4;%G1=73.6即G...
实验技巧:流式细胞仪细胞周期结果分析
S期:DNA、组蛋白合成。G2期:S期结束后到有丝分裂开始。此阶段反映了细胞的增殖活性,特别是G2期、S期。二者有无差别要进行统计检验。细胞周期阻滞:细胞总是处于从G1、S、G2 和M期的连续的细胞周期中。细胞周期的各阶段,细胞分别进行着DNA复制、蛋白质合成及细胞分裂等重要的生理活动。每一阶段都...
流式细胞术测细胞周期的图怎么看
流式的图千差万别。一般是散点图和柱状图两种形式。散点图看的是两个指标的相对关系,而柱状图看的是一个指标。数值越大的,说明该指标的荧光强度越大。再具体的,就要根据具体的图来说了。你把结果贴一下看看。
肿瘤细胞细胞周期的分布比例一般是多少
流式细胞术(FCM)可用于测定细胞周期各时期细胞的百分比。其主要原理是应用能与DNA结合的荧光探针,通过测定细胞群体中每个细胞的DNA含量,得出各时期细胞的比例。下图甲表示一个细胞周期,其中分裂间期包含G1、S、G2三个阶段(G1期主要合成一些RNA和与DNA复制相关的蛋白质,G2期主要合成另一些RNA和分裂期...
流式细胞检测周期结果怎么认定G2\/M期阻滞
一般是你用BrdU或者EdU加PI染色做的实验,样本是BrdU\/EdU pulse后每隔一段时间收集一个。检测样本后,如果发生了G2\/M期的阻滞,则G2\/M期的那个群会越来越多。而G1期会越来越少。S期的变化取决于起始时G1的比率和细胞周期的快慢。有可能变少,也有可能变化不大。如果变化不大,就需要再延长样本的...
新手流式细胞周期flowjo分析求助
如果是PI单色流式分析细胞周期,应该如下几个步骤:第一,在FSC-A\/SSC-A散点图上划出细胞门,排除细胞碎片和大的团块。第二,把第一步得到的细胞群在SSC-W\/SSC-H散点图上划出单细胞门,特点是SSC-W比较窄。第三,把第二步得到的单细胞在FSC-W\/FSC-H散点图划出更进一步的单细胞门。第四,...
流式细胞仪检测细胞周期DNA含量结果图怎样分析和说明
流式细胞仪检测细胞周期DNA含量结果图怎样分析和说明 已经做完流式,看到结果却不知该怎样分析了。我用的是AnnexinV-FITC 凋亡试剂盒 ,AnnexinV\/PI双染检测细胞凋亡。请教各位,凋亡散点图中第1,2,4象限到底分别代表什么细胞?手里的资料说法都不相同。试剂盒说明书:1代表细胞收集过程中机械性损伤...
细胞周期 流式结果怎么解释
只能说明S期比例减少。PI的染色结果不能说明动态原因。可能的原因既可以是G1阻滞,也可能是S期加速了。所以要看具体的动态原因,必须做BrdU+PI的动态实验。你同时做几个盘子的细胞,BrdU 短暂染色后,在不同时间取样本上机检测。如果是G1阻滞,那BrdU 出现在S期和G2期的就会减少。
流式细胞术检测细胞周期和凋亡
PI法是经典的周期检测方法,PI为插入性核酸荧光染料,能选择性的嵌入DNA和RNA双链螺旋的碱基之间与之结合,其结合量与DNA含量成正比,用流式细胞仪分析,可以得到细胞周期各阶段的DNA分布状态,从而计算出各期的百分含量。实验流程:贴壁细胞和悬浮细胞的检测流程基本相同。首先,对细胞进行培养刺激,然后...
泊娥腹膜: 博凌科为解答:FCM数据的存贮的方式是FCS2.0(flow cytometry standard),采用列表排队(List Mode)方式.易于加工处理分析,但缺乏直观性,数据的显示通常有一维直方图、二维点图、等高线图、密度图等几种;由数据还可以做出标准曲...
康乐县19186046875: 请教细胞周期分析原理和分析结果解释 - ?
泊娥腹膜: 博凌科为生物科技-为你解答:1、细胞周期指由细胞分裂结束到下一次细胞分裂结束所经历的过程,所需的时间叫细胞周期时间.可分为四个阶段(见图):① G1期(gap1),指从有丝分裂完成到期DNA复制之前的间隙时间;② S期(...
康乐县19186046875: 流式细胞仪测细胞周期图怎样分析 - ?
泊娥腹膜:[答案] (1)细胞培养取对数生长期的细胞,按1X106个/mL以1mL体积接种于6孔板内.培养24h后,加入不同浓度样品.在37 ℃、5 % 的CO2恒温箱中培养24h后终止.(2)细胞固定胰酶消化并离心收集细胞(800rpm/min),弃上清,用...
康乐县19186046875: 细胞周期数据分析求助 - ?
泊娥腹膜: 细胞周期至少有两种做法,最常见的如下图分析:这个是BrdU和7-AAD方法检测细胞周期.红色的gate就是G1期,绿色的就是S期,橙色的就是G2/M期.BrdU, PI, 或者EdU方法和这个一样分析 如果单用PI等DNA染料染色,需要专业软件来分析计算了.比如这个图,是DNA染料单染,其中粉色部分是G1期,黄色部分是S期,绿色部分是G2/M期.中间的分布一般是通过FlowJo这样的软件计算自动生成的.
康乐县19186046875: bd流式细胞仪ros结果分析怎么看 - ?
泊娥腹膜: 你是做的荧光染色看ROS水平吧.说的具体一些.一般就是荧光强度越高,代表ROS的水平越高.看你用的哪种染料了.
康乐县19186046875: 怎样利用流式细胞仪分析细胞存活率、细胞周期和ROS??
泊娥腹膜: 1 测定细胞存活率1.1取对数生长期的细胞,均以4*105/mL 密度接种于6孔细胞培养板上;1.2培养过夜后,用相应药物处理细胞;1.3 消化收集细胞,包括培养液中悬浮的死细胞;1.4 300g离心5 min,去上清;1.5 加1mL PBS缓冲液重悬细胞,...
康乐县19186046875: 流式细胞仪检测周期post - g2是哪个峰 - ?
泊娥腹膜: 正常的细胞周期是没有所谓post-G2的,所以也不存在这个峰.有些肿瘤细胞带有高于正常细胞DNA的量,在图上显示为大于G2期的DNA含量,或者有多倍体发生.
康乐县19186046875: 怎样用modfit分析细胞周期 - ?
泊娥腹膜: 采用PI染色法,以流式细胞术通过检测DNA含量分析细胞凋亡,比较ModFit LT及CELLQuest软件的分析数据.结果显示:ModFit LT与CELLQuest软件均可分析细胞凋亡,ModFit LT软件更客观、准确.我们建议使用ModFit LT软件进行细胞凋亡相对定量分析,CELLQuest软件只用于细胞凋亡的定性分析.
康乐县19186046875: 【求助】流式细胞仪检测细胞凋亡结果该怎样分析 - ?
泊娥腹膜: 已经做完流式,看到结果却不知该怎样分析了.我用的是AnnexinV-FITC 凋亡试剂盒 ,AnnexinV/PI双染检测细胞凋亡.请教各位,凋亡散点图中第1,2,4象限到底分别代表什么细胞?手里的资料说法都不相同.试剂盒说明书:1代表细胞收集过...
康乐县19186046875: 如何分析流式细胞结果分析凋亡二维点图 - ?
泊娥腹膜: 流式细胞仪(Flow cytometer )是对细胞进行自动分析和分选的装置.它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量,并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来.多数流式细胞计是一种零分辨率的仪器,它只能测量一个细胞的诸如总核酸量,总蛋白量等指标,而不能鉴别和测出某一特定部位的核酸或蛋白的多少.也就是说,它的细节 分辨率为零.