流式细胞术检测细胞周期和凋亡
实验流程：贴壁细胞和悬浮细胞的检测流程基本相同。首先，对细胞进行培养刺激，然后去除培养基，加入胰酶消化细胞。消化结束后，加入含血清的培养基终止胰酶消化，并将细胞重悬转移至离心管中。接着进行离心，去除上清，加入75%酒精重悬固定细胞，放入4℃冰箱中固定过夜。再次离心，去除上清，加入PBS洗3次，加入PI染色液，37℃染色30min。最后，将细胞上流式细胞仪检测。
细胞凋亡检测：细胞凋亡的早期就有细胞膜表面破损发生，破损时凋亡细胞表面的磷脂腺丝氨酸(PS)可以从细胞内膜翻转至细胞的外膜。该过程发生在DNA片段化之前，检测PS的表达，能反映早期凋亡。AnnexinV是Ca2+依赖的磷脂结合蛋白，对PS有很高的亲和性，并且可以与暴露于细胞外的PS相结合。利用这一原理，可以将AnnexinV标记荧光来识别早期的细胞凋亡。通常利用AnnexinV-FITC和碘化丙啶(PI)来区分凋亡和坏死细胞。PI的膜通透性很差，因而只能标记坏死的细胞。
实验流程：贴壁细胞和悬浮细胞的检测流程基本相同。首先，对细胞进行培养刺激，然后去除培养基，加入胰酶消化细胞。消化结束后，加入含血清的培养基终止胰酶消化，并将细胞重悬转移至含培养上清的离心管中。接着进行离心，去除上清，加入binding buffer重悬细胞，重复该步骤一次。然后，将细胞加入AnnexinV和PI染色液，轻轻混匀后室温避光孵育15min。再次离心，去除上清，加入PBS重悬细胞，立刻上流式细胞仪检测。
流式细胞分析术的发展历史
他们在1967年研制出流液束、照明光轴、检测系统光轴三者相互正交的流式细胞计的基础上，首次用荧光Feulgen反应对DNA染色显示出DNA的活性与荧光之间存在着线性关系，并在DNA的直方图上清楚地显示出细胞周期的各个时相。Gohde 和Dittrich接着把这项技术推向实用，他们用流式细胞术测定细胞周期借以研究细胞药代...
流式细胞周期为什么是400和200
你是做的PI单染细胞周期吧，一般都是调节电压，使G1期位于一个整数值，而G2正好就位于这个数值的倍数上，你说的200,400就是一个情况，也可以100,200这样。只要分得开，看得清楚就可以了。数值其实都是相对值，无所谓是多少。
流式细胞仪检测项目
细胞内部钙离子浓度，直接加钙离子浓度荧光染料染色；细胞内部线粒体膜电位，比如JC-1，罗丹明染料；使用微球阵列，可以同时检测溶液中数十种可溶性蛋白的浓度。流式细胞仪的科研应用：主要有细胞动力学功能研究、环境微生物分析、流式细胞术与分子生物学研究。流式细胞仪检测方法 1、直接免疫荧光标记法 取...
流式细胞术的背景历史
他们在1967年研制出流液束、照明光轴、检测系统光轴三者相互正交的流式细胞计的基础上，首次用荧光反应对DNA染色显示出DNA的活性与荧光之剑存在着线性关系，并在DNA的直方图上清楚地显示出细胞周期的各个时相。Glhde和Dittrich接着把这项技术推向实用，他们用流式细胞术测定细胞周期借以研究细胞药代动力学...
流式怎么造句
1、 方法用流式细胞检测技术，分组检测冷保存时和热缺血时的肝细胞凋亡率与增殖率。2、 用倒置显微镜观测细胞的形态学改变，分别用MTT、流式细胞术检测细胞的生长活性及细胞周期的改变。3、 方法采用流式细胞术检测精子中的芳香化酶水平，以SPA试验检测精子的受精力、三色法染色观察顶体反应率。4、 ...
怎样用modfit分析细胞周期
采用PI染色法,以流式细胞术通过检测DNA含量分析细胞凋亡,比较ModFit LT及CELLQuest软件的分析数据.结果显示:ModFit LT与CELLQuest软件均可分析细胞凋亡,ModFit LT软件更客观、准确.我们建议使用ModFit LT软件进行细胞凋亡相对定量分析,CELLQuest软件只用于细胞凋亡的定性分析.
edu实验结果怎么看
可以使用以下公式计算增殖速率：增殖速率等于终点细胞数减去起始细胞数后除以起始细胞数再乘以百分之100，例如，如果起始细胞数为100个，终点细胞数为200个，则增殖速率为200减去100后除以100乘以百分之100等于百分之100。3、细胞周期分析：细胞周期是细胞增殖的重要指标之一。可以使用流式细胞术来分析细胞周期...
细胞周期检测方法即PI法的操作步骤
3. 细胞染色：1500rpm离心5min，弃上清，以3mL的PBS洗涤一次，加入400uL溴化乙锭（PI，50ug\/mL），100ul RNase A（100ug\/mL ），4℃避光孵育30min。4. 流式分析： 以标准程序用流式细胞仪检测，一般计数2~3万个细胞，结果用细胞周期拟和软件ModFit分析。细胞周期是指能持续分裂的真核细胞从一次...
stk1 细胞周期分析 1.22怎么样
HeLa细胞21小时.不同类型细胞的G1长短不同,是造成细胞周期差异的主要原因.3、流式细胞结果图各参数的意义：前面讲过,常用的流式细胞术分析细胞周期的方法是依据细胞DNA含量（横坐标）来分析的：G1期：细胞DNA复制还没有开始,也是DNA含量最少的,即流式检测结果图的第一个峰；S 期：...
流式细胞术简称FCM,是利用流式细胞仪对特定的细胞群加以分选的多参数计...
（1）图甲中对细胞进行放射性同位素标记，研究DNA含量变化，应选择标记胸腺嘧啶（或T）．（2）据图甲分析，AB段DNA含量为2N，表示G1期，BC段DNA含量为2N→4N，表示S期，CA段DNA含量为4N，表示分裂期，则一个完整的细胞周期的表示方法 A→A，其中代表S期的是BC段，加入试剂抑制DNA的复制，则相关...
住若来曲：[答案] 你是用AnnxinV/PI双染来检测凋亡的吗?PBS似乎不能处理掉自发荧光的问题,你查询一下阿霉素和PI的激发波长和发射波长是否完全一致,若不一致就不会影响,但是一致的话就会有影响.但是药物染的是胞质而PI染的是细胞核,所以还是可以从形...
滨江区15150705702： 流式细胞术 细胞凋亡 和周期有什么区别吗?原理有什么不一样啊? - ？
住若来曲： 凋亡主要染ps和核,看象限.周期是看dna含量多少.周期要用酒精固定 凋亡不用固定.周期也能用pi染,凋亡也不一定用pi染.
滨江区15150705702： 流式检测细胞周期都有哪些染色方法 - ？
住若来曲： 从分类上来说,一般有两类:第一类是只染DNA.这类方法比较简单,用酒精固定细胞后,直接加含有RNA酶的荧光染料,比如PI等,然后就可以直接上机. 第二类另外加了一个步骤,在细胞培养液中加入核苷酸的模拟物,比如BrdU或者EdU.细胞新合成的DNA上就会有这些物质.在不同时间点收集细胞,用DNA染料染DNA的同时,还以用抗体或者化学发光法染核苷酸模拟物也发荧光.这个方法的有点就是不仅可以像第一类方法一样,看到处于细胞周期各个期的百分率,另外还可以看到有多少DNA是新合成的.是一个动态的过程.
滨江区15150705702： 流式细胞测凋亡率.数据中哪个代表凋亡率?本人菜鸟一枚,完全不懂,这个图是啥意思啊?P1 P2 P3 分别代表什么? - ？
住若来曲：[答案] 你做的是annexin V 和PI双染吧. FITC代表的是annexin V 染色, 代表早期凋亡,PI 单染,代表死亡的细胞,双染阳性的是正在凋亡的细胞. 所以,Q2+ Q4就是所有凋亡的细胞
滨江区15150705702： 流式细胞仪检测细胞凋亡,单染可以检测出细胞凋亡率吗? - ？
住若来曲： 用PI单染就可以,PI是用来测细胞周期的,在单倍体峰前如果有个亚峰则表明有凋亡,但是这个方法不是很好,坏死细胞也会包含在内.准确地说用PI单染测出的凋亡率应该是死亡细胞占细胞总数的比例.建议用AnexinV和PI双染,PI阴性和AnexinV阳性区是真正凋亡的细胞.细胞早期凋亡时,内膜外翻,位于胞浆的磷脂酰丝氨酸转位至细胞表面,FITC标记的Anexin V能与其结合,而坏死细胞不具有该特点.
滨江区15150705702： 求流式细胞术做凋亡的操作步骤和注意事项 - ？
住若来曲： 博凌科为解答:仅供参考一下:流式样品的准备:DNA含量的测定:用本法可以测定细胞周期、细胞倍体和凋亡,在样品的制备中存在的问题主要是细胞的聚集和碎片,建议在固定细胞...
滨江区15150705702： 流式细胞术(FCM)可用于测定细胞周期各时期细胞的百分比.其主要原理是应用能与DNA结合的荧光探针,通过测定细胞群体中每个细胞的DNA含量,得... - ？
住若来曲：[答案] (1)G1→S→G2→M (2)胰蛋白酶 (3)2c~4c 4c 2c (4)1.53 (5)图“略”(细胞形态、纺锤体,染色体、基因需标注正确)
滨江区15150705702： 流式细胞仪可同时检测细胞增殖和凋亡吗 - ？
住若来曲： 可以的,只是不能用传统的annexin V来检测凋亡了,可以改成Brdu之类的其它试剂来检测吧,传统常规的annexin结合PI共染检测凋亡的话由于不能破膜,所以与常规破膜检测周期的PI试剂盒有冲突,所以得更换相关检测方法即可
滨江区15150705702： 通过流式细胞仪检测细胞周期及凋亡时,用绿色荧光激发后药物把细胞胞浆染成红色会对PI把细胞核中DNA染成？
住若来曲： 你是用AnnxinV/PI双染来检测凋亡的吗?PBS似乎不能处理掉自发荧光的问题,你查询一下阿霉素和PI的激发波长和发射波长是否完全一致,若不一致就不会影响,但是一致的话就会有影响.但是药物染的是胞质而PI染的是细胞核,所以还是可以从形态上区分
