流式fvd死活染色原理
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邱江18657994328问： 流式检测细胞周期都有哪些染色方法 - ？
壤塘县爱可回答： 从分类上来说,一般有两类:第一类是只染DNA.这类方法比较简单,用酒精固定细胞后,直接加含有RNA酶的荧光染料,比如PI等,然后就可以直接上机. 第二类另外加了一个步骤,在细胞培养液中加入核苷酸的模拟物,比如BrdU或者EdU.细胞新合成的DNA上就会有这些物质.在不同时间点收集细胞,用DNA染料染DNA的同时,还以用抗体或者化学发光法染核苷酸模拟物也发荧光.这个方法的有点就是不仅可以像第一类方法一样,看到处于细胞周期各个期的百分率,另外还可以看到有多少DNA是新合成的.是一个动态的过程.
邱江18657994328问： 流式细胞术检测活死细菌时效果很差,什么原因 - ？
壤塘县爱可回答： 流式细胞术检测活死细菌时效果很差,什么原因 1. 染色特异性差,这个最常见于PI+anexin V 双染的情况.其实没有方法可以特异性的染坏死细胞,就认为PI阳性的是,其实只要细胞膜通透性增高,就会PI阳性,没有特异性.另外anexin V阳性也不一定就是凋亡早期,任何干扰膜稳定性的操作,比如培养皿的刮取细胞,就可导致假阳性.所以,不管你用这个方法得到什么结论,都要用其他方法来证实.这个方法只是一个初步的筛选实验而已. 2. 假如你的结果是真的,那说明你收集细胞太晚了,细胞基本都死光了. 3. 细胞的死亡和凋亡无关.
邱江18657994328问： 细胞试验中流式细胞术是用来干什么的,怎么用? PBS溶液怎么配,请给出具体成分及用量. 谢谢大家!! - ？
壤塘县爱可回答： 流式的用处很多.原理就是激光-荧光. 细胞用荧光染色(可以是死细胞或者活细胞,染料可以是荧光代谢活性的或者是标记的抗体).然后依次快速通过机器的激光检测器.不同的机器装配有不同的激光,可多达4种.每秒可处理数千至数万的...
邱江18657994328问： 流式细胞仪的原理和操作过程 - ？
壤塘县爱可回答： 原理: 流式细胞仪可同时进行多参数测量,信息主要来自特异性荧光信号及非荧光散射信号.测量是在测量区进行的,所谓测量区就是照射激光束和喷出喷孔的液流束垂直相交点.液流中央的单个细胞通过测量区时,受到激光照射会向立体角...
邱江18657994328问： 请告诉我判断细胞死活的方法. - ？
壤塘县爱可回答： 鉴定细胞死活的方法 死活细胞的鉴定在生物学和医学上具有很重要的意义.细胞培养过程中要随时记录细胞的生长情况,需要经常测定细胞的存活率;在肿瘤细胞的研究中,为了检验各种药物对肿瘤细胞的杀伤力,也需要测定肿瘤细胞的存活率...
邱江18657994328问： 请问流式细胞仪检测细胞凋亡的原理是什么? - ？
壤塘县爱可回答： 一、原理 在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧.Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高...
邱江18657994328问： 流式细胞仪怎么用? - ？
壤塘县爱可回答： 流式细胞仪的结构 流式细胞仪是进行流式细胞分析的仪器,集电子、计算机、激光、流体理论于一体,被誉为试验室的“CT”.流式细胞术(Flow CytoMeter, FCM)是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手...
邱江18657994328问： 流式细胞仪的原理是什么? - ？
壤塘县爱可回答： 我简单说一下: 1. 首先,机器吸取细胞混悬液,射入由鞘液(一般都是磷酸盐缓冲液).由于鞘液的流速大,所以细胞混悬液通过轴流的形式在中央,一般是单个细胞排队的形式. 2. 然后细胞通过检测窗口.有激光束照射.一般细胞都经过荧光染色,被激光照射后,会有不同波长的激发光产生.机器设有检测器来探测激发光的强弱 3. 根据激发光的强弱,来判断细胞和染色物质的结合情况,从而得到要检测的结果(比如抗原量,DNA量,等等)
邱江18657994328问： 流式细胞用annexin v测死活细胞污染色细胞有什么用 - ？
壤塘县爱可回答： 你的阴性对照就是无任何染色的细胞. PI阳性对照,可以固定过的死细胞,可以保证都是PI阳性 Annexin阳性的细胞,用trypsin消化时间长一点(比如消化10分钟),大部分也是阳性的.这个也从一个侧面反映出该方法(Annexin V+PI)的非特异性很高. 上机先用阴性对照设置PMT的电压和gate.再用PI和Annexin单染的阳性细胞调节compensation.然后就可以检测双染的样本了.
邱江18657994328问： 流式细胞空白对照 阴性对照 阳性对照分别加什么东西,各自用来做什么 - ？
壤塘县爱可回答： 流式细胞仪检测的是相对值,所以必须要有各种对照来设定机器的参数和阈值.这个清单比较长.就你说的这三种,我可以展开说一下. 一般用荧光标记的抗体染色后,样本有可能会出现两个细胞群,一个阳性,一个阴性的,这样的很好判断....
