单克隆抗体第一次筛选的杂交瘤细胞具有产生特异性抗体的特点，为什么第二次筛选仍然选能产生特异性抗体的

单克隆抗体第一次筛选的杂交瘤细胞具有产生特异性抗体的特点，为什么第二次筛选仍然选能产生特异性抗体的~

单克隆抗体制备过程中，总共有两次筛选，第一次筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，两次筛选的原理和方法是不相同的。
第一次筛选的原理与方法：细胞融合后，杂交瘤细胞的选择性培养是第一次筛选的关键。普遍采用的HAT选择性培养液是在普通的动物细胞培养液中加入次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶核苷酸（T）。其依据是细胞中的DNA合成有两条途径：一条途径是生物合成途径（“D途径”），即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，为DNA分子的合成提供原料。在此合成过程中，叶酸作为重要的辅酶参与这一过程，而HAT培养液中氨基喋呤是一种叶酸的拮抗物，可以阻断DNA合成的“D途径”。另一条途径是应急途径或补救途径（“S途径”），它是利用次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸，两种酶缺一不可。因此，在HAT培养液中，未融合的效应B细胞和两个效应B细胞融合的“D途径”被氨基喋呤阻断，虽“S途径”正常，但因缺乏在体外培养液中增殖的能力，一般10d左右会死亡。对于骨髓瘤细胞以及自身融合细胞而言，由于通常采用的骨髓瘤细胞是次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶缺陷型（HGPRT）细胞，因此自身没有“S途径”，且“D途径”又被氨基喋呤阻断，所以在HAT培养液中也不能增殖而很快死亡。惟有骨髓瘤细胞与效应B细胞相互融合形成的杂交瘤细胞，既具有效应B细胞的“S途径”，又具有骨髓瘤细胞在体外培养液中长期增殖的特性，因此能在HAT培养液中选择性存活下来，并不断增殖。
第二次筛选的原理和方法：在实际免疫过程中，由于采用连续注射抗原的方法，且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞，因此，从小鼠脾脏中取出的效应B淋巴细胞的特异性是不同的，经HAT培养液筛选的杂交瘤细胞特异性也存在差异，所以必须从杂交瘤细胞群中筛选出能产生针对某一预定抗原快定簇的特异性杂交瘤细胞。通常采用有限稀释克隆细胞的方法，将杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔的细胞培养板上，使每一孔含一个或几个杂交瘤细胞（理论上30%的孔中细胞数为0时，才能保证有些孔中是单个细胞），再由这些单细胞克隆生长，最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩大培养。因此，单克隆抗体制备过程中，两次筛选的原理和方法是不相同的。

1种效B是只能产一种抗体，但你怎么能保证从小鼠体内抽出的效B只是唯一一种呢？也许你打乙肝抗原时，他感染过感冒，这样就会含有感冒的效B了，第二次筛选就是把其它效B与骨髓瘤融合的杂交瘤去掉
这样才能生产出纯净的单抗。

所谓四源杂交瘤细胞就是将能够分泌不同特异性的单抗进行第二次融合，形成四源杂交瘤细胞。但二次杂交的细胞可以分泌两套重链和轻链，这些重链和轻链可以随机组和。这样，其实就是一个排列组合问题。另外，要搞清楚什么叫双特异性，单特异性和无活性抗体。
应该可以产生1种双特异性抗体；6种单特异性抗体；3种无活性的抗体。

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广水市15011969797： 单克隆抗体的制备筛选出的杂交瘤细胞应该直接在体外培养还是注射到小 ？
彩裴可杰： 单克隆抗体制备有两种方法. 第一种方法是:增量培养法,即将杂交瘤细胞在体外培养,在培养液中分离单克隆抗体.该法需用特殊的仪器设备,一般应用无血清培养基,以利于单克隆抗体的浓缩和纯化. 第二种也是最普遍采用的方法是小鼠腹腔接种法.选用BALB/c小鼠或其亲代小鼠,先用降植烷或液体石蜡行小鼠腹腔注射,一周后将杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中去.通常在接种一周后即有明显的腹水产生,每只小鼠可收集5~10ml的腹水,有时甚至超过40ml.该法制备的腹水抗体含量高,每毫升可达数毫克甚至数十毫克水平.此外,腹水中的杂蛋白也较少,便于抗体的纯化.接种细胞的数量应适当,一般为500000/鼠,可根据腹水生长情况适当增减.

广水市15011969797： 单克隆抗体的制备过程中,经过第一次筛选,已经选出了杂交瘤细胞;还要进行第二次筛选,第二次筛选的目的是选出 - ？
彩裴可杰：[选项] A. 能产生所需抗体的杂交瘤细胞 B. 能增殖的杂交瘤细胞 C. 细胞周期长的杂交瘤细胞 D. 产生多种抗体的杂交瘤细胞

广水市15011969797： 单克隆抗体制备过程中第一步,需从几种细胞中筛选出杂交瘤细胞 - ？
彩裴可杰： 一般问这个问题之前都有一个限制条件,假设细胞都两两融合.这样就是从三种细胞中筛选出杂交瘤细胞.

广水市15011969797： 单克隆抗体中两次筛选分别是什么方法 - ？
彩裴可杰： 第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞,用连续注射抗原,下面具体介绍一下: 1、在实际免疫过程中,由于采用连续注射抗原的方法,且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞,因此,从小鼠脾脏中取出的效应B淋巴...

广水市15011969797： 利用细胞………单克隆抗体时有两次筛选,第一次筛选的目的是?第二次筛选的目的?过程中有两种酶是什么? - ？
彩裴可杰：[答案] 第一次是选出杂交瘤细胞,第二次是选择出具有能够产生特异性抗体的杂交瘤细胞.胰蛋白酶,

广水市15011969797： 如何筛选动物单克隆抗体 - ？
彩裴可杰： 单克隆抗体制备过程中,总共有两次筛选,第一次筛选出杂交瘤细胞,第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞,两次筛选的原理和方法是不相同的.第一次筛选的原理与方法:细胞融合后,杂交瘤细胞的选择性培养是第一次筛选的关键.普...

广水市15011969797： 杂交瘤细胞多次筛选,各有什么作用 - ？
彩裴可杰： 杂交瘤细胞多次筛选,各有什么作用 : 第一次筛选:产生特异性抗体B淋巴细胞,第二次筛选:杂交瘤细胞第三次筛选:产生单克隆抗体的杂交瘤细胞

广水市15011969797： 单克隆抗体需哪2次筛选? - ？
彩裴可杰：[答案] 第一次筛选是在两细胞融合后 目的是选出符合要求的杂交瘤细胞 而第二次筛选则是在杂交瘤细胞培养后 此次筛选则是为了选出能产生符合要求的单一抗体的杂交瘤细胞 就是这样 这些内容在高三生物课本第七十二页有详细叙述

广水市15011969797： 请回答有关单克隆抗体制备过程的问题:(1)生产单克隆抗体应用到了___、___等生物技术.(2)选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的___特点,又具备... - ？
彩裴可杰：[答案] (1)生产单克隆抗体应用到了细胞融合技术(将浆细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞)和细胞培养技术(体内培养和体外培养). (2)选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的迅速大量繁殖的特点,又具备淋巴细胞的分泌专一抗体的特点,经过选择...

广水市15011969797： 关于单克隆抗体的说法 不正确的事 - ？
彩裴可杰： 答案是:D. ①错,免疫的淋巴B细胞与骨髓瘤细胞融合后杂交细胞产生的抗体既有可能是单克隆抗体,也有可能是其他抗体; ②正确,单克隆抗体制备过程中经过两次筛选分别是:第一次筛选出杂交瘤细胞,第二次筛选出能产生特蒸发量抗体的杂交瘤细胞; ③错,单克隆抗体的含义是单个细胞经克隆后产生的抗体; ④错,单一的抗原进入动物体内后,从动物体内提取的抗体有多种; ⑤正确,这是单克隆抗体的特点.