单克隆抗体制备过程要用什么培养基筛选

作者&投稿:西星 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
制备单克隆抗体用于筛选的培养基含有什么~

HAT系次黄嘌呤(hypoxantin)、氨基蝶呤(aminopterin)和胸腺嘧啶脱氧核苷(thymidin)三种物质各英文首字之缀列,HAT培养基也就是指含有这三种物质的细胞培养基。对具有合成DNA原料的核苷酸的形成上,在细胞内具有起始合成途径(de novo pathway)和中间合成途径(salvage pa-thway)。由于氨基蝶呤可阻碍起始合成途径,所以培养基中含有它时,细胞便只有中间合成途径,所以必须供给核苷酸。至于缺失中间合成途径的细胞,可失去增殖能力臻于死亡。根据这一点,不仅把混存于细胞群中的正常细胞,通过试管内培养进行选择,例如嘌呤的中间合成途径缺失株和嘧啶的中间合成途径缺失株,由于可以互补,所以两者的杂种细胞,即使在氨基蝶呤的存在条件下也可以增殖。在这种情况下,利用HAT培养基可对杂种细胞进行选择。次黄嘌呤和胸腺嘧啶脱氧核苷可作为中间合成途径的原料而进行添加。

HAT选择培养基的作用是筛选出(杂交瘤细胞)。
HAT选择培养基含有次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶,其中氨基喋呤可阻断DNA合成的主要途径。主要途径阻断后,依靠应急途径即在HGPRT(次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶)和TK(胸苷激酶)作用下,利用胸腺嘧啶和次黄嘌呤合成DNA,缺少其中一种,DNA合成不能发生。用于杂交的骨髓瘤细胞系均由经有毒药物诱导而成选择产生的代谢缺陷型细胞,细胞内均无TK或HGPRT,所以单个或融合骨髓瘤细胞在HAT培养液中将死亡。B细胞虽然有HGPRT和TK,但在体外通常培养条件下,尤其是在单个细胞环境下难于长期存活和增殖传代。因此只有杂交瘤细胞才能在HAT培养液中生长繁殖

需要两次筛选。第一次,使用选择培养基,将杂交瘤细胞筛选出来。
第二次,需要进行克隆化培养和抗体检测。这一步在课本上没有介绍培养基,但是题目中涉及说是多孔培养基。


单克隆抗体的制备过程
杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖,并产生和分泌单克隆抗体。约1-2周,可见小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水,即可获得大量单克隆抗体。(2)体外培养法 将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。在培养过程中,杂交瘤细胞产生并分泌单克隆抗体,收集培养上清液,离心去除细胞及其碎片,即可获得所需要的单克隆抗体。但...

制备单克隆抗体的过程
(一)脾细胞 1.材料 (1)免疫过的血清抗体滴度高的Balb\/c鼠。 (2)1640培养液 单克隆抗体制备流程 (3)2.5%FCS-1640营养液 2.操作方法 (1)拉颈或用CO2处死小白鼠。 (2)将小鼠放于70%酒精中浸泡消毒,取出固定于板上,在无菌条件下取脾。 (3)把脾放入5ml含有2...

制备单克隆抗体过程,是需要两次筛选还是三次筛选?为什么?
第一步是筛选出可以产生抗体的浆细胞,第二步是选杂交瘤细胞,第三步是选能大量产生抗体的杂交瘤细胞。有时只考两步,就只填后面两步便可

单克隆抗体制备的基本原理与过程?有什么意义
(2)体外培养法 将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。在培养过程中,杂交瘤细胞产生并分泌单克隆抗体,收集培养上清液,离心去除细胞及其碎片,即可获得所需要的单克隆抗体。但这种方法产生的抗体量有限。各种新型培养技术和装置不断出现,大大提高了抗体的生产量。单克隆抗体制备的意义:用于以下各种生命科学...

简述单克隆抗体的制备过程
5.对上述杂交瘤细胞还需进行克隆化培养和抗体检测,经多次筛选,就可获得足量的能分泌所需抗体的细胞;6.最后,将杂交瘤细胞在体外条件下做大规模培养,或注射到小鼠腹腔内增殖,这样,从细胞培养液或小鼠腹水中,就可以提取出大量的单克隆抗体了!

单克隆抗体制备过程有哪几步?请精炼概括。
单克隆抗体的制备步骤:1、抗原制备;2、免疫动物;3、免疫脾细胞和骨髓瘤细胞的制备;4、细胞融合;5、杂交瘤细胞的选择培养;6、杂交瘤细胞的筛选;7、杂交瘤细胞的克隆化;8、单克隆抗体的检定;9、分泌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立;10、单克隆抗体的大量制备。

单克隆抗体是什么
与传统的多克隆抗体相比,单克隆抗体的优点在于其结构单一性和特异性强。研究者可以选择性地制备针对某一特定生物分子的单克隆抗体,进而精确监测、分离这些分子,以及开发新的药物和治疗方法。2、制备单克隆抗体的方法制备单克隆抗体的方法通常包括以下几个步骤:首先,通过免疫动物(如鼠、兔)注射目标抗原...

制备单克隆抗体过程中要用到那些技术
制备单克隆抗体主要是要得到杂交瘤细胞,杂交瘤细胞是免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞杂交得到的,所以这里利用了动物细胞培养、动物细胞融合,然后就是对杂交瘤细胞的筛选,这里就没有什么技术了!

如何理解人教版选修三单克隆抗体制备过程示意图
单克隆抗体的制备过程:1、免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性Balb\/c小鼠,按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官,刺激相应B淋巴细胞克隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞。2、细胞融合 ...

单克隆抗体的制备步骤
过程 1)免疫脾细胞的制备 制备单克隆抗体的动物多采用纯系 Balb\/c小鼠。免疫的方法取决于所用抗原的性质。免疫方法同一般血清的制备,也可采用脾内直接免疫法。2)骨髓瘤细胞的培养与筛选 在融合前,骨髓瘤细胞应经过含8-AG的培养基筛选,防止细胞发生突变恢复HGPRT的活性(恢复HGPRT的活性的细胞不能...

集贤县19840358812: 根据培养基的用途分类该怎么分?另:制备单克隆抗体的过程中使用的培养基应该怎么分类?请详细归纳. -
泷美咳喘:[答案] 用途分类为鉴别培养基和选择培养基. 制备单抗用(液体培养基,选择培养基,合成培养基)

集贤县19840358812: 单抗制备中的培养基是什么,怎么选择 -
泷美咳喘: 单克隆抗体,是动物细胞,所以就是培养动物细胞所需要的培养基,选择就是根据相应的抗原去刺激,活下来的就是需要的!!

集贤县19840358812: 单克隆抗体中两次筛选分别是什么方法 -
泷美咳喘: 第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞,用连续注射抗原,下面具体介绍一下: 1、在实际免疫过程中,由于采用连续注射抗原的方法,且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞,因此,从小鼠脾脏中取出的效应B淋巴...

集贤县19840358812: 如图是单克隆抗体制备流程阶段示意图,请据图回答以下问题:(1)___技术是单克隆抗体技术的基础.(2)图中HAT培养基属于___培养基,用于筛选出杂... -
泷美咳喘:[答案] (1)动物细胞培养技术是单克隆抗体技术的基础. (2)图中HAT培养基属于选择性培养基用于筛选出杂交瘤细胞. (3)单克隆抗体与常规的血清抗体相比.最大的优势在于特异性强,灵敏度高,可大量制备. (4)动物细胞融合除了采用植物细胞原生质...

集贤县19840358812: 制备单克隆抗体,选择培养基要选择融合的() - 上学吧继续教育考试
泷美咳喘: 融合细胞需要用什么培养基进行筛选 单克隆抗体制备过程中,骨髓瘤细胞和b淋巴细胞融合后,要用特定的培养基筛选出杂交瘤细胞. 筛选得到的杂交瘤细胞还需进行克隆化培养和抗体检测,经多次筛选,就可获得足够数量的能分泌所需抗体的...

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