[水中细菌总数的检测原版]细菌总数检测

作者&投稿:劳园 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
~ 水中细菌总数的检测

一.目的与要求

了解水细菌学检测的卫生学意义和基本原理,学习和掌握检验水中细菌总数的方法,以评价水体的质量,确保饮水和用水的卫生和安全。

二.实验原理

生活饮用水及其水源水等水体受到生活污水、工农业废水或人和动物粪便的污染后,水中的细菌数量可大量增加,其中病原菌也随之增加,引发传染,危害人类健康,因而水中细菌总数和大肠菌数量可反映水体受微生物污染的程度。水中细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相关。故水的细菌学检验对了解水体被污染的程度,在流行病学和提供水质标准中具有重要意义和价值,它是评价水质污染程度的重要指标之一。。

细菌总数是指1mL 水样在营养琼脂培养基中,于37℃经24h 培养后,所生长的细菌菌落的总数(CFU )。我国生活饮用水卫生标准中规定生活饮用水的细菌总数1mL 中不得超过100CFU 。

三.材料与方法

1. 材料

① 营养琼脂培养基 ② 2216E 培养基:配方如下:蛋白胨 50g 、酵母膏 1.0g 、FePO 4 0.01g、琼脂 18.0g 、蒸馏水 1000mL 、pH 值7.6-7.8。 2. 方法

水中细菌总数的平板计数测定方法。 3. 仪器

高压蒸汽灭菌锅;9cm 培养皿;1mL 、5mL 移液管;45mL 烧杯;250mL 三角瓶

四.实验步骤

1. 水样的采集

① 自来水:先将自来水龙头用火焰灼烧3min 灭菌,再打开水龙头是水流5min 后,以灭过菌的三角瓶接取水样,以待分析。

若水样内含有余氯,则采样瓶在为灭菌前按采500mL 水样加3%硫代硫酸钠(Na 2S 2O 3·5H 2O 溶液1mL 的量,预先加入采样瓶内,用以采样后中和水样内的余氯,以防止余氯的杀菌作用。

② 江水、河水、湖水、塘水、水库等水源水:可应用采样器,器内的采样瓶应先灭菌。采样时,将采样器置于水体中所置的深度,水即注入采样瓶中。待注满后取出水面,立即送检,一般不应超过4h ,否则需放入冰箱中保存,但不能超过24h 。 2. 水样的稀释

根据水被污染的程度的不同,按无菌操作做10倍系列稀释。 3. 细菌总数的测定 (1)自来水:

①用灭菌移液管吸取1mL 水样,注入灭菌培养皿中。

②分别倾注15mL 已融化并冷却到45℃左右的灭菌营养琼脂培养基,并立即在桌面上作平面旋摇,使水样与培养基充分混匀。

③另取一空的灭菌培养皿,倾注45℃左右的灭菌营养琼脂培养基15mL ,作空白对照。 ④培养基凝固后,倒置于37℃温箱中,培养24h ,进行菌落计数。两个平板的菌落数平均值即为1mL 水样的细菌总数。

(2)水源水

①稀释水样:取4个灭菌试管,分别加入4.5mL 灭菌水。取0.5mL 水样注入盛有4.5mL 灭菌水的第一试管中,摇匀成10-1稀释液,再从第一试管取0.5mL 至下一试管灭菌水中,如此稀释到第三试管,稀释度分别为10-1,10-2,10-3。稀释倍数看水样污染程度而定,以培养后平板的菌落数在30-300个为最合适。若三个稀释度的菌落数都多到或少到无法计数,则需加大或减少稀释倍数。一般中等污染的水样,取10-1,10-2,10-3三个稀释度,污染严重的取10-2,10-3,10-4三个连续稀释度。

②自最后两个稀释度的试管中各取1mL 稀释水样加入空的灭菌培养皿中,每一稀释度做两个培养皿。

③各倾注15mL 已融化并冷却到45℃左右的灭菌营养琼脂培养基,立即放在桌面上摇匀。 ④凝固后倒置于37℃培养箱中培养24h 。

五.实验报告

(1)菌落数计算原则

记录各平皿的菌落数后,计算相同稀释度的平均菌落数,供下一步计算用。若其中一个平板有较大片状菌苔生长时,则不应采用,而应以无片状菌苔生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌苔的大小不到平皿的一半,而其余的一半菌落分布有很均匀时,则将此一般菌落数乘2以代表平板的全部菌落数,然后再计算该稀释度的平均菌落数。 (2)细菌总数计算方法:按已获得的同稀释度的平均菌落数的不同情况进行计算。

①首先选择平均菌落数在30-300之间,查表进行计算。当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时,则以该平均菌落数乘其稀释倍数,报告该水样的细菌总数(表1例1)。

②若有两个稀释度,其平均菌落数均在30-300之间,则应按两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于2应报告两者的平均数,若大于2则报告其中较小的菌落总数(表1例2及例3)。

③若所有稀释度的平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(表1例4)

④若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(表1例5)

⑤若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300之间,则以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(表1例6)

(3)报告水样品中细菌总数。从水质细菌检测结果,分析饮用水、水源水是否符合标准。 (4)水的细菌学检测中应注意哪些关键事项?

六.注意事项

(1) 严格无菌操作,防止污染。

(2) 注意正确培养方法。


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5个菌落什么意思
对生活饮用水,直接吸取1ml水样于平皿中,加入营养琼脂后混匀,37℃培养24h,进行计数。对水源水,根据情况对样品进行10倍梯度稀释,选择适宜稀释液1ml,加注平皿,营养琼脂混匀,37℃培养24h,进行计数。按照规定格式报告每毫升水中细菌总数。(二)总大肠菌群的检测:国家标准中,利用总大肠菌群作为...

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