单克隆抗体提纯实验
在进行单克隆抗体提纯实验时，首先需要准备一系列溶液，包括20mMol/L的pH7.8~7.9 Tris—HCl缓冲液（分别配制40mMol/L和80mMol/L的NaCl浓度）以及饱和硫酸铵液和DEAE—纤维素柱。实验步骤如下：
1. 将小鼠腹水用冷PBS液稀释四倍后，进行30分钟的1.00×105转离心，去除沉淀。
2. 在4℃下，将上清液缓慢加入饱和硫酸铵液，边加边搅拌，最终使溶液浓度达到50%。随后在冰中静置30到60分钟，再次离心10分钟，丢弃上清液。
3. 将沉淀用40mMol/L的Tris－HCl缓冲液溶解（可能产生浑浊），然后装入透析袋，置于20mMol/L的Tris－HCl缓冲液中透析以去除盐分。
4. 经过离心去除沉淀后，对稀释后的溶液（一般1:100或更高比例）进行280nm的蛋白含量测定，通常1A280 unit对应0.8mg蛋白质。腹水中每毫升含有25mg~36mg总蛋白。
5. 接下来是过DEAE—纤维素柱的步骤。将纤维素柱用20mMol/L NaCl Tris缓冲液平衡。样品需要以Tris缓冲液稀释后慢慢加入柱床，以NaCl的线性梯度进行洗脱。大部分单克隆IgG会在40mMol/L和80mMol/L的NaCl洗脱，但也有极少数会在120mMol/L~150mMol/L的浓度下被分离。收集OD280nm下的蛋白峰，单克隆IgG被保留，以备后续使用。
杂交瘤产生的免疫球蛋白类型主要为IgG和IgM，这取决于抗原的免疫程序。如果免疫一次且在3天后取脾，通常会得到产生IgM的B淋巴细胞。多次免疫的动物则倾向于产生IgG。
扩展资料
动物脾脏有上百万种不同的B淋巴细胞系，具有不同基因不同的B淋巴细胞合成不同的抗体。当机体受抗原刺激时，抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的B细胞。被激活的B细胞分裂增殖形成效应B细胞（浆细胞）和记忆B细胞，大量的浆细胞克隆合成和分泌大量的抗体分子分布到血液、体液中。如果能选出一个制造一种专一抗体的浆细胞进行培养，就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群，即单克隆。单克隆细胞将合成针对一种抗原决定簇的抗体，称为单克隆抗体。
纯化效果最好的单克隆抗体提纯方法是
以下是几个常用的基于渐进式纯化的单克隆抗体提纯方法：1、亲和层析：利用抗体特异性识别作用分离抗体。通常会使用吸附剂，例如蛋白A、蛋白G或蛋白L等针对抗体常见的重、轻链、Fc区等部位进行亲和层析。2、离子交换层析：利用分子中表面带电的残基与带相反电荷的离子交换基质相互作用，以特异性地纯化目标分...
单克隆抗体的纯化技术操作步骤?
其主要步骤如下：取1份预处理过的腹水加2份0.06mol\/L PH5.0醋酸缓冲液，用1mol\/L HCl调PH至4.8；按每毫升稀释腹水加11ul辛酸的比例，室温搅拌下逐滴加入辛酸，于30分钟内加完，4℃静置2小时，取出15000g离心30分钟，弃沉淀；上清经尼龙筛过滤（125um），加入1\/10体积的0.01mol\/L PBS，用...
单克隆抗体的提纯实验
1．材料(1)20mMol\/LpH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液20mMol\/LNaCl(2)20mMol\/LpH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液40mMol\/LNaCl(3)20mMol\/LpH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液80mMol\/LNaCl(4)20mMol\/LpH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液(5)饱和硫酸铵液(6)DEAE—纤维素柱2．操作方法（1）小鼠腹水用冷PBS液稀释4...
检验技师考点:单克隆抗体的制备原理
提纯的单克隆抗体,冷冻干燥保存于2～8℃，取出时溶解后，保存于2～8℃，至少一个月内可保持稳定。腹水抗体也可冷冻干燥低温(4℃)保存两年，融化后放置4℃下保存一个月。短期使用的腹水抗体，4℃3～4 个月仍保持稳定, 培养上清加0.1%NaN3，贮于-20℃，两年不失活性。;
单克隆抗体技术的原理、基本过程、意义及应用。
④将选择细胞进行规模培养或注射到小鼠腹腔内增殖(活体培养基)；⑤从细胞培养液或小鼠腹水中提取大量的单克隆抗体。单克隆抗体技术的重大意义在于可以用不纯的抗原分子制备特异性强、纯度高、均一性好的单克隆抗体。单克隆抗体的应用：①医学诊断；②抗原蛋白的提纯；③肿瘤的导向治疗和放射免疫显像技术。
单克隆抗体制备过程中两次筛选的作用分别是什么?
如果不进一步提纯，这样得到的是多克隆抗体。所以就有了第二次筛选。第二次筛选 要想获得单克隆抗体，所以必须得到由一个细胞分裂而成的一个细胞群，由这样的细胞群产生的抗体才是真正意义的单克隆抗体。(一)筛选的目的 筛选只针对某一种特定的抗原决定簇产生抗体的杂交瘤细胞，即得到由一个细胞分裂而...
单克隆抗体发展历史
单克隆抗体(Inonoclonal antihy , McA )是指一个B 淋巴细胞经无性繁殖成为一个细胞系,即一个克隆所分泌的针对单一抗原决定簇而组成均一的抗体。 单克隆技术是近20 年来发展起来的生物高科学技术,早在1975 年劫Her 和呱玩ein 便建立了B 淋巴细胞杂交瘤技术,并由此而荣获1984 年诺贝尔医学奖。抗体技术的发展历...
单克隆抗体主要作用是什么?
单克隆抗体是一种针对特定抗原表位的抗体。该抗体主要由具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞分泌。这种细胞需要与具有大量繁殖能力的骨髓瘤细胞融合，这样不仅能保留抗体的分泌能力，而且能达到大规模繁殖的目的。这种抗体必须经过免疫动物、细胞融合、选择性培养、杂交瘤阳性克隆的筛选克隆、单克隆抗体的大量制备...
单克隆抗体怎样提纯?杂交瘤细胞属于癌细胞的一种??
单克隆抗体不用提纯!因为那时利用体外细胞培养得道的!杂交瘤细胞是肿瘤细胞和效应B细胞的融合！当然算癌细胞
单克隆抗体在临床上的应用
1．检验医学诊断试剂 作为检验医学实验室的诊断试剂，单克隆抗体以其特异性强、纯度高、均一性好等优点，广泛应用于酶联免疫吸附试验、放射免疫分析、免疫组化和流式细胞仪等技术。并且单克隆抗体的应用，很大程度上促进了商品化试剂盒的发展。目前，应用单克隆抗体制作的商品化试剂盒广泛应用于： ①病原...
武欢奥力： 单克隆抗体的纯化现在有很多种方法,主要还是要根据你后面实验的需要选择合适的纯化方法!目前用的比较多的是辛酸-硫酸铵沉淀法!该方法较硫酸铵沉淀法来讲,纯化的效果更好并且单抗纯化后的效价不会受很大的影响,操作也相当简便...
大邑县18378634826： 有关单克隆抗体的问题 - ？
武欢奥力： Tris-HCL缓冲液就是用三羟甲基氨基甲烷和盐酸制备的缓冲液. 具体方法如下 Tris-盐酸缓冲液(20mMol/L,25℃) 50毫升0.1 mol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris)溶液与X毫升0.1 mol/L盐酸混匀后,加水稀释至100毫升. pH X (ml)ph7.80加13.8ml盐...
大邑县18378634826： 《单克隆抗体制备及纯化》 - ？
武欢奥力： 单抗的用途:单克隆抗体具有高度特异性、高纯度特点,使其在很大浓度范围内获得低背景,所以在组织免疫染色中特别有用,但是大多数单抗在深固定的组织中不能很好的与抗原反应.还可以应用于免疫沉淀,免疫印迹技术,虽然都具有特异...
大邑县18378634826： 如图是通过动物纤维母细胞等获得单克隆抗体的实验研究.据图回答相关问题.(1)上图单克隆抗体的制备过程中,运用了动物细胞工程中的___和___两大技... - ？
武欢奥力：[答案] (1)上图单克隆抗体的制备过程中,运用了动物细胞工程中的③动物细胞融合和②动物细胞培养两大技术.(2)①过程将已经分化的细胞培养成分化程度低的细胞过程,类似于植物组织培养技术中脱分化.与纤维母细胞相比,...
大邑县18378634826： 制备单克隆抗体的技术流程是怎样的呢? ？
武欢奥力： (一)抗原提纯与动物免疫 对抗原的要求是纯度越高越好,尤其是初次免疫所用的抗原.如为细胞抗原,可取1*107个细胞作腹腔免疫.可溶性抗原需加完全福氏佐剂并经...
大邑县18378634826： 有关单克隆抗体在单克隆抗体制备的实验中,大致过程是将抗原注射到小鼠体内,然后从小鼠脾脏中获得能够产生抗体的B淋巴细胞,然后与小鼠骨髓瘤细... - ？
武欢奥力：[答案] 1.这个B淋巴细胞就是效应B细胞,书上不是加了限定词么“能产生抗体的”2.LZ要明确一点,不是只要是融合的细胞,它就一定能表达,可能会因为诸多因素使得融合细胞不能分泌抗体,这是个复杂的过程.所以这一步是确定融合细胞...
大邑县18378634826： 单克隆抗体实验如图所示. 请回答下列问题: (1)小白鼠B淋巴细胞和骨髓瘤细胞能融合在一起 体现了细胞膜具有________的特点. (2) 制备单克隆抗体... - ？
武欢奥力：[答案] (1)一定的流动性(2)动物细胞融合、动物细胞培养 杂交瘤 体液(3)抗体是蛋白质,若口服则被消化,使抗体失去其功能(4)有丝加倍龙胆紫(5)无限增殖 产生单一抗体
大邑县18378634826： 单克隆抗体细胞的选择的实验步骤. - ？
武欢奥力： 1. 材料1) 小鼠(Balb/c或C57小白鼠)若干只.2) 11.6%蔗糖溶液(经10磅30min高压灭菌).2. 操作方法1) 拉颈处死小鼠.2) 70%酒精浸泡消毒10min.3) 用手copy术剪将小鼠腹部剪开一小口,剥开皮肤,露出腹腔.4) 用注射器将4ml ...
大邑县18378634826： 单克隆抗体的鉴定实验 - ？
武欢奥力： 1.杂交瘤细胞染色体的检查采用秋水仙素裂解法进行.2.单克隆抗体的类型、亚型的测定:购买兔抗小鼠Ig类型和亚型的标准抗血清,采用琼脂扩散法或ELISA夹心法测定单抗的Ig类型和亚型. ELISA夹心法测定单抗的Ig类型和亚型的试剂盒说明...
