单克隆抗体制备过程中两次筛选的作用分别是什么？

在制备单克隆抗体是为什么要进行两次筛选？~

第一次筛选：

（1）筛选对象：脾细胞、瘤细胞、脾-脾细胞、瘤-瘤细胞、脾-瘤细胞（即羊红细胞免疫过的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合后得到的细胞混合液）。另有少量多细胞聚体，因寿命短而迅速死亡，故无需特殊筛选。

（2）筛选方法：用HAT选择培养基筛选出正常生长的细胞。（注重：HAT培养基含有次黄嘌呤H、氨基喋呤A和胸腺嘧啶核苷T。其中氨基喋呤能阻断核酸合成的主通路，而次黄嘌呤在磷酸核糖转移酶HGPRT的催化下能合成RNA或胸腺嘧啶核苷在胸腺嘧啶核苷激酶TK的催化下合成DNA均属于核酸合成的旁通路。）

（3）筛选结果：脾-瘤细胞正常生长，其它细胞都会死亡。（析因：脾细胞和脾-脾细胞的核酸合成主通路被氨基喋呤阻断，虽有核酸合成的旁通路，但不能长期增殖；瘤细胞和瘤-瘤细胞缺乏核酸合成旁通路的酶，核酸合成主通路又被氨基喋呤阻断，因核酸合成障碍而死亡；脾-瘤细胞具有脾细胞的核酸合成旁通路酶，虽核酸合成主通路被氨基喋呤阻断，但可利用培养基中的次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷合成核酸而得以生存。）

第二次筛选：

（1）筛选对象：多克隆杂交瘤细胞群体。（即产生多种抗体的脾-瘤细胞混合群体。）

（2）筛选方法：抗体检测（ 如 免疫荧光技术、放射免疫技术等，实际上是利用稀释法，在聚乙烯微板孔内逐个杂交瘤细胞分开培养，然后检查每孔中产生特定抗体的能力）。

（3）筛选结果：产生专一性抗体的杂交瘤细胞。

在进行单克隆抗体实验时，第一次筛选的目的是为了把与骨髓瘤细胞结合的效应B细胞与其他普通的细胞分离开来，用的是特定的选择培养基。而第二次筛选是为了把我们真正需要的杂合效应B细胞提取出来。在我的印象中好像没有用到什么酶，筛选用的都是选择培养基。

第一次筛选:
首先在（效应）B淋巴细胞和骨髓瘤细胞进行杂交时可能出现的情况应该先弄清楚，（一）可能的情况有：
(1)（效应）B淋巴细胞和（效应）B淋巴细胞的融合
(2)
(效应）B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的融合（即杂交瘤细胞）
(3
)骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞的融合（即瘤瘤细胞）
(4
)单个骨髓瘤细胞
(5
)单个（效应）B淋巴细胞
（二）筛选的目的————获得杂交瘤细胞
（三）筛选的方法
用选择性培养基来完成，即HAT培养基。含有次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶，其中氨基喋呤可阻断DNA合成的主要途径。主要途径阻断后，依靠应急途径即在HGPRT（次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶）和TK（胸苷激酶）作用下，利用胸腺嘧啶和次黄嘌呤合成DNA，缺少其中一种，DNA合成不能发生。用于杂交的骨髓瘤细胞系均由经有毒药物诱导而成选择产生的代谢缺陷型细胞，细胞内均无TK或HGPRT，所以单个或融合骨髓瘤细胞在HAT培养液中将死亡。B细胞虽然有HGPRT和TK，但在体外通常培养条件下，尤其是在单个细胞环境下难于长期存活和增殖传代。因此只有杂交瘤细胞才能在HAT培养液中生长繁殖。所以通过以上方法可以选择出杂交瘤细胞，但虽然都是杂交瘤细胞，但可能是同一抗原的不同抗原决定基刺激产生的。所以产生抗体是不纯的。如果不进一步提纯，这样得到的是多克隆抗体。所以就有了第二次筛选。第二次筛选
要想获得单克隆抗体，所以必须得到由一个细胞分裂而成的一个细胞群，
由这样的细胞群产生的抗体才是真正意义的单克隆抗体。
(一)
筛选的目的
筛选只针对某一种特定的抗原决定簇产生抗体的杂交瘤细胞，即得到由一个细胞分裂而成的一个细胞群并且能产生所需抗体
（二）筛选的方法
(1)
分离单个细胞置入多孔培养板的每个孔中培养
(2)
利用抗原抗体杂交技术检测每孔细胞是否产生所注射抗原的抗体
我之前在北京新东方中小学一对一当高考生物的老师，所以对这些知识点真是很了解，新东
方一对一的老师真是不错，同学们要是学习上有苦难的话可以去新东方咨询看看~

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北塘区13850384425： 利用细胞………单克隆抗体时有两次筛选,第一次筛选的目的是?第二次筛选的目的?过程中有两种酶是什么? - ？
种饱怡宝：[答案] 第一次是选出杂交瘤细胞,第二次是选择出具有能够产生特异性抗体的杂交瘤细胞.胰蛋白酶,

北塘区13850384425： 单克隆抗体的制备过程中,经过第一次筛选,已经选出了杂交瘤细胞;还要进行第二次筛选,第二次筛选的目的是选出 - ？
种饱怡宝：[选项] A. 能产生所需抗体的杂交瘤细胞 B. 能增殖的杂交瘤细胞 C. 细胞周期长的杂交瘤细胞 D. 产生多种抗体的杂交瘤细胞

北塘区13850384425： 单克隆抗体制备过程中两次筛选有什么区别?___. - ？
种饱怡宝：[答案] 单克隆抗体制备过程中共有2次筛选,一次筛选出杂交瘤细胞,第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞.这两次筛选的原理和方法不同:第一次筛选的原理是细胞中DNA合成有2种途径,方法是用选择培养基进行筛选;第二...

北塘区13850384425： 单克隆抗体制备过程中两次筛选有什么区别 - ？
种饱怡宝： 这好像是高中生物吧 先说骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合,共有3种情况,B淋巴和B淋巴融合,B淋巴和骨髓瘤细胞融合,骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞融合 第一次筛选是为了筛选出能无限增殖的细胞,这只有两种情况: 1、经过免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的融合细胞 2、骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞的融合细胞 第二次是为了筛选出能产生单克隆抗体的细胞 那么只可能是,经过免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的融合细胞. 所以有两次筛选

北塘区13850384425： 单克隆抗体两次筛选的理由? - ？
种饱怡宝： 第一2113次:筛选出AB型细胞(A:浆细胞,B:骨髓瘤细胞),不要AA、5261BB型. 第二次:筛选出有特异性的4102杂交瘤细胞,检验阳性.单克隆细胞特点:1653灵敏度高、特异性强、可大量制备 杂交瘤细胞特点:能体外大版量繁殖....忘记了...详细请看人教版生物权选修三

北塘区13850384425： 细胞工程中,制备单克隆抗体时,需要经过三次筛选检测,这三次的目的是什么? - ？
种饱怡宝：[答案] 记得只经过两次筛选 第一次是筛选杂交瘤细胞 第二次是筛选能够产生单一抗体的杂交瘤细胞 当筛选完毕就可以进行体内或体外培养了

北塘区13850384425： 为什么植被单克隆抗体要经过两次筛选 - ？
种饱怡宝： 第一次是筛选出杂交瘤细胞;但这些杂交瘤细胞中有些是不能产生抗体的,还有些是不能产生我们需要的抗体的;第二次就要筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞.

北塘区13850384425： 单克隆抗体中两次筛选分别是什么方法 - ？
种饱怡宝： 第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞,用连续注射抗原,下面具体介绍一下: 1、在实际免疫过程中,由于采用连续注射抗原的方法,且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞,因此,从小鼠脾脏中取出的效应B淋巴...

北塘区13850384425： 制备单克隆抗体过程,是需要两次筛选还是三次筛选?为什么? - ？
种饱怡宝： 两次. 第一次是筛选出杂交瘤细胞,第二次是筛选出能产生特异抗体的杂交瘤细胞.