紫外吸收法为什么能测定核酸的含量和纯度？
核酸、核苷酸及其衍生物的分子结构中的嘌呤、嘧啶碱基具有共轭双健系统（－C＝C一C＝C 一），能够强烈吸收250~280nm 波长的紫外光。核酸（DNA，RNA）的最大紫外吸收值在260nm 处。遵照Lambert-Beer 定律，可以从紫外光吸收值的变化来测定核酸物质的含量。
在不同pH 溶液中嘌呤、嘧啶碱基互变异构的情况不同，紫外吸收光也随之表现出明显的差异，它们的摩尔消光系数也随之不同。所以，在测定核酸物质时均应在固定的pH溶液中进行。
核酸的摩尔消光系数（或吸收系数），通常以ε（ρ）来表示，即每升含有一摩尔核酸磷的溶液在260nm 波长处的消光值（即光密度，或称为光吸收）。核酸的摩尔消光系数不是一个常数，而是依赖于材料的前处理、溶液的pH 和离子强度发生变化。它们的经典数值（pH = 7.0）如下：
DNA 的ε（ρ）= 6 000 ~ 8 000
RNA 的ε（ρ）= 7 000 ~ 10 000
小牛胸腺DNA 钠盐溶液（pH = 7.0）的ε（ρ）= 6 600，DNA 的含磷量为9.2%，含1μg/mL DNA 钠盐的溶液光密度为0.020。RNA 溶液（pH = 7.0）的ε（ρ）= 7 700~7 800，RNA 的含磷量为9.5%，含1μg /mL RNA 溶液的光密度为0.022~0.024。采用紫外分光光度法测定核酸含量时，通常规定：在260nm 波长下，浓度为1μg/mL 的 DNA 溶液其光密度为0.020，而浓度为1μg/mL 的RNA 溶液其光密度为0.024。因此，测定未知浓度的DNA （RNA）溶液的光密度OD260nm，即可计算测出其中核酸的含量。该法简单、快速、灵敏度高，如核酸3μg／mL 的含量即可测出。对于含有微量蛋白质和核苷酸等吸收紫外光物质的核酸样品，测定误差较小，若样品内混杂有大量的上述吸收紫外光物质，测定误差较大，应设法事先除去。
由于降解或水解作用，核酸的光密度可以增高约40％，这就是众所周知的增色效应（hyperchromic effect）。在大分子的核酸中，氢键和π-键相互作用改变了碱基的共振行为。因此，核酸的光密度低于构成它的核苷酸的光密度，该现象称为减色效应（hypochromic effect）。
蛋白质也有紫外吸收，通常蛋白质的吸收高峰在280nm波长处，在260nm处的吸收值仅为核酸的1/10或更低，因此对于含有微量蛋白质的核酸样品，测定误差较小。若待测的核酸制品中混有大量的具有紫外吸收的杂质，则测定误差较大，应设法除去。不纯的样品不能用紫外吸收值作定量测定。
从A260/ A280的比值可判断样品的纯度。纯RNA的A260/ A280≥2.0；DNA的A260/ A280≥1.8。当样品中蛋白质含量较高时，则比值下降。RNA和DNA的比值分别低于2.0和1.8时，表示此样品不纯。
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采用紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验原理：
（1）蛋白质可作定量分析的原因：蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，所以蛋白质溶液在275 280nm具有一个吸收紫外吸收高峰。在一定浓度范围内，蛋白质溶液在最大吸收波长处的吸光度与其浓度成正比，服从朗伯-比耳定律，因此可作定量分析。该法测定蛋白质的浓度范围为0.1—1.0mg/mL。
（2）此种方法测量的准确度差一点的原因：由于不同蛋白质中酪氨酸和色氨酸的含量不同，所处的微环境也不同，所以不同蛋白质溶液在280nm的光吸收职也不同。据初步统计，浓度为1.0 mg/mL的1800种蛋白质及蛋白质亚基在280nm的吸光度在0.3—3.0之间，平均值为1.25+/-0.51。所以此种方法测量的准确度差一点。
绿色蔬菜大棚里面怎么才能监控到二氧化碳的浓度呢?
用于测量二氧化碳气体的常见方法有以下几种。1、体积测量法 可以同时测定空气中氧的含量。这种方法不需要标准气校准,直接测定二氧化碳的体积含量。浓度低时由于体积测量误差较大而影响准 确度。测量时操作费时。2、滴定法 本法为监测环境空气中二氧化碳的推荐方法。它是用装有氢氧化钡溶液的砂芯吸收管采集...
采用紫外光吸收法测定样品的核酸含量,有何优点及缺点
所有对260nm附近波长的紫外线有显著吸收的物质都会干扰紫外线吸收法测定核酸的含量实验。实验中主要是蛋白质。用苯酚-氯仿-异丙醇法纯化核酸样品可以去除蛋白质。
当弱酸在强碱性介质和强酸性介质中吸收光谱的显著差异可以用紫外吸收...
在强碱性介质和强酸性介质中，弱酸具有不同的光谱吸收特性。在紫外吸收光度法中，可以通过测量不同波长下的吸光度，得到样品的吸收光谱。在强碱性介质中，弱酸通常以阴离子形式存在，结构比较稳定，电子云分布相对固定。因此，在紫外光谱中，主要表现出电子跃迁的吸收峰，其波长和强度与弱酸的分子结构密切...
紫外吸收法和相关红外法的原理是什么?
紫外吸收光谱法基本原理 一、电子跃迁 最常碰到的电子跃迁类型 二、发色团、助色团和吸收带 1、发色团 指具有跃迁的不饱和基团,这类基团与不含非键电子的饱和基团成键后,使化合物的最大吸收位于200nm或200nm以上,摩尔吸光系数较大(一般不低于5000),简单的生色团由双键或三键体系组成。现简要讨论含生色团...
双能X线吸收测量法是什么?
世界上第一台DEXA仪是由美国Hologic公司于1987年生产(QDR-1000型)的。 双能X线吸收测量法技术采用X线球管作为射线源，产牛两种不同能量的又线以消除软组织的影响，因而具有扫描时间短，分辨率高，检查精确度高、射线投照量小等特点，现已取代DPA而成为骨密度测定的常用方法。 实际上，DPA和DEXA直接测得...
红外吸收光谱法和紫外可见分子吸收光谱法的区别是什么?
红外吸收光谱法和紫外可见吸收光谱法都可以用于物质定性和定量的测定。只是所需要光谱不同。紫外：180~380，可见380~750，红外，750~2000 nm ， 所在的波段不同。红外吸收光谱法简称红外光谱法。通常红外吸收带的波长位置与吸收谱带的强度，反映了分子结构上的特点，可以用来鉴定未知物的结构组成或确定其...
紫外可见吸收光谱法测定互相干扰的两个组分的方法
紫外光可见吸收光谱法测定互相干扰的两个组分的方法如下：1、波长扫描法：这种方法是通过改变波长来扫描样品的紫外可见光谱。在扫描过程中，记录每个波长下的吸光度值，从而得到样品的吸收光谱。对于互相干扰的两个组分，可以通过比较它们的吸收光谱，选择合适的波长进行测定。2、系数校正法：这种方法是通过...
红外吸收光谱法的基本原理
红外吸收光谱法的优势在于其广泛的应用范围和特征性。除了光学异构体和长链烷烃同系物外，很少有化合物展现出完全相同的红外光谱。这种光谱是由分子不断的振动和转动运动产生的，它能够揭示大量的结构信息，被认为是进行基团诊断和结构鉴定的关键工具。进行红外吸收光谱测试的设备包括红外分光光度计和傅立叶...
2、为什么在标准工作曲线法中要测定最大吸收波长?
为后续分析提供参考：对于某些物质，其最大吸收波长可能与特定的化学或物理性质相关。因此，测定最大吸收波长可以为后续的化学或物理分析提供参考。综上所述，在标准工作曲线法中测定最大吸收波长是为了确保测量的准确性、灵敏度、稳定性以及与其他仪器和方法的兼容性。通过测定最大吸收波长，可以更好地了解...
简述原子吸收光谱法的测定范围。
简述原子吸收光谱法的测定范围答案如下：原子吸收光谱仪是一种用于分析和鉴定物质中元素的仪器。它基于原子在特定波长的光线下吸收和发射的原理，通过测量其吸收光谱来推断样品中元素的存在和浓度。原子吸收光谱仪的检测范围包括了可见光、紫外线和红外线等大部分光谱区域。不同波长的光谱区域可以被用来检测不...
吴宏夫安：[答案] 核酸、核苷酸及其衍生物的分子结构中的嘌呤、嘧啶碱基具有共轭双健系统(-C=C一C=C 一),能够强烈吸收250~280nm 波长的紫外光.核酸(DNA,RNA)的最大紫外吸收值在260nm 处.遵照Lambert-Beer 定律,可以从紫外光吸...
宾川县18219845021： 核酸含量的测定 紫外吸收法的原理是什么? - ？
吴宏夫安： 蛋白质也有紫外吸收,通常蛋白质的吸收高峰在280nm波长处,在260nm处的吸收值仅为核酸的1/10或更低,因此对于含有微量蛋白质的核酸样品,测定误差较小.若待测的核酸制品中混有大量的具有紫外吸收的杂质,则测定误差较大,应设法除去.不纯的样品不能用紫外吸收值作定量测定. 从A260/ A280的比值可判断样品的纯度.纯RNA的A260/ A280≥2.0;DNA的A260/ A280≥1.8.当样品中蛋白质含量较高时,则比值下降.RNA和DNA的比值分别低于2.0和1.8时,表示此样品不纯. 生物帮上面有这方面的详细介绍, 生物 http://www.zhibio.com/
宾川县18219845021： 核酸含量的测定方法及原理都有哪些? - ？
吴宏夫安： 核酸定量常用方法及原理如下: 1、光吸收法:核酸中碱基共轭结构在近紫外光波长260nm处有最大吸收,吸收强度与核酸浓度成正比,因此可以用于核酸定量. 2、定P法:核酸中P含量约为9.5%,因此可以通过测定样品中的有机P量来进行核酸定量.核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物,为生命的最基本物质之一. 核酸广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内,生物体内的核酸常与蛋白质结合形成核蛋白.不同的核酸,其化学组成、核苷酸排列顺序等不同.根据化学组成不同,核酸可分为核糖核酸(简称RNA)和脱氧核糖核酸(简称DNA).
宾川县18219845021： 采用紫外光吸收法测定样品的核酸含量有何优缺点 - ？
吴宏夫安：[答案] 用紫外光吸收法测定样品的核酸含量,具有简单、快速、灵敏度高的优点,并且待测核酸样品中含有的微量蛋白质和核苷酸等吸收紫外光物质,产生较小测定误差. 但该法在测定样品内混杂有大量的上述吸收紫外光物质时,则会产生较大测定误差,...
宾川县18219845021： 核酸具有紫外吸收的原因? - ？
吴宏夫安： 在极端的pH值(加酸或碱)和受热条件下,DNA分子中双链间的氢键断裂,双螺旋结构解开成为两股单键的现象,这就是DNA的变性.依变性因素不同,有DNA的酸、碱变性,或DNA的热变性之分.因为变性时碱基对之间的氢键断开,相邻碱基对之间的堆积力也受到破坏(但不伴有共价键断裂),所以变性后的DNA在260nm的紫外光吸收增强(即A260增高),称为高色效应.在DNA变性中以DNA的热变性意义最大.DNA的热变性又称DNA的解链或融解作用;在DNA热变性过程中,使紫外吸收达到最大增值50%时的温度称为解链温度,又称融解温度(Tm).Tm与DNA分子G+C量有关.DNA分子中GC配对比例越多,Tm值就越高.
宾川县18219845021： 紫外分光光度法测总核酸的含量 - ？
吴宏夫安： 紫外光度法可测出核算的质量摩尔浓度:m B =M r A 260 /εL 对于纯核酸样品,DNA在A260nm的A值为0.020,RNA则为0.022~0.024即一个A值相当于50ug/mL双螺旋DNA,40ug/mL RNA或单链DNA. 此法简便、快速、灵敏度高,DNA和RNA的产物均可测定,但色素及其他具有紫外吸收的物质对测定有影响.
宾川县18219845021： 蛋白质和核酸在紫外吸收的原理是怎样的?又有什么差异?带电机理是怎样的 - ？
吴宏夫安： 蛋白质在紫外吸收的原理: 组成蛋白质的各种氨基酸在可见光区都没有光吸收,而在紫外光区仅色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸有吸收能力.其中色氨酸的最大吸收波长为279nm,酪氨酸的最大吸收波长为278nm,苯丙氨酸的为259nm.利用紫外...
宾川县18219845021： 核酸的紫外吸收性有何特点?如何应用来定性定量来检测核酸和核苷酸 - ？
吴宏夫安： 蛋白中trp、tyr、phe的 吸光度为280nm,所以280nm常用来表示 蛋白质吸光度;而260nm为DNA的吸光度. 理论上,纯的 RNA情况下:OD260/OD280的值为2,纯的DNA情况下:OD260/OD280的值为1.8. OD260反映的是溶液中核酸的浓度...
宾川县18219845021： 为什么用OD260/OD280评定核酸纯度 - ？
吴宏夫安：[答案] 紫外吸收检测DNA浓度与纯度2007年11月13日 星期二 11:40目的: 了解紫外吸收检测DNA浓度与纯度的原理,掌握测定方法.原理: 核酸的最大吸收波长为260nm,蛋白质为280nm,在波长260nm时,1OD值相当于双链DNA浓度为50...
