采用紫外光吸收法测定样品的核酸含量，有何优点及缺点
用紫外光吸收法测定样品的核酸含量，具有简单、快速、灵敏度高的优点，并且待测核酸样品中含有的微量蛋白质和核苷酸等吸收紫外光物质，产生较小测定误差。 但该法在测定样品内混杂有大量的上述吸收紫外光物质时，则会产生较大测定误差，需要设法事先除去。
方便，灵敏，除了知道含量，还知道组成成分。
从吸收光谱中，可以确定最大吸收波长λmax和最小吸收波长λmin。物质的吸收光谱具有与其结构相关的特征性。
可以通过特定波长范围内样品的光谱与对照光谱或对照品光谱的比较，或通过确定最大吸收波长，或通过测量两个特定波长处的吸收比值而鉴别物质。
在最大吸收波长处测量一定浓度样品溶液的吸光度，并与一定浓度的对照溶液的吸光度进行比较或采用吸收系数法求算出样品溶液的浓度。
扩展资料：
物质对光的选择性吸收波长，以及相应的吸收系数是该物质的物理常数。在一定条件下，物质的吸收系数是恒定的，且与入射光的强度、吸收池厚度及样品浓度无关。当已知某纯物质在一定条件下的吸收系数后，可用同样条件将该供试品配成溶液，测定其吸光度。
即可由上式计算出供试品中该物质的含量。在可见光区，除某些物质对光有吸收外，很多物质本身并没有吸收，但可在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定，故又称之为比色分析。
参考资料来源：百度百科-紫外-可见分光光度法
紫外光谱法用于药物的鉴别常用的方法有
测定最大吸收波长（λmax）或同时测定最小吸收波长（λmin）、规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸收度、规定吸收波长与吸收系数法。1、测定最大吸收波长（λmax）或同时测定最小吸收波长（λmin）：通过测量药物在紫外光区最大吸收波长和最小吸收波长，可以用于药物的鉴别。不同药物在紫外光区的...
紫外吸收光谱的应用
紫外吸收光谱的应用如下：紫外吸收光谱和可见吸收光谱都属于分子光谱，它们都是由于价电子的跃迁而产生的。利用物质的分子或离子对紫外和可见光的吸收所产生的紫外可见光谱及吸收程度可以对物质的组成、含量和结构进行分析、测定、推断。紫外可见吸收光谱应用广泛，不仅可进行定量分析，还可利用吸收峰的特性进行...
紫外吸收光谱,应选用什么光源
紫外线吸收光谱的详细介绍 一、基本原理 紫外吸收光谱的基本原理是利用在光的照射下待测样品内部的电子跃迁。电子跃迁类型有：σ→σ跃迁，指处于成键轨道上的σ电子吸收光子后被激发跃迁到σ反键轨道；n→σ跃迁，指分子中处于非键轨道上的n电子吸收能量后向σ反键轨道的跃迁；π→π跃迁，指不饱和键...
为什么用紫外仪测出的蛋白浓度比实际大
紫外吸收法原理大多数蛋白质由于有酪氨酸和色氨酸的存在,在紫外光280nm有吸收高峰,可以进行蛋白质含量的测定.但是核酸在280nm也有吸收,干扰测定,不过核酸的最大吸收峰在260nm.Warburg等测定了酵母烯醇酶和酵母核酸在280nm和260nm时A的比值,然后通过计算消除核酸存在的影响,可以求得有核酸存在时蛋白质的...
紫外可见吸光光度法定性和定量分析的依据是什么?
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简述紫外可见分光光度法用于含量测定的方法
结果：本法操作快捷，回收率高，与药典法无显著差异。结论：本法无需高精密紫外分光光度计，适合基层单位参考使用。二、吸收系数法 吸收系数法是一种常用的测量物质吸收能力的方法。它的原理是利用物质对辐射的吸收能力来测量物质的吸收系数。这种方法广泛应用于物理、化学、生物等领域，是一种非常重要的...
饮用水中紫外吸收物怎样测定
紫外分光光度法简便、快捷,而且仪器已经相当普及。利用不同的物质在紫外光不同的波长处的吸光度的差别,可以消除干扰测定某种物质的含量。饮用水中含有金属离子、卤素离子、有机物、阴离子表面活性剂、硝酸根、亚硝酸根等杂质。硝酸根在220nm 处有较强吸收,在275nm 处吸收接近于零。有机杂质在200nm~...
基于SpectraMax® QuickDrop™超微量分光光度计的蛋白定量_百度知 ...
在早期研究和药物发现中，准确测定溶液中蛋白质含量至关重要。通过精确的蛋白质定量，研究人员才能进行后续复杂实验，如液相色谱、酶动力学检测或蛋白结合分析。常用的方法包括A280(nm)紫外光吸收法和比色测定法，其中BCA(二喹啉甲酸)蛋白定量法因其与去垢剂兼容性和广泛的检测范围而广受欢迎。A280(nm)...
用于紫外吸收分光光度法的分析波长应如何确定,需要满足什么条件?_百度...
紫外-可见分光光度法的使用方法 （1） 波长 由于环境因素对机械部分的影响，仪器的波长经常会略有变动，因此除应定期对所用的仪器进行全面校正检定外，还应于测定前校正测定波长。常用汞灯中的较强谱线237.83nm、253.65nm、275.28nm、296.73nm、313.16nm、334.15nm、365.02nm、404.66nm、435.8...
紫外光检验波长准确度的方法
1、首先进行紫外光检验波长准确度的方法，紫外分光光度计，使用紫外分光光度计可以快速、准确地测量光的波长。操作时，先将光度计设置在所需的波长，将标准物质放入样品室中，通过测量标准物质的吸收光谱来判断波长是否准确。2、其次光谱仪，光谱仪是一种高精度的光学仪器，可以对光的波长进行非常精确的...
矣党小儿：[答案] 用紫外光吸收法测定样品的核酸含量,具有简单、快速、灵敏度高的优点,并且待测核酸样品中含有的微量蛋白质和核苷酸等吸收紫外光物质,产生较小测定误差. 但该法在测定样品内混杂有大量的上述吸收紫外光物质时,则会产生较大测定误差,...
阿克陶县13442532727： 用紫外吸收法测定核酸含量的原理是什么 - ？
矣党小儿：[答案] 核酸、核苷酸及其衍生物的分子结构中的嘌呤、嘧啶碱基具有共轭双健系统(-C=C一C=C 一),能够强烈吸收250~280nm 波长的紫外光.核酸(DNA,RNA)的最大紫外吸收值在260nm 处.遵照Lambert-Beer 定律,可以从紫外光吸...
阿克陶县13442532727： 核酸含量的测定 紫外吸收法的原理是什么? - ？
矣党小儿： 蛋白质也有紫外吸收,通常蛋白质的吸收高峰在280nm波长处,在260nm处的吸收值仅为核酸的1/10或更低,因此对于含有微量蛋白质的核酸样品,测定误差较小.若待测的核酸制品中混有大量的具有紫外吸收的杂质,则测定误差较大,应设法除去.不纯的样品不能用紫外吸收值作定量测定. 从A260/ A280的比值可判断样品的纯度.纯RNA的A260/ A280≥2.0;DNA的A260/ A280≥1.8.当样品中蛋白质含量较高时,则比值下降.RNA和DNA的比值分别低于2.0和1.8时,表示此样品不纯. 生物帮上面有这方面的详细介绍, 生物 http://www.zhibio.com/
阿克陶县13442532727： 用吸收紫外线法定量测定核酸? - ？
矣党小儿： 平时用紫外吸收法进行估算很是方便快捷1) 浓度估算 RNA浓度= 40 X A260 (mg/L) 也就是说如果你配的RNA溶液在260nm处吸收(A或OD)为1, 则这个溶液的浓度为: 1X40=40mg/L 至于摩尔浓度就要你自己根据序列用软件计算分子量后...
阿克陶县13442532727： 干扰紫外线吸收法测定核酸的含量实验的物质有哪些,设计排除这些干扰的实验. - ？
矣党小儿：[答案] 所有对260nm附近波长的紫外线有显著吸收的物质都会干扰紫外线吸收法测定核酸的含量实验.实验中主要是蛋白质.用苯酚-氯仿-异丙醇法纯化核酸样品可以去除蛋白质.
阿克陶县13442532727： 测定核酸含量的方法有哪些? - ？
矣党小儿：[答案] 核酸中的有机无机磷酸——→无机磷酸+钼酸——→磷钼酸+还原剂(抗坏血酸等)——→钼兰 钼兰的最大吸收波长在660nm,在一定浓度范围内,溶液的吸收值与无机磷的含量成正比.该法测得的是总磷量,需减去无机磷的含量才是核酸的含磷量. ...
阿克陶县13442532727： 紫外线吸收法测核酸含量实验时为何加了钼酸铵 - 过氯酸沉淀剂后的样品在260nm处消光值更大大 - ？
矣党小儿：[答案] 钼酸铵-过氯酸在260nm处有较大的吸收值.具体的请参阅文献 年燕兰《关于RNA定量测定方法中存在的问题和改进》. 导致这一现象的原因可能是因为①提取的核酸量较少,②钼酸铵-过氯酸用量过大. 个人意见,仅供参考.
阿克陶县13442532727： 用紫外分光光度法测定核酸有什么缺点 - ？
矣党小儿： 核酸、核苷酸及其衍生物的分子结构中的嘌呤、嘧啶碱基具有共轭双健系统(-C=C一C=C 一),能够强烈吸收250~280nm 波长的紫外光.核酸(DNA,RNA)的最大紫外吸收值在260nm 处.遵照Lambert-Beer 定律,可以从紫外光吸收值的变化来...
阿克陶县13442532727： 紫外分光光度法测总核酸的含量 - ？
矣党小儿： 紫外光度法可测出核算的质量摩尔浓度:m B =M r A 260 /εL 对于纯核酸样品,DNA在A260nm的A值为0.020,RNA则为0.022~0.024即一个A值相当于50ug/mL双螺旋DNA,40ug/mL RNA或单链DNA. 此法简便、快速、灵敏度高,DNA和RNA的产物均可测定,但色素及其他具有紫外吸收的物质对测定有影响.
阿克陶县13442532727： 核酸含量的测定方法及原理都有哪些? - ？
矣党小儿： 核酸定量常用方法及原理如下: 1、光吸收法:核酸中碱基共轭结构在近紫外光波长260nm处有最大吸收,吸收强度与核酸浓度成正比,因此可以用于核酸定量. 2、定P法:核酸中P含量约为9.5%,因此可以通过测定样品中的有机P量来进行核酸定量.核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物,为生命的最基本物质之一. 核酸广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内,生物体内的核酸常与蛋白质结合形成核蛋白.不同的核酸,其化学组成、核苷酸排列顺序等不同.根据化学组成不同,核酸可分为核糖核酸(简称RNA)和脱氧核糖核酸(简称DNA).
