关于提取血浆中RNA

作者&投稿:唐师 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
Trizol能否用于提取血浆RNA?~


血浆样本中RNA的含量较低,不容易获取,一般BIOG血浆核酸提取方法得率5-15ng/ul*50ul,这个量对于RNA-seq可能会稍有点低,可以采用BIOG游离核酸富集方法,相当于浓缩核酸的过程,测序一般至少1ug以上。

1. 请自行准备:无水乙醇、无RNA酶1.5mL离心管。

2. 取出洗涤液,按以下操作:

a) 洗涤液A:21mL加入9mL无水乙醇;42mL加入18mL无水乙醇。

b) 洗涤液B:9mL加入21mL无水乙醇;18mL加入42mL无水乙醇。

c) 配制好的洗涤液如出现沉淀,可在37℃溶解,摇匀后使用。

3. 取无RNA酶的1.5mL离心管,加入200μL样本,4μLRNA Carrier混合均匀,再加入300μL 裂解液及20μL 消化液,漩涡震荡10秒,充分混匀,56℃水浴10 分钟至完全裂解。

4. 加入1000μL无水乙醇,轻轻颠倒混匀,如有半透明悬浮物,不影响RNA的提取与后续实验。

5. 将吸附柱放入收集管内,将760μL上述溶液转入吸附柱内,静置2 分钟,12,000 rpm 4℃离心1 分钟,弃收集管内废液.

6. 将剩余760μL溶液转移至吸附柱内,重复步骤5。

7. 将吸附柱放回收集管内,加500μL 洗涤液A至吸附柱内,12,000 rpm 4℃离心1 分钟,弃收集管内废液。

8. 将吸附柱放回收集管内,加500μL 洗涤液B至吸附柱内,12,000 rpm 4℃离心1 分钟,弃收集管内废液。

9. 将吸附柱放回收集管内,12,000 rpm 4℃离心2 分钟,离去残留的洗涤液。

10. 取出吸附柱,放入新的无RNA酶的1.5 mL 离心管内,加入30-50μL 洗脱液,静置3 分钟,12,000 rpm 4℃ 离心2 分钟,收集RNA溶液。

11. -70℃保存,或直接用于下一步实验。

注意事项

为防RNA酶污染,实验过程中最好戴一次性干净手套、口罩,使用处理过的无RNA酶的容器和无RNA酶的超纯水 。

洗涤液含有刺激性化学物质

我们实验室用BIOG RNA BLOOD ISOLATE KIT法提取血浆中的RNA,如果RNA浓度不高,就用3倍体积的无水乙醇、0.1体积的NaAC和1ul 15mg/ml的glycogen沉淀进行浓缩,或者直接用浓缩仪进行浓缩干燥


...提取单核细胞rna,浓度100ng\/ul左右,是不是太低了啊,血浆rna...
北京华越洋生物,核酸提取试剂盒领导者!超强细胞裂解液,使核酸释放完整,核酸产量高,专一的吸附柱,确保RNA纯度。高活性的DNA酶,确保RNA样品没有DNA污染,10多分钟完成一个样品的提取,得到的核酸可以直接做下游任何实验。

做PCR看大鼠PPARγ的表达 抽提RNA的时候是该用血清还是血浆呢?
应该是血细胞啊,血清是免疫球蛋白,血浆是水啊,盐啊,脂肪,蛋白质的混合物,你要提取总RNA应该从血细胞中提取,就用没有凝固的全血就行,血液要用肝素抗凝,这样就行了,具体的量肝素说明书上有。

如何从血液中提取mirna
血清血浆就推荐QIAgen的试剂盒217004,小量提取试剂盒,每个纯化柱只能提200ul,最终出来的量一般是150ng~300ng(正常人的都很少,有炎症或癌变人的血清血浆miRNA会更多)。另外,这样出来的都是total RNA,只不过是其中保留下了小分子的miRNA,如果要分离miRNA,还需要别的手段,例如PEG分离法,专门试剂...

病毒检测用RNA提取试剂盒,博陵科为的怎么样?
是 博凌科为 的吧? 博凌科为的产品都挺好的,很多实验室都在用,这个品牌挺值得信赖的!博凌科为病毒检测用RNA提取试剂盒使用分离柱方法从血浆,血清和无细胞体液中同时纯化病毒RNA 采用高效、专一结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲系统,适合从血浆、血清和其它无细胞体液等样品中分离纯化病毒的RNA,本...

rna可以在血浆中复制吗?
RNA在细胞内,血浆中没有RNA,可以有核苷酸。

提取RNA时氯化钠的最适浓度是多少
在1~2mol\/L的浓氯化钠溶液中,DNA核蛋白的溶解度很大,RNA核蛋白的溶解度很小;而在0.14mol\/L的稀氯化钠溶液中,DNA核蛋白的溶解度很小,RNA核蛋白的溶解度很大。因此,可利用不同浓度的氯化钠溶液,将DNA核蛋白和RNA核蛋白从样品中分别抽提出来。所以只要将提取DNA中过程里的两次氯化钠溶液对调...

黄管分离胶作用
黄管分离胶是一种在临床血浆游离RNA检测中使用的试剂,其主要作用是有效分离血清与血浆,保护血浆中的蛋白稳定,防止物质交换,提高检测质量和实验稳定性。在临床血浆游离RNA检测中,使用含有血清分离胶的黄色试管进行提取和保存血浆蛋白。分离胶可以有效地分离血清与血浆,保护血浆中的蛋白稳定,防止血清与血浆...

博凌科为的病毒RNA快速提取试剂盒如何使用?得到的实验结果如何?求介 ...
博凌科为的病毒RNA快速提取试剂盒采用特异性结合病毒RNA 的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,病毒RNA提取试剂盒适合于从无细胞体液,包括血浆、血清、腹水、培养细胞上清液、脑脊髓液及尿液等中快速提取高纯的病毒RNA。该产品可以满足绝大多数的病毒RNA的提取要求, 如病毒RNA:HCV(丙肝病毒),HIV(艾滋病毒...

如何检测外泌体中的mirna?
检测外泌体中的miRNA通常需要经过以下步骤:外泌体提取:首先,从细胞培养上清液、血浆、尿液等样品中提取外泌体。可以使用商用的外泌体提取试剂盒,按照厂家提供的操作说明进行提取。总RNA提取:从提取的外泌体样品中提取总RNA,包括miRNA。常见的总RNA提取方法有酚\/氯仿法或商用的RNA提取试剂盒。根据所...

什么试剂盒提取smallRNA效果好
Bluescape BiooPure RNA Isolation Reagent适用于固体组织、培养细胞和血清血浆中游离细胞液总RNA提取和small RNA富集,包括miRNA,效果很不错

贵德县19850347956: trizol法提取血中的RNA,怎样做量会更多
牛骂复方: 1 血要新鲜.如果是冻存的,在解冻时要完全,之后再加Trizol. 2 可以稍多加一些Trizol,少加些血.混匀之后放置10分钟左右,直接加三氯甲烷,混匀再去离心. 可以不用先离心去沉淀之后再加三氯甲烷. 3 每个步骤操作要快,用的时间药短些,防止降解 4 异丙醇沉淀的时候,放-20°C的冰箱半个小时,或再适当延长一点时间.迅速离心,之后加75%乙醇.只洗一遍,洗2遍易损失部分RNA. 5 不要过分干燥,管内稍有点残余的乙醇也没关系.干燥一会就迅速加DEPC水少量.一般我都加的30.如果需要浓度高点可以少加水. 6 提取RNA之后迅速反转录成cDNA再保存. RNA直接冻存会降解.也会影响以后反转的效率.

贵德县19850347956: 如何选择最佳的全血DNA,RNA提取方法 -
牛骂复方: 如何选择最佳的全血DNA、RNA提取方法?从全血中提取DNA和RNA应该说是最基本的工作了,提取的DNA和RNA质量的好坏直接影响了下游的实验和分析,可供选择的方法非常多,乱花渐欲迷人眼,如何选择最适合的方法,成了很多人实验...

贵德县19850347956: 如何提取血RNA -
牛骂复方: 都应该是可以的.不过提取RNA一般都用kit(试剂盒),RNA和DNA不一样,杂质多,易降解,所以基本上不用自己配的溶液提. 虽然我个人没有做过,但是全血和血清中提取RNA都是可以的,只是用的trizol和提取组织细胞中的不一样. 你尝试搜索一下Trizol LS,看看是不是你需要的.

贵德县19850347956: 怎样用TRIzol 法提取动物血清总RNA -
牛骂复方: 1、将组织在液氮中磨成粉末后,再以50-100mg组织加入1ml的Trizol液研磨;每2E6个细胞加入1mLTrizol.注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%.2、研磨液室温放置5min,然后以每1ml Trizol液加入0.2ml的比例加入氯仿,盖紧离心管...

贵德县19850347956: 提取RNA的血清如何冻存 -
牛骂复方:[答案] 、组织样品采集 1. 首先准备好用于包装样品的铝箔或冷冻保存管,并且用油性记号笔在铝箔或冻存管外表多处写明样品编... 白细胞便能有效地保存在RNAlater 中.不要将全血、血浆或血清中的RNA 保存在RNAlater 中,因为它们蛋白含量过高,与...

贵德县19850347956: 如何从血液中提取mirna
牛骂复方: 全血提取我用过百泰克的,提取的效果比较好,最终纯度也还不错.大概1ml全血最多能提出来8ug吧,已经比一般传统方法3~7ug要好的多. 血清血浆就推荐QIAgen的试剂盒217004,小量提取试剂盒,每个纯化柱只能提200ul,最终出来的量一般是150ng~300ng(正常人的都很少,有炎症或癌变人的血清血浆miRNA会更多). 另外,这样出来的都是total RNA,只不过是其中保留下了小分子的miRNA,如果要分离miRNA,还需要别的手段,例如PEG分离法,专门试剂盒分离.实际实验中,很多都只需要total RNA起始即可.

贵德县19850347956: 请教血清中提取RNA -
牛骂复方:[答案] 血清中是可以提取RNA的

贵德县19850347956: 如何从组织中提取RNA和DNA -
牛骂复方: 这个问题应该这样考虑: 根据所得到的组织的量的多少及珍贵程度,看是用kit还是用Trizol来提取. 组织有没有经过处理,比如经过了固定什么的,如果要提取核酸,要用专门的kit来做. 还有,根据所提取出来的核酸的用途来看,比如提取的RNA是做qPCR,还是做表达谱芯片的,DNA是做CNV分析的,还是做基因型分析的.在以上各种情况下,才能方便讨论如何提取核酸.

贵德县19850347956: 从全血里提取RNA的方法? -
牛骂复方: 10月13日 13:35 RNAgents总RNA提取系统 1)Promega有哪些系统用于提取总RNA及poly(A)+RNA? 2)RNAgents®总RNA提取系统的工作原理怎样? 3)RNAgents®总RNA提取系统的一般得率是多少? 4)RNAgents®总RNA提取系统的各组分的...

贵德县19850347956: 我想提取奶牛全血中的单核细胞mRNA,由于采集血液的地方离实验室较远,为了使mRNA不降解,怎么保存血呢? -
牛骂复方: 您好,细胞不被破坏的话RNA并不容易发生降解,请您放心.根据以前去手术室取血的经验,使用紫头管(柠檬酸钠抗凝管)取血,保存在冰盒里运送到实验室需1-2小时,RNA能被正常提取,离心时注意4°C离心就好.另外,关于从血液中的...

本站内容来自于网友发表,不代表本站立场,仅表示其个人看法,不对其真实性、正确性、有效性作任何的担保
相关事宜请发邮件给我们
© 星空见康网