如何从血液中提取mirna

作者&投稿:辉晓 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
如何从外周血中提取miRNA~

使用该试剂盒
PAXgene Blood miRNA Kit
从稳定与PAXgene Blood RNA Tubes的全血样品中纯化miRNA和总RNA
整合了采集、稳定和纯化的方案
高效纯化miRNA和总RNA
18-25°C条件下RNA稳定多至3天
-20°C 或 -70°C条件下至少稳定50个月

http://www.qiagen.com/products/paxgenebloodmirnakit.aspx#Tabs=t0

是否是已知的miRNA?
如果是已知的miRNA,我建议你到Sanger网站检索一下序列,然后合成相应探针进行NorthernBlot确证,或者利用RT-PCR克隆相应片段进行测序,等等,具体用什么检测方法要取决于你的课题需要。(引用,仅供参考)

全血提取我用过百泰克的,提取的效果比较好,最终纯度也还不错。大概1ml全血最多能提出来8ug吧,已经比一般传统方法3~7ug要好的多。

血清血浆就推荐QIAgen的试剂盒217004,小量提取试剂盒,每个纯化柱只能提200ul,最终出来的量一般是150ng~300ng(正常人的都很少,有炎症或癌变人的血清血浆miRNA会更多)。

另外,这样出来的都是total RNA,只不过是其中保留下了小分子的miRNA,如果要分离miRNA,还需要别的手段,例如PEG分离法,专门试剂盒分离。实际实验中,很多都只需要total RNA起始即可。

采集抗凝外周静脉血5mL,在常温下2 h内进行处理.血标本在4℃下1 200 离心10 min,转移上层血浆至5mL管 ,然后在4℃下12 000 g离心10 min去除细胞成分.转移血浆至新的5 mL管,-80℃保存以各miRNA抽提.血浆miRNAs抽提:每份血浆标本取200-300 uL加入50pmol/L的内参细胞液,然后加入20 L 5 mol/L的醋酸和750 uL的目的试剂盒中的溶液.RNA抽提按其操作步骤进行,抽得的RNA用50 uL的无核酸酶水溶解后.80℃保存.

目前有很多的方法进行,包括有市面上各个公司销售的提取试剂盒,也可进行传统的trizol提取方法。
同时也要分清是提取全血,还是提取血清或血浆中的miRNA


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永善县19430352276: 如何从血液中提取mirna
裘馥云南: 全血提取我用过百泰克的,提取的效果比较好,最终纯度也还不错.大概1ml全血最多能提出来8ug吧,已经比一般传统方法3~7ug要好的多. 血清血浆就推荐QIAgen的试剂盒217004,小量提取试剂盒,每个纯化柱只能提200ul,最终出来的量一般是150ng~300ng(正常人的都很少,有炎症或癌变人的血清血浆miRNA会更多). 另外,这样出来的都是total RNA,只不过是其中保留下了小分子的miRNA,如果要分离miRNA,还需要别的手段,例如PEG分离法,专门试剂盒分离.实际实验中,很多都只需要total RNA起始即可.

永善县19430352276: 如何从外周血中提取miRNA -
裘馥云南: aspx#Tabs=t0" target="_blank">http.com/products/paxgenebloodmirnakit.qiagen://www使用该试剂盒 PAXgene Blood miRNA Kit 从稳定与PAXgene Blood RNA Tubes的全血样品中纯化miRNA和总RNA 整合了采集、稳定和纯化的方案 高效纯化miRNA和总RNA 18-25°C条件下RNA稳定多至3天-20°C 或 -70°C条件下至少稳定50个月 评论|

永善县19430352276: 如何提取血RNA -
裘馥云南: 都应该是可以的.不过提取RNA一般都用kit(试剂盒),RNA和DNA不一样,杂质多,易降解,所以基本上不用自己配的溶液提. 虽然我个人没有做过,但是全血和血清中提取RNA都是可以的,只是用的trizol和提取组织细胞中的不一样. 你尝试搜索一下Trizol LS,看看是不是你需要的.

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