用Trizol提取植物RNA电泳后看不到任何条带(也就是什么都没有),请问问题可能出在哪里?

作者&投稿:邰琳 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
RNA提取后,跑电泳不出条带~

其实你要首先理解一下电泳染色的原理。
电泳时,我们一般使用的染色剂比如EB啊,GEL-Red啊之类的,都是潜入DNA双螺旋的分子间,所以能拿来作为结合染色染料。而对于RNA,其大多为单链形式存在,这些染料还能进行染色的原因,是因为其的大分子还能发生自身或相互间的2级缠绕,使得染料还有掺入的余地。
那么,如果这些大分子发生降级或者片段化成为小片段,发生自身缠绕的和相互聚合的几率及小了很多,染料难于掺入,当然不显色。
而对于测OD值来说,我们关注的是其吸光度,吸光度这与RNA中的碱基有关,与分子结构无关,所以当然能测出值来。并且,降解和片段化的程度越高,暴露出的碱基愈多,吸光度也越大,测出的值当然也越高,这是不矛盾的。
我这么说可以理解了吧?

首先,看你提取什么RNA,如果你提取血液里面的小RNA那没有条带是正常的,因为小RNA没有结合EB的结构,所以电泳你看不到什么东西。其次,如果你提取细胞总RNA的话,就可能如一楼的朋友回答的那样,但不排除你的EB有问题,而且有点和一楼的朋友意见不一样,仪器是可以分辨RNA降解的,对于Trizol法提取的RNA,OD比值(DEPC水做溶剂)超过2一般来说就说明发生了降解,而试剂盒提取的总RNA,OD比值超过2.2也说明发生了降解。

你好,一般RNA电泳没有条带主要可能是由于RNA降解、RNA样本量太低等造成。但没具体描述步骤所以不太好判断。
根据你的说法同一批提的鱼的组织有条带,基本可以排除人为操作引起的RNA降解,所以有可能是RNA的浓度太低引起的。
不知道你在电泳前有没有测过RNA的浓度?如果有条件的话可以测一下RNA的浓度,这样比较直观。
也许是植物组织量比较少?又或者是因为植物组织没有动物组织那么松软,所以研磨没有那么充分,导致RNA释放比较少。


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高淳县17192742909: 用Trizol提取植物RNA电泳后看不到任何条带(也就是什么都没有),请问问题可能出在哪里? -
贠浦复方: 你好,一般RNA电泳没有条带主要可能是由于RNA降解、RNA样本量太低等造成.但没具体描述步骤所以不太好判断.根据你的说法同一批提的鱼的组织有条带,基本可以排除人为操作引起的RNA降解,所以有可能是RNA的浓度太低引起的.不知道你在电泳前有没有测过RNA的浓度?如果有条件的话可以测一下RNA的浓度,这样比较直观.也许是植物组织量比较少?又或者是因为植物组织没有动物组织那么松软,所以研磨没有那么充分,导致RNA释放比较少.

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贠浦复方: 植物RNA本来就比价难提取,TRIzol提取时裂解要充分 剧烈震荡,分层静置,离心之后自然就分为两层,取RNA层的时候吸取一定要小心,吸得时候一定要缓慢,不要怕浪费,有的人吸得很多,很怕浪费,结果就吸到了中间层和下层,个人觉得吸取80%最多了,再多就很容易吸到杂质了,操作要小心,动作快速准却,这样才能提到高质量的RNA

高淳县17192742909: 细胞用trizol处理后即放入液氮中会不会使rna降解 -
贠浦复方: 实际操作中或多或少都会有降解,液氮的低温能极大减缓这一过程,除此之外用RNase-free的器具、减短操作时间、避免直接对样品呼气等都是可以提高提取的RNA的质量的方法.

高淳县17192742909: 我用Trizol试剂盒提枇杷的RNA提了三次,每次都是黑色的,跑电泳也没有,为什么啊? -
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高淳县17192742909: Trizol法提取RNA操作步骤?
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高淳县17192742909: trizol法提完rna后怎么纯化mrna -
贠浦复方: 有专门的试剂盒,这个一般都是买的,用oligo(dT)亲和mRNA(polyA结构).

高淳县17192742909: trizol可以用来提取植物组织叶片总RNA吗?毒性如何? -
贠浦复方: 华越洋生物为你解答:是的,可以.不过比试剂盒提出来粗糙些,操作相对麻烦些时间长,也需要去DNA污染.里面含有大量毒性物质,尤其是苯环类的,易挥发的苯酚.切忌戴口罩,手套,遮眼睛等.华越洋自主研发的植物RNA提取试剂盒,10多分钟完成一个样品的提取,而且绝对无DNA污染.同时也销售自产和代理invitrogen的TRIZOL.希望有用得到的朋友,前来咨询.

高淳县17192742909: trizol法提取组织的RNA,只出现了一条条带,且确定不是5S,有可能是18A或28S吗? -
贠浦复方: 肯定不可能是5S,5S能看见的话,28S肯定能看见.很大可能是污染的基因组DNA. RNA电泳中,一般28S与18S都能看见的,且28S的亮度是18S的二倍,5S不一定能看到.

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