动物RNA的提取

RNA的提取方法步骤及原理.~

RNA抽取一般使用Trizol法抽提:

Trizol是一种总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速裂解细胞，抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。

Trizol作用原理:

在匀质化或溶解样品中，Trizol试剂可保持RNA的完整性，同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后，裂解液分层成水相和有机相。RNA存在于水相中。

水相转移后，RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后，用乙醇可从中间相沉淀得到DNA，加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。

扩展资料与DNA不同，RNA一般为单链长分子，不形成双螺旋结构，但是很多RNA也需要通过碱基配对原则形成一定的二级结构乃至三级结构来行使生物学功能。
RNA的碱基配对规则基本和DNA相同，不过除了A-U、G-C配对外，G-U也可以配对。
在细胞中，根据结构功能的不同，RNA主要分三类，即tRNA（转运RNA），rRNA（核糖体RNA），mRNA（信使RNA）。mRNA是合成蛋白质的模板，内容按照细胞核中的DNA所转录；tRNA是mRNA上碱基序列（即遗传密码子）的识别者和氨基酸的转运者；rRNA是组成核糖体的组分，是蛋白质合成的工作场所。
参考资料来源：百度百科-RNA

DNA(PCR)只能证明有这个基因，不能证明这个基因表达与否，只有RNA(RT-PCR)才能看出基因表达与否。
二者排列组合可以出现3种情况：（1）DNA与RNA都阳性，说明有这个基因，并且目前表达。（2）DNA阳性，RNA阴性，说明有这个基因但目前不表达。

RNA的提取

一、准备试剂：
氯仿，异丙醇，75℅乙醇，无RNase的水或0.5℅SDS（溶液均需用DEPC处理过的水配制）。
二、操作步骤：
1. 匀浆处理：
a. 组织 将组织在液氮中磨碎，每50-100mg组织加入1ml TRIzol，用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b. 单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积（即3.5cm直径的培养板）加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c. 细胞悬液 离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2. 将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。
3. 可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟，弃上清。
10. 室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀，大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥，过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS，用枪头吸打几次，55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应，勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解，-70℃保存。
三、注意事项：
1. 从少量样品（1-10mg组织或102-104细胞）中提取RNA时可加入少许糖原以促进RNA沉淀。例如加800ml TRIzol匀浆样品，沉淀RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来，糖原浓度不高于4mg/ml是不影响第一链的合成，也不影响PCR反应。
2. 匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可以保存于75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。
3. 分层和RNA沉淀时也可使用台式离心机，2600×g离心30-60分钟。
预期产量：1mg组织或1×106细胞提取RNA分别为：
肝和脾6-10μg ，肾3-4μg ，骨骼肌和脑组织1-1.5μg ，胎盘1-4μg ，上皮细胞8-15μg ，成纤维细胞5-7μg 。

应该需要制作装片吧.....
然后用吡罗红将RNA染色

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隆化县15629443376： 动物组织如何提取总RNA? - ？
高钓普润：[答案] Trizol法 1、将组织在液氮中磨成粉末后,再以50-100mg组织加入1ml的Trizol液研磨;每2E6个细胞加入1mLTrizol.注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%. 2、研磨液室温放置5min,然后以每1ml Trizol液加入0.2ml的比例加入氯仿,盖紧离心管...

隆化县15629443376： 动物RNA的提取 - ？
高钓普润： RNA的提取 一、准备试剂: 氯仿,异丙醇,75℅乙醇,无RNase的水或0.5℅SDS(溶液均需用DEPC处理过的水配制). 二、操作步骤: 1. 匀浆处理: a. 组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理....

隆化县15629443376： 动物组织RNA提取的前期处理怎么做? - ？
高钓普润： 先要用胰蛋白酶处理肺部组织,再加入大量蒸馏水并轻轻地用玻璃棒均匀的沿一个方向搅拌使细胞胀裂.

隆化县15629443376： RNA提取的关键步骤是??? - ？
高钓普润： 我只知道DNA的 析出含DNA的黏稠物:蒸馏水300mL,逆时针方向搅拌,缓慢搅拌..朝一个方向..避免DNA折断

隆化县15629443376： 常用的动物组织样品总rna的分离提取的方法有哪些 - ？
高钓普润： 一般可以分为柱式提取和酚氯仿提取,其中酚氯仿提取比较常用,而且质量比较好

隆化县15629443376： 有谁知道哺乳动物RNA的提取方法? - ？
高钓普润： 答:RNA的种类: 在生物体内发现主要有三种不同的RNA分子在基因的表达过程中起重要的作用.它们是信使RNA(messengerRNA,mRNA)、转移(tranfer RNA,tRNA)、核糖体RNA(ribosomal...

隆化县15629443376： 动物处死后,如何取组织提取RNA,组织用什么液体取 - ？
高钓普润： 取出组织,先加入液氮迅速冻住以防RNA降解,适当研磨破壁,然后用Trizol提取

隆化县15629443376： 怎样用TRIzol 法提取动物血清总RNA - ？
高钓普润： 1、将组织在液氮中磨成粉末后,再以50-100mg组织加入1ml的Trizol液研磨;每2E6个细胞加入1mLTrizol.注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%.2、研磨液室温放置5min,然后以每1ml Trizol液加入0.2ml的比例加入氯仿,盖紧离心管...

隆化县15629443376： RNA提取和定量测定的原理和方法 - ？
高钓普润： 动物细胞的RNA提取一般使用Trizol,你可以到网上找它的使用说明测定的方法的话可以有: 紫外分光光度计:通过测定OD260、280和230来检测RNA是否被杂质污染 琼脂糖凝胶电泳:检测RNA是否发生降解 RT-PCR:将其反转录成cDNA,通过荧光定量PCR检测各mRNA的表达量

隆化县15629443376： 生化实验——动物组织中核酸的提取与鉴定,在提取核酸过程中,要注意些什么问题? - ？
高钓普润： 这要看你要提的核酸式DNA还是RNA.首先说一下DNA吧,一,首先要用10%的SDS处理匀浆器,这样可以除去匀浆器中的污染. 二,最好在冰上进行,防止降解 三,要加足够的RNA酶及蛋白酶K使RNA及蛋白质进行充分的降解,而利于后面的抽提 四,抽提时要注意吸取上抄层,但不要弄破中间白色的蛋白层 五,用75%乙醇洗后,带乙醇挥发后再用无菌水溶解 对于RNA 的提取最主要的就是要防止RNA酶对RNA的降解.首先就是要对所用试剂用DEPC处理. 第二,对于动物组zd织块,从负70拿出后,立即用匀浆器捣碎,以后各步骤要在冰上进行.