qrt-pcr详细步骤
rt-pcr原理
rt-pcr原理如下：只要是利用相关技术提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用反转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板经行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR可以用一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在最佳条件下进行。cDNA的合成...
RT-PCR技术简介
RT-PCR技术，全称为Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，是一种结合了逆转录（RT）和cDNA聚合酶链式扩增反应的高效技术。它的核心过程是首先通过逆转录酶将RNA转化为互补的cDNA，然后利用cDNA作为模板进行扩增，以获得特定的基因片段。RT-PCR以其高灵敏度和广泛的应用性而著称，主要应用包括评估...
转染mirna inhibitor需要用rt-pcr检测吗
理论上是可以用qPCR进行检测的。但是有一种情况可能检测不到抑制效率。即miRNA inhibitor是与miRNA发生结合从而抑制了miRNA发挥作用，但它并没有彻底降解miRNA。这种情况，需要结合靶基因mRNA的表达情况，或者通过检测靶基因的蛋白表达水平来判断inhibitor是否发挥作用。
论述RT-PCR检测基因表达的实验步骤及如何判断并消除DNA污染所造成的影 ...
RT-PCR实验，主要分为3步：total RNA的提取 mRNA的反转录 荧光定量PCR 消除DNA污染：按照说明书加入足量的Trizol，细胞过多会引起DNA污染。现在已经有去除基因组污染的反转录试剂盒，已经在很多实验室常用。你可以尝试一下。
猪瘟病毒实时荧光RT-PCR检测方法内容简介
根据GB\/T 1.1—2009的规定，我们详细介绍了猪瘟病毒实时荧光RT-PCR检测方法。这项标准的制定源于中华人民共和国农业部的倡导，得到了全国动物防疫标准化技术委员会(SAC\/TC 181)的专业支持和指导。具体负责这项标准编写的机构是中国兽医药品监察所，其团队由多位专业人员组成，他们是王琴、王泰健、徐璐、...
保姆级别qRT-PCR从理论知识(△Ct,△△Ct,2^-△△Ct)到实践操作_百度知 ...
qRT-PCR，全称定量逆转录聚合酶链反应，以cDNA（从mRNA逆转录生成的DNA）为模板，广泛应用于基因表达研究和疾病诊断。cDNA的单链或双链取决于具体实验，例如在RT-PCR中，我们通常使用单链cDNA，而在构建表达载体或qRT-PCR中则需双链形式[2]。cDNA的独特之处在于，它是mRNA转录的产物，因此只包含外显...
RT-PCR一步法与两步法有什么不同?
然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品时易于操作，有助于减少残余污 染，因为在cDNA合成和扩增之间不需要打开管盖。一步法可以得到更高的灵敏度，最低可以达到0.1pg总RNA，这是因为整个cDNA样品都被扩增。 对于成功的一步法RT-PCR， 一般使用反义的基因特异性引物起始cDNA合成...
PT-PCR操作流程
是RT-PCR啊。一、实验器具与材料：1、移液枪：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl 2、吸头：1ml、200μl、20μl 3、匀浆管：5ml 4、吸头台：放置1ml吸头的一个，放置20μl吸头的一个 5、EP管：1.5ml、0.2ml、100μl 6、试剂瓶：2个60ml的棕色试剂瓶（广口，带盖）1个125ml的...
RT-PCR需要多大的细胞量及操作步骤
以hela 为例，接种量在50万左右，待细胞长到90%时加药品（加入时间一般以你的作用时长为基点，估计到收集时长满），一般提取RNA作用时间不会太长，几个小时而已，所以细胞应长得接近饱和时加入药品，之后收集细胞，提取RNA步骤就一样了，提取的一孔RNA在10-20ug，这些已足够RT使用，具体提取方法站内...
RT -PCR的介绍
RT -PCR即逆转录-聚合酶链反应。原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极为微量RNA样品分析成为可能。该技术主要用于...
株洲县利巴回答： qRT-PCR(定量反转录聚合酶连锁反应)quantificational rt-PCR
璩菁18587141518问： 半定量RT - ？
株洲县利巴回答： 以-PCR为基础建立起来的mRNA含量测定技术,较含内标化的RT-PCR定量测定的mRNA的方法更为简便可行. 这种方法不另设'内标准',排除了俩对不同引物之间的相互抑制和灵敏读差异,而且具有明显的剂量-效益关系和良好的重复性. 步...
璩菁18587141518问： 做RT - PCR的时候为什么要设置标准反应体系和管家基因反应体系? - ？
株洲县利巴回答： 在做QRT-PCR时,一定要有内参,即在PCR时,每个标本都要做对应的内参,而且每次都是看家基因,一般用bate-actin,有时也用GAPDH.内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下.它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差,跑出的条带要进行灰度分析.用目的基因的积分光密度比上内参的光密度就是你这个基因实际表达的量.希望对你有所帮助.
璩菁18587141518问： qRT - PCR和RT - PCR是一种吗? - ？
株洲县利巴回答： 当然不是一种,一般qRT-PCR就是你后边提到的那一串英文,中文叫做实时定量PCR,这个不是半定量,southern杂交和Northern杂交才属于半定量.而RT-PCR通常指的是反转录PCR,英文是reverse transcription PCR,就是先将mRNA反转录成cDNA,然后再以cDNA为模板,用PCR方法加以扩增.
璩菁18587141518问： 什么是mirvana qrt - pcr 方法 - ？
株洲县利巴回答： 我知道和使用过的U6内参基因只有两个: RNU6-1和RNU6-2.前一个就是常见的u6,后一个有时被称为u6b. 在我的大鼠RNA样本当中,u6表达量有些太高,u6b的Cq值与我的目标miRNA比较接近,稳定性也很好.
璩菁18587141518问： qrt - pcr加cDNA的量,怎么加 - ？
株洲县利巴回答： 因为你所要检测的目的片段丰度不同,所以需要先做个预实验. 怎么做呢? 你先把cdna进行梯度稀释,然后进行pcr,如果你的primer所扩增的ct值在15-25之间,那么就是很不错的稀释梯度啦~ 以后实验久按照这个浓度加就好了
璩菁18587141518问： 在qRT - PCR中miRNA的颈环引物是怎么设计的,实验需要注意哪些事项 - ？
株洲县利巴回答： LZ说的是下游引物吧,下游引物是针对反转录时的茎环引物设计的;LZ首先要知道你的反转录引物的序列,然后设计与反转录引物的非茎环配对的下游定量引物,上游引物则是特异性结合miRNA的引物
璩菁18587141518问： 做RT - PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因啊? - ？
株洲县利巴回答： 内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下 它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差.PCR时,每个标本都要做对应的内参,...
璩菁18587141518问： qRT - PCR结果用什么统计学方法分析 - ？
株洲县利巴回答： 生存分析(Survival analysis)是指根据试验或调查得到的数据对生物或人的生存时间进行分析和推断,研究生存时间和结局与众多影响因素间关系及其程度大小的方法,也称生存率分析或存活率分析.
璩菁18587141518问： 用qRT - PCR测某转录因子的mRNA,该蛋白具有三种不同亚型,引物要如何设计我要测某转录因子Sc,S有三个亚型abc,但一般报道里见ac较多.NCBI上只找... - ？
株洲县利巴回答：[答案] 这个我和很久以前的一个课题很接近啊. 首先,你要很明确你用来做实验的细胞这三种亚型都有充分的表达,或者某种细胞系,某种亚型的表达高. 然后,如果只是翻译位点不同的话,那就和PCR无关了,应该改用western,可以测到不同的蛋白(一...
