论述RT-PCR检测基因表达的实验步骤及如何判断并消除DNA污染所造成的影响。
首先，RNA不能用于PCR扩增的模板，因此有RNA污染的DNA不会影响扩增；其次，RT-PCR指的是从RNA反转录成DNA再进行扩增的过程，因此，不存在RNA污染DNA的说法，只有后者污染前者的说法。
RT-PCR实验，主要分为3步：
total RNA的提取
mRNA的反转录
荧光定量PCR
由于字数限制，详细步骤可以参考下面网址。
消除DNA污染：
按照说明书加入足量的Trizol，细胞过多会引起DNA污染。
现在已经有去除基因组污染的反转录试剂盒，已经在很多实验室常用。你可以尝试一下。
RT-PCR实验，主要分为3步：
total RNA的提取
mRNA的反转录
荧光定量PCR
消除DNA污染：
按照说明书加入足量的Trizol，细胞过多会引起DNA污染。
现在已经有去除基因组污染的反转录试剂盒，已经在很多实验室常用。你可以尝试一下。
试剂盒都有PROTOCAL的。
常用的植物病毒分子检测诊断技术有哪些?
1.提纯病毒材料PCR扩增 2.感病组织PCR产物 3.健康组织PCR产物 4.分子量标准 RT-PCR技术是检测植物病毒中灵敏度最高的方法之一。其灵敏度比ELISA高100～1000倍。比核酸分子杂交高10～100倍。目前已有PVY、CMV、CarMV、TAV、CVB、ToRSV、TRSV、PNRSV等花卉病毒的特异引物和成熟的RT-PCR技术。2 核酸...
RT-PCR的原理是什么?有何用途?
用途：通过逆转录，以及taq酶利用HIV的特异引物进行扩增，最终的循环数可以反应你的这群T细胞正在被多少个HIV侵染。 相对定量常用于检测实时的转录谱。1.逆转录PCR（reverse transcription PCR）或者称反转录PCR（reverse transcription-PCR, RT-PCR），是聚合酶链式反应（PCR）的一种广泛应用的变形。在RT-...
RT-PCR检测方法的具体步骤
将上述分装好的PCR小管分别加入模板。首先加入阴性对照管（5μL无菌水），然后分别加标本RNA（每管5μL），最后加入阳性对照RNA（每管5μL）。3、RT-PCR反应 将上述加好模板的反应管混匀，短暂离心后放入PCR仪进行RT-PCR 扩增。4、RT-PCR产物检测 1）2.0％琼脂糖凝胶制备：称取2.0g Agarose...
论述RT-PCR检测基因表达的实验步骤及如何判断并消除DNA污染所造成的影 ...
RT-PCR实验，主要分为3步：total RNA的提取 mRNA的反转录 荧光定量PCR 消除DNA污染：按照说明书加入足量的Trizol，细胞过多会引起DNA污染。现在已经有去除基因组污染的反转录试剂盒，已经在很多实验室常用。你可以尝试一下。
逆转录原理
逆转录PCR (RT-PCR )具有较高的灵敏性、操作简单等优点，常用于基因定量分析、生物学检测等，此外常用逆转录PCR克隆目的基因。 本文主要讲述了逆转录PCR的原理、重要参数以及操作注意事项。cDNA的合成是RT-PCR 的重要环节。以mRNA为模板，在逆转录酶的催化下，随机引物、oligo(dT)或基因特异性引物的引导...
rtpcr操作步骤
rtpcr操作有5个步骤。具体操作如下：1、总RNA提取。DEPC处理水溶解RNA，-20℃保存，备反转录之用。2、反转录。按下列组成调制反应液：样品总RNA 1μg；随机引物或oligo-dT(18-20) 100pmol；脱氧核苷三磷酸(每种dNTP各l0mmol／L) 1μl；反转录缓冲液(5×) 4μl；RNase抑制剂(20~40U...
求RT-PCR 流程和注意事项
解答:1.RT-PCR有两种做法:条件具备的话可用kit进行一步法进行;若条件不太好的话可分两步进行逆转录再PCR。但后来发现两步法的结果更加理想,条带特异性强且无拖尾现象,我推 测是体系更加单一比较利于PCR的进行,当然也可能是我买的kit不太好。(promega)。2.RT-PCR应具备的条件高质量的RNA(保留后可做5,3RACE...
怎么才能分清PCR、qPCR、RT-PCR、RT-qPCR“四胞胎”呢?
RT-qPCR（逆转录实时定量聚合酶链式反应）是RT-PCR与qPCR的结合，先通过反转录酶将RNA转录为cDNA，随后用qPCR进行实时定量分析。这种方法用于RNA分子的定量研究，如基因表达分析、病毒载量检测等。综上所述，这些技术在应用领域和检测对象上各有侧重，选择合适的技术取决于具体的研究目标和样品类型。在探索...
列举两种研究基因表达模式的方法并简述其原理
1、经典的半定量RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR。提取总RNA，通过光度计和电泳法检测质量并定量，采用反转录试剂盒进行反转录。对于半定量RT-PCR，采用内标基因（如25SRNA）引物对各样品进行普通PCR扩增和电泳，证明反转录成功，并通过调整加入的总cDNA第一链的量，使各样品间内标扩增条带亮度达到一致。然...
现在到底有多少 种类PCR
RT-PCR: 从RNA起始，通过逆转录酶形成cDNA，用于检测RNA表达。它是一种半定量方法，用于转录水平的研究。免疫PCR (IPCR): 以标记抗体为探针，结合抗原检测，理论上极灵敏，可扩展ELISA的检测范围，可用于半定量分析。巢式PCR: 通过内外引物对拷贝量低的DNA片段进行两轮扩增，适用于微量DNA或组织样本。...
店屈藏青： RT-PCR实验,主要分为3步: 1. total RNA的提取 2. mRNA的反转录 3. 荧光定量PCR 消除DNA污染: 1. 按照说明书加入足量的Trizol,细胞过多会引起DNA污染. 2. 现在已经有去除基因组污染的反转录试剂盒,已经在很多实验室常用.你可以尝试一下.
志丹县15318671996： 如何做RT - PCR实验 - ？
店屈藏青：[答案] RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术.首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段.RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平,细胞中RN...
志丹县15318671996： 列举两种研究基因表达模式的方法并简述其原理 - ？
店屈藏青： 1、经典的半定量RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR.提取总RNA,通过光度计和电泳法检测质量并定量,采用反转录试剂盒进行反转录.对于半定量RT-PCR,采用内标基因(如25SRNA)引物对各样品进行普通PCR扩增和电泳,证明反转录成...
志丹县15318671996： 逆转录PCR的介绍 - ？
店屈藏青： 逆转录PCR(reverse transcription PCR)或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形.在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增.
志丹县15318671996： RT - PCR的原理是什么?有何用途? - ？
店屈藏青：[答案] RT-PCR有两种解释:\x0d1,最常用的理RT 是'逆转录'(reverse transcription)的缩写\x0d2,现在也有人这么用:RT是'实时'(real time)的缩写\x0d1,先说逆转录PCR:\x0d这项技术使用的'逆转录酶'来自逆转录病毒,是一种能按照碱基互补配...
志丹县15318671996： 新基因功能的研究方法设计实验,研究一新基因功能.简述流程. - ？
店屈藏青：[答案] 基因功能的研究思路主要包括: 1.基因的亚细胞定位和时空(发育期或梯度药物处理浓度,不同组织/器官)表达谱; 2.基因在转录水平的调控(可以通过genome walking PCR或通过已有的资源库寻找该基因的启动子等转录调控区域,通过单杂交或...
志丹县15318671996： RT - PCR如何用来分析基因的时空表达? - ？
店屈藏青： rt-PCR不知道基因的时空表达,但它能分析某个时空(时,发育阶段;空,取材组织或部位)的样本中mRNA的数量.mRNA被反转录成cDNA,实时监控每轮pcr后产物的量,达到分析不同mRNA的含量,mRNA的含量反映了基因的表达.
志丹县15318671996： 什么是RT - PCR、Real - time PCR及其应用 - ？
店屈藏青： RT-PCR是反转录PCR,是将提取的mRNA逆转录为cDNA后进行PCR的实验.可定性或半定量mRNA的量. Real time PCR是实时定量PCR,可以精确测定起始模板的量.用于定量测定.
志丹县15318671996： PCR,RT - PCR,实时荧光定量PCR的区别与联系 - ？
店屈藏青：[答案] 你所说的PCR应该就是最常规的PCR,以DNA为模板,通过上下游引物,实现DNA的扩增 RT-PCR一般情况下是指反转录PCR(reverse transcription),尽管有些资料上说实时荧光定量PCR也(realtime fluores-cence quantitative PCR)也简称RT-...
志丹县15318671996： rt - pcr的值为 什么意思 - ？
店屈藏青： 阈值指指数增长期荧光信号的临界值,一般PCR仪会自动给出阈值,而CT指就是扩增曲线达到阈值时的循环圈数.
