为什么跑PCR要用CDNA，而不用本身的DNA
你做的是不是RT-PCR， 这个就是以反转录得到的cDNA为模板的。
我们做的时候一般是提取植物总的RNA，然后采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，主要是获得目的基因或检测基因表达，判断目的基因mRNA转录水平的相对量的变化。因为直接提取DNA的话，并不能证明该基因在其他细胞体内进行表达，通过这种方法可以克服假阳性。仅供参考。
首先你反转录用的是random primer还是oligoT 得去查一下这个基因的mRNA有没有PolyA尾巴
其次这有点太长了 引物的影响非常大 把退火温度降低点试试 不行就换对引物 再不行就只能分段P再连起来
在PCR技术中CG代表什么?
第一，PCR中，C是 胞嘧啶，G是鸟嘌呤。第二，PCR中如果GC含量过高，就会导致退火温度过高，容易导致PCR不成功，设计PCR时候应该考虑GC含量。
为什么跑PCR要用CDNA,而不用本身的DNA呢
那要看你想要扩增的是什么基因片段了。cDNA是由RNA反转录而来。有直接用基因组DNA跑PCR，为了是得到基因组本身的DNA片段或做DNA检测等；而用cDNA扩增是为了得到基因的外显子片段或者检测目的基因是否表达等，这样制备的DNA片段还可用于目的基因的过表达等。
pcrc入会条件
Pcrc超跑俱乐部的全称是Performance Cars Racing超跑俱乐部。标准是会员必须拥有至少一辆200万以上的世界级汽车，或者911保时捷911和日产GT-R。PCRC超跑俱乐部成立于2018年。成员主要由90后金融资产2000万以上的中国高净值超级跑者组成。覆盖五个国家:中国、日本、英国、澳大利亚和菲律宾。Pcrc超跑俱乐部每年为全...
qPCR中c是什么意思?
在实时荧光定量PCR (qPCR) 中，Cq 值代表着 PCR 反应的阈值。Cq 值越低，说明模板开始翻倍的时间越早，即样本中的目标基因含量越高。因此，Cq 值可以用来估计目标基因表达量的相对水平。在 qPCR 中，表达量通常使用 2^-ΔΔCt 方法进行分析，其中ΔΔCt 是指两个基因，如目标基因和参考基因，在...
为什么有的在跑电泳之前,PCR产物要在94°C变性5min,作用是什么呀
电泳的目的是看DNA片段的长度，而电泳上DNA移动速度除了受片段长度的影响还受到其结构的影响.让DNA变性，所有样品都是线形DNA。 这时所有电泳上所有DNA的移动速度只和其长度有关。
在pcr反应中下列物质不需要的是()A 模板B 引物C NTPD Taq DNA聚合酶...
C不需要，需要的是dNTP。
高中生物,利用PCR技术扩增目的基因为什么C,G之间形成的氢键更多时需设定...
加快反应速率，因为氢键多所以会慢，如果温度低自发过程会很慢，而且容易发生错配。（所以退火时不能瞬间降低温度），另外如果序列太复杂的话也会有同样的麻烦！
在PCR反应中不需要以下哪种物质参加?
在PCR反应中不需要RNA参加。PCR反应也称为聚合酶链式反应。PCR是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖（5＇－3＇）的方向合成互补链。基于聚合酶制造...
生物PCR引物设计 5‘端富集GC 3’端少GC而且以T结尾 这样对吗 谢谢...
端的错配或者二聚体，因为GC配对是较为牢固的，是难以解开的。就可能会造成非特异扩展。但是我建议最后一个如果可以的话以G、C结尾。其实以我的经验，设计引物的那些原则可以不要太讲究，毕竟能跑出来才是硬道理。跑得漂亮自然更好。对于有些复杂区域，本来就很难设计引物，勉强也在所难免。
RT-PCR,QRT-PCR,real-timePCR之间什么区别
real-time PCR：实时PCR(real-time PCR)属于定量PCR（Q-PCR）的一种，以一定时间内DNA的增幅量为基础进行DNA的定量分析。Real-timePCR与reverse transcription PCR相结合，能用微量的RNA来找出特定时间细胞组织内的特别表达的遗传基因。这两种RT PCR的组合又被称之为定量RT-PCR（QRT-PCR）。
掌亲伊丁： 你做的是不是RT-PCR哦 这个就是以反转录得到的cDNA为模板的
磴口县19193737700： cDNA是双链么real time PCR为何用cDNA 而不是用直接提取的DNA做 - ？
掌亲伊丁：[答案] 你知道real time PCR用cDNA和用DNA的目的区别在哪儿吗?用DNA的一般是检测基因组中目的片段的数量的用cDNA的一般是检测目的基因表达量的,这当然就需要检测mRNA的量,但是RNA太容易被分解,难以检测,故而用反转录而成的c...
磴口县19193737700： 荧光定量PCR引物为什么要跨内含子设计?？
掌亲伊丁： 避免基因组DNA的影响. 荧光定量PCR的扩增区段比较小,也就200bp左右,而且一般以cDNA为模板.如果不注意引物设计的话,很可能落在同一个外显子内.此时,无论cDNA还是基因组DNA都会给出同样的信号,也就是说定量会出现误差.如果引物跨内含子,则cDNA会给出信号,而基因组DNA由于引物无法完全配对而没有信号,也就避免了基因组DNA的影响.
磴口县19193737700： 为什么不用mRNA作为实时荧光定量pcr的模板 - ？
掌亲伊丁： RNA分子怎么能作为PCR模板呢?PCR的酶是DNA聚合酶,需要用DNA为模板!因此需要mRNA逆转录为cDNA,再以cDNA为模板才能进行PCR反应.
磴口县19193737700： 为什么基因克隆时用cDNA文库而不用基因组文库? - ？
掌亲伊丁： (1)基因组含有的基因在特定的组织细胞中只有一部分表达,而且处在不同环境条件、不同分化时期的细胞其基因表达的种类和强度也不尽相同,所以cDNA文库具有组织细胞特异性.(2)cDNA文库显然比基因组DNA文库小得多,能够比较容易从中筛选克隆得到细胞特异表达的基因.(3)对真核细胞来说,从基因组DNA文库获得的基因与从cDNA文库获得的不同,基因文库所含的是带有内含子和外显子的基因组基因,而从cDNA文库中获得的是经过剪接、去除了内含子的cDNA.
磴口县19193737700： 荧光定量PCR引物为什么要跨内含子设计? - ？
掌亲伊丁： 荧光定量PCR的扩增区段比较小,也就200bp左右,而且一般以cDNA为模板.如果不注意引物设计的话,很可能落在同一个外显子内.此时,无论cDNA还是基因组DNA都会给出同样的信号,...
磴口县19193737700： 为什么有的实验提DNA有的提RNA来做PCR - ？
掌亲伊丁： 实验目的不一样.如果验证基因是否表达,要提取RNA做RTPCR,因为只有基因转录为mRNA才能表达.如果是验证该基因是否存在,或者验证某一保守序列,提DNA就可以了.此外,有的物种用RNA做遗传物质,比如流感病毒,那么也要提RNA来做实验.
磴口县19193737700： 荧光定量PCR引物为什么要跨内含子设计 - ？
掌亲伊丁： 因为模板是mRNA,用来检测基因的表达量,mRNA经过修饰后没有内含子
磴口县19193737700： 为什么通常要用cDNA而不用基因组DNA - ？
掌亲伊丁： cDNA是没有内含子的编码蛋白的基因组序列,直接翻译为起作用的蛋白,基因组DNA又叫gDNA,由外显子和内含子组成,需特殊的酶剪切掉内含子,才能翻译成蛋白.
磴口县19193737700： 请教各位,定量PCR是不是一定要以cDNA作模板,可不可以直接拿总DNA作模板直接做定量? - ？
掌亲伊丁：定量PCR的模版既可以使总DNA,也可以是cDNA,但两种做法的用途不同.如果用总DNA做模版,你检测的就是总DNA的拷贝数.如果以cDNA为模版,你检测的就是某个基因的表达水平.
