gapdh蛋白条带多大
作者&投稿：冯克 （若有异议请与网页底部的电邮联系）
康风19242921234问： 我想做PCR内参选beta - actin还是GAPDH好 - ？
景谷傣族彝族自治县久威回答： 常用的蛋白内参有 beta actin 和 GAPDH,它们是有区别的 GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,beta actin分子量为42KD.一般选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上另外,细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的Western Blot一般用GAPDH为内参
康风19242921234问： GADPH是什么 - ？
景谷傣族彝族自治县久威回答： GAPDH是参与糖酵解的一种关键酶,由4个30-40kDa的亚基组成,分子量146kDa,检测条带大约在36kDa.GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达,广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参.因为GAPDH 作为管家基因在同种细胞或者...
康风19242921234问： pcr结果出不来,每次都是只有100bp以下的条带,没有其他的条带不管是扩gapdh,还是目的基因,都是只在100bpmarker下有一个条带,其他地方没有任... - ？
景谷傣族彝族自治县久威回答：[答案] 首先试剂应该没有问题,现在连作为marker的基因都扩不好,那么一个是你的引物有问题,另一个就是反转录出问题了.遇到这样的问题应该一步一步的排除.首先确定反转录没有问题,一般的鉴定办法是扩增marker基因,但是你现在g...
康风19242921234问： 以actin为内参,同种细胞不同处理,蛋白会产生变化吗 - ？
景谷傣族彝族自治县久威回答： 用内参照是为了评价你的各个上样孔内蛋白的总量是否基本一致,通常使用一些看家蛋白,比如β-actin、GAPDH等等.这些蛋白在所有细胞中的表达量基本一致,所以用他们来作为你加样量的对照.这样western结果中你的目的蛋白经过处理后...
康风19242921234问： PCR时小鼠GAPDH扩出条带而目的基因却扩不出是什么原因?而且不同的cDNA同时扩相同目的基因,一个扩出来一个没有扩出来,但没扩出来的那个... - ？
景谷傣族彝族自治县久威回答：[答案] 既然其他样本有结果,说明引物没有问题.而该样本GAPDH也有,说明cDNA没有问题.PCR试剂也OK.目的基因在这个样本中表达很低.如果是做定量的话建议用real time.这样肉眼看不到的也可以由荧光探测到.
康风19242921234问： 蛋白质样品纯度排序:PAGE一条带,SDS - PAGE一条带,双向电泳一个点,分子大小均一 为什么? - ？
景谷傣族彝族自治县久威回答： 你得先弄懂,3个方法的用途和原理. PAGE:是非变性胶,电泳时蛋白保持其自身空间结构,用于特定蛋白空间结构的分析,同一条带中的蛋白应该具有类似的空间结构和大小 SDS-PAGE:是变性胶,SDS的加入破坏了蛋白的空间结构,使得不同蛋白间只有分子量不同的差别,因此电泳后,同一条带的蛋白应该是具有相同/接近的分子量 双向电泳(2D):可以根据蛋白的等电点和分子量进行2维电泳,一个点基本就是一个蛋白 因此,你的样品纯度排序:双向电泳一个点>PAGE一条带>SDS-PAGE一条带
康风19242921234问： 为什么western blot band条带的大小和预测的分子量大小不同? - ？
景谷傣族彝族自治县久威回答： 但即使是这样,Western Blot得到的条带大小依然会和预计的分子量大小有出入.大部分常见的原因如下:1.翻译后修饰—比如蛋白的磷酸化,糖基化等,这些都会增加蛋白的分子量大小.2.翻译后剪切—比如很多蛋白首先被合成为前体形式,然后通过剪切获得生物学活性,比如pro-caspases.3.剪接变异体—相同的基因,经过选择性剪接会产生不同分子量大小的蛋白.4.相对电荷—氨基酸的组成 (带点 vs 不带电) 5.多聚体—比如蛋白二聚体.
康风19242921234问： RT - PCR中内参蛋白GAPDH和b - actin人和小鼠的可以用同一对引物吗? - ？
景谷傣族彝族自治县久威回答： 要回答这个问题必须看你引物的序列.你贴出来我帮你查一下,你自己也可以BLAST一下.如果在人和鼠的基因中都可以BLAST到,则可以用,否则就不可以. 虽然这些House Keeper基因的同源性很高,如果引物不在同源区,还是没办法混用的.
康风19242921234问： 标准66kBSA跑SDS - PAGE,maker条带清息,为什么蛋白胶上BSA的带在大概50kd的位置啊? - ？
景谷傣族彝族自治县久威回答： 两种可能: 1.购买的Maker不准确. 2你在给片子标记的时候标的不够准确. 你可以再跑个抗体看看大小多少,来确定一下你的Marker是否正确.
