gapdh和actin不一致

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门律15594816530问： 我想做PCR内参选beta - actin还是GAPDH好 - ？
潜山县伊正回答： 常用的蛋白内参有 beta actin 和 GAPDH,它们是有区别的 GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,beta actin分子量为42KD.一般选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上另外,细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的Western Blot一般用GAPDH为内参

门律15594816530问： Western Blot为什么必须要用内参 - ？
潜山县伊正回答： 内参作为一个参考物选用一个表达量相对稳定的蛋白,如actin,GAPDH等.不同方法处理细胞时内参的表达量不变,目的蛋白有可能会有变化.western中各泳道的内参的条带一样,那说明蛋白浓度一样.总蛋白浓度一样,目的蛋白条带宽度差异才能体现出目的蛋白表达量的差别.

门律15594816530问： 以actin为内参,同种细胞不同处理,蛋白会产生变化吗 - ？
潜山县伊正回答： 用内参照是为了评价你的各个上样孔内蛋白的总量是否基本一致,通常使用一些看家蛋白,比如β-actin、GAPDH等等.这些蛋白在所有细胞中的表达量基本一致,所以用他们来作为你加样量的对照.这样western结果中你的目的蛋白经过处理后...

门律15594816530问： 做RT - PCR的时候为什么要设置标准反应体系和管家基因反应体系? - ？
潜山县伊正回答： 在做QRT-PCR时,一定要有内参,即在PCR时,每个标本都要做对应的内参,而且每次都是看家基因,一般用bate-actin,有时也用GAPDH.内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下.它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差,跑出的条带要进行灰度分析.用目的基因的积分光密度比上内参的光密度就是你这个基因实际表达的量.希望对你有所帮助.

门律15594816530问： western blot 的内参不一致,急求助 - ？
潜山县伊正回答： 要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot.因为Western Blot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化.虽然,顺利的时候Western Blot做起来...

门律15594816530问： RT - PCR数据分析 - ？
潜山县伊正回答： 需要样本间平行比较.目的基因/GAPDH比值越大,说明目的基因表达量越高.比如1号样本目的基因/GAPDH比值等于0.5;2号样本目的基因/GAPDH比值等于0.8;那就说明2号样本中目的基因的表达量比1号样本高.

门律15594816530问： 荧光定量PCR的内参和目的基因一定要放一起吗 - ？
潜山县伊正回答： 荧光定量PCR的内参和目的基因一定要放一起内参就是一个表达量在各个组基本保持不变的基因,又叫看家基因,比如常用的GAPDH, actin.或者18s rRNA也可以.如果内参表达量一致,说明你PCR的上样量一致,样本的质量也一致.如果出入很大,说明你的样本的浓度或者是质量有问题.测到的目的基因的表达量就不可靠了

门律15594816530问： 免疫组化不出结果,我到底该怎么做 - ？
潜山县伊正回答： 用GAPDH或者beta-actin做阳性对照(这里的对照只是用来预实验或者检测某个实验步骤,不作为最终结果),并不仅仅局限于RT-PCR、原位杂交等方法啊.免疫组化当然也可以啊,只不过一个是核酸水平,一个是蛋白水平.你可能觉得如果用GAPDH或者beta-actin做阳性对照的话,还得买抗体,呵呵!不过对于一般做蛋白的实验室,这两个蛋白的抗体都是必备的.不知楼主你们实验室有没有.

门律15594816530问： gpda gene是内参基因吗 - ？
潜山县伊正回答： 内参就是一个表达量在各个组基本保持不变的基因,又叫看家基因,比如常用的GAPDH, actin.或者18s rRNA也可以.扩增曲线和溶解曲线不是一个概念.扩增曲线是每扩增一个循环,测量一次荧光强度.这个由底物的浓度和扩增效率所决定...

门律15594816530问： 常用的内参基因及其使用范围?请大家推荐生物方面的论坛 - ？
潜山县伊正回答： 内参即是内部参照,它们在各组织和细胞中的表达相对恒定,在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物 你可以去生物帮那里了解这方面的信息,那儿技术文档、视频资源丰富,我很喜欢到那里找想要的东西,而且还有很多软件可以下载,...

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