gapdh内参蛋白
作者&投稿：邰克 （若有异议请与网页底部的电邮联系）
司迹15639641801问： 我想做PCR内参选beta - actin还是GAPDH好 - ？
盐都区橘红回答： 常用的蛋白内参有 beta actin 和 GAPDH,它们是有区别的 GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,beta actin分子量为42KD.一般选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上另外,细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的Western Blot一般用GAPDH为内参
司迹15639641801问： 请问,GAPDH作为RT - PCR内参的原理是什么呀?我知道为什用它做内参了,就是不清楚怎么用它, - ？
盐都区橘红回答：[答案] 一般认为一些持家基因的表达量在不同状态下变化不大,所以可以认为它们表达是恒定的,故而用来做内参 简而言之,就是你有两个样品(譬如不同生长条件或者不同组织的),要比较其中某基因A表达转录变化,就分别比较两个样品中A相对于...
司迹15639641801问： GADPH是什么 - ？
盐都区橘红回答： GAPDH是参与糖酵解的一种关键酶,由4个30-40kDa的亚基组成,分子量146kDa,检测条带大约在36kDa.GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达,广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参.因为GAPDH 作为管家基因在同种细胞或者...
司迹15639641801问： 看家基因GApDHmRNA引物是什么东西?有什么用?成分 - ？
盐都区橘红回答： 有,GAPDH是三磷酸甘油醛脱氢酶,是糖酵解途径中的关键酶.糖酵解途径就是将葡萄糖转化为ATP的过程,负责为生物体提供能量,几乎所有的生物都有该途径.因此GAPDH常常被用来作为内参基因,另外还有β-actin、Ubqutin等由于其广泛存在,也可作为内参基因.
司迹15639641801问： α - 珠蛋白可以做内参吗 - ？
盐都区橘红回答： α-平滑肌肌动蛋白是23kD.1、如果是提取的总蛋白,然后2113做WB,用β-actin或者GAPDH做内参肯定是没有问题的,这是公5261认的东西.2、如果用膜蛋白提取试剂盒提取蛋白,再用β-actin作为内参似乎不妥,因为理论上来讲β-actin在膜上是不表达的.WB能做出β-actin来是因为膜4102蛋白提取时把胞质蛋白也提出来了.然而,如果我们试验目的是用药物处理1653细胞,比较处理前后某种膜蛋专白的表达情况,此时用膜蛋白提取试剂盒提取膜蛋白后再用β-actin做内参似乎就不妥了,因为你根本不知道药物处理前后混属杂了多少的胞质蛋白进来.如果没有胞质蛋白混进去的话,β-actin就是检测不到的.
司迹15639641801问： 做WB时GAPDH可以用作核蛋白内参吗 - ？
盐都区橘红回答： 可以
司迹15639641801问： 做RT - PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因啊? - ？
盐都区橘红回答： 内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下 它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差.PCR时,每个标本都要做对应的内参,...
司迹15639641801问： Western blot 内参跑不齐怎么调整 - ？
盐都区橘红回答： 第一,应该确认每个样品表达GAPDH的量一样,虽然是持家基因,本人觉得不同细菌可能表达量不一样,造成信号强弱不一样.可以通过考马斯亮蓝染色来确定上样量的差异,调整上样量一样再检测GAPDH. 第二,内参跑不齐.一般是跑胶...
司迹15639641801问： 哪位知道GAPDH内参有什么优点? - ？
盐都区橘红回答： ◆Real-time PCR技术的原理就是用一种标准对照能够估计出一种特异性靶DNA或RNA分子的相对含量. ◆这种标准对照就是参照物,在定量PCR中,用它来作为扩增系统的阳性对照,并作为未知样品定量的标准,同时通过竞争性作用校正扩增...
