流式细胞术同型对照设置表
流式细胞术检测细胞表面抗原的步骤
1. 定量细胞浓度 2. 分为2组，一组为实验组，另一组为抗体对照组 3. 两组都先加入非特异性的IgG，封闭可能的Fc受体 4. 按照抗体生产厂家的推荐浓度加入抗体，对照组加入同样荧光标记的非特异性同型抗体。5. 4°孵育半小时 6. 用含0.5% BSA的PBS洗2遍 7. 上机后先用抗体对照组设置阴性Gate...
流式细胞术的应用范围
可用于白血病的分型、肿瘤细胞染色体的异倍性测定,以及免疫学研究,并已开始用于细菌鉴定,病毒感染细胞的识别和艾滋病感染者T4、T8细胞的记数。自70年代以来,随着流式细胞技术水平的不断提高,其应用范围也日益广泛。流式细胞术已普遍应用于免疫学、血液学、肿瘤学、细胞生物学、细胞遗传学、生物化学等临床医学和基础...
Bioxcell|欣博盛生物:anti-mouse Ly6G\/Ly6C (Gr-1)
推荐同型对照为IInVivoMAb rat IgG2b isotype control, anti-keyhole limpet hemocyanin（货号BE0090）。建议使用InVivoPure™ pH 7.0 Dilution Buffer进行稀释。免疫原为小鼠中性粒细胞。推荐应用包括in vivo depletion of Gr-1+ myeloid cells，流式细胞术，组织化学（石蜡）和冷冻组织化学。产品...
同种型对照抗体
选择同型对照时，需考虑与实验抗体的一致性，如宿主物种、Ig类型、亚型、标签等。为了验证实验的准确性，应选择与实验抗体特性匹配的同型对照，并通过活细胞实验如图5所示的直接流式细胞术进行验证。阿拉丁提供这类对照试剂，确保实验结果的可靠性和准确性。对于各种细胞类型和物种的实验，同型对照的性能尤...
流式细胞术 直方图单峰偏移不明显怎么判断
没有设置同型对照。偏移的峰其实不是特异性染色，而是非特异性结合。抗体的特异性和浓度不佳。可以多试几个不同的抗体。最佳抗体浓度必须根据不同的样本进行滴定，算出Stain Index。实验的抗体浓度按照SI来进行。本来阳性率就很低，很弱，如果真是这样，那就要加做其他抗原，增加目的细胞在最终细胞群中...
小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)的培养
注:用于DC 鉴定的表面标志物的表达在流式图上均呈现单个峰,且多数情况下不能与阴性峰完全区分开来。为避免多色分析时补偿调节不好导致结果的不准确性,建议最好用单标,最多用双标来做DC 表面标志的分析,而且必须使用同型对照,而非空白细胞对照来排除背景染色。 因本文涉及技术内容较多,如大家对实验步骤有疑问,可...
流式图解析
设门需要考虑的因素——对照的设置 1). 必须有不染色的细胞作为空白对照 2). 抗原抗体的结合是否是特异性结合 a. 用同型对照判断是否存在非特异性结合 b. 用Fc block阻断细胞上的Fc受体非特异结合流式抗体 c. 用死活染料排除死细胞的干扰 3). 用阳性对照检验染色方案是否可行 4). 不同荧光素...
免疫荧光标记法
1) 取已制备好的单细胞悬液，用 1 ～ 3%的多聚甲醛固定 30 分钟（也可 4℃ 保存过夜 ）；2) 用 PBS 洗两次，弃上清；3) 细胞膜打孔，加入 0.1%皂素 200μl，室温 10 分钟；4) 用 PBS 洗涤两次；5) 加入第一抗体， 室温 30 ～ 60 分钟，或 4℃过夜， 同时须设阴性对照或同型对照...
流式细胞术测细胞表面抗原步骤
1. 定量细胞浓度 2. 分为2组，一组为实验组，另一组为抗体对照组 3. 两组都先加入非特异性的IgG，封闭可能的Fc受体 4. 按照抗体生产厂家的推荐浓度加入抗体，对照组加入同样荧光标记的非特异性同型抗体。5. 4°孵育半小时 6. 用含0.5% BSA的PBS洗2遍 7. 上机后先用抗体对照组设置阴性Gate...
小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)的培养
通常推荐使用1μg\/ml的LPS或重组的CD40L三聚体蛋白。【BMDC相关试剂推荐】- 在进行DC鉴定时，表面标志物的流式图上呈现单个峰，多数情况下无法完全与阴性峰区分开。为避免多色分析时补偿调节不准确导致结果的不准确性，建议使用单标或最多双标进行分析，并使用同型对照来排除背景染色。
佛山市海替回答： 同 型对照是使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白,用于消除由于抗体非特异性与细胞结合而产生的背景染色.同型 对照是真正意思上的阴性对照,它不但可以用来设定流式细胞仪的电压,而且还可以帮忙省去昂贵与繁琐的重组细胞因子竞争封闭步骤.
盈曲18527503012问： 流式细胞术中非特异性显色是如何产生的 - ？
佛山市海替回答： 流式的isotype对照(同型对照),就是使用相同标记,相同亚型的非特异性抗体,在另外一个管子的样本,采用同样的染色步骤染色.比如,你使用了小鼠IgG1,PE标记的特异性抗体,那就选用小鼠IgG1,PE标记的非特异性抗体.下面这个图,是一个比较典型的使用了同型对照的结果图灰色的曲线是未染色的样本,黄色是同型对照,红色是特异性抗体染色.由于细胞对抗体的非特异性结合,一般同型对照都会比未染色样本的荧光信号要强.所以设置阴性阈值的时候,要根据同型对照,而不是未染色的细胞.
盈曲18527503012问： 影响流式细胞术实验结果的主要因数有哪些 - ？
佛山市海替回答： 1、样品处理,去除杂细胞、碎片等对正常细胞的计数;2、对照:设立负对照、同型对照、弱阳性对照,帮助你正确判断阴阳的界定;3、正确的补偿;4、正确的染色方法,抗体的比例...
盈曲18527503012问： 关于细胞流式的同型对照的问题 - ？
佛山市海替回答： 所谓同型对照,就是因为担心抗体会有非特异性的结合而设置的一种对照. 选用和特异性抗体同种亚型的,同样荧光素标记的抗体,采用同样的染色步骤染同样浓度的细胞.然后上机检测.如果细胞有非特异性的结合,那同型对照的荧光强度可能会比未染色的阴性对照要高一些. 同型对照只用于那种阳性和阴性之间没有明确分解的情况.如果阳性细胞群非常清楚,是不需要同型对照的.另外,在多色同染的情况下,也不采用同型对照,而是采用FMO(fluorensence minus one)对照. 另外,对于同型对照的使用,也有很多反对意见.就算是同型抗体,也可能会有不同的亲和力,并不一定就能真实反应非特异性的结合.
盈曲18527503012问： 如何选择同型对照 - ？
佛山市海替回答： 同型对照的主要目的是确定一抗的结合是特异性的,而不是非特异性的Fc受体或与其他蛋白的相互作用.同型对照要与一抗的来源、Ig分型和标记完全一 致.例如:一抗是FITC标记,其抗体分型是小鼠的IgG1,则同型对照要选择是FITC标记的小鼠的IgG1.这里如同使用流式抗体一样,同样的不可离 开说明书!
盈曲18527503012问： 如何看流式细胞术结果中的图 - ？
佛山市海替回答： 博凌科为解答:FCM数据的存贮的方式是FCS2.0(flow cytometry standard),采用列表排队(List Mode)方式.易于加工处理分析,但缺乏直观性,数据的显示通常有一维直方图、二维点图、等高线图、密度图等几种;由数据还可以做出标准曲...
盈曲18527503012问： 流式细胞结果分析十字线条,对照组要和实验组一直吗 - ？
佛山市海替回答： 你把图都贴一下,不能无法具体回答.理论上在上机测量的时候,实验组和对照组的所有参数都应该设置是一样的.同时要有完整的荧光对照组.所有对照都齐全的情况下,测到什么样就是什么.对照组和实验组都应该使用同一个模板来分析.设置的阈值都应该在同一个位置.而数据测得在什么位置就是什么位置
盈曲18527503012问： annexinv - fitc/pi流式细胞术横纵坐标什么意思 - ？
佛山市海替回答： annexinv-fitc/pi流式细胞术横纵坐标什么意思 Q1:(AnnexinV-FITC)-/PI+,此区域的细胞为坏死细胞.也可能有少数的晚 期凋亡细胞在其中,甚至机械损伤的细胞也包含其中. Q2: (AnnexinV+FITC)+/PI+,此区域的细胞为晚期凋亡细胞. Q3:(AnnexinV-FITC)+/PI-,此区域的细胞为早期凋亡细胞. Q4:(AnnexinV-FITC)-/PI-,此区域的细胞为活细胞.
盈曲18527503012问： 流式细胞的每一组试验都要设置阴性对照和检测对照么 - ？
佛山市海替回答： 因为流式细胞仪检测的是相对信号的强弱,所以,每一组都要有对照.每一种抗体也都要有非特异性抗体作为对照
盈曲18527503012问： 流式测不同主治中的同一种细胞频率要设不同的单阳对照吗 - ？
佛山市海替回答： 这个不一定的,要看具体情况.比如检测CD8T淋巴细胞.设CD3, CD8双阳性的gate.不管是血液,淋巴结还是脾脏来源的,细胞的特征都是一样的.所以这样不同的组织都可以用同样的对照.如果细胞在不同组织内,表面抗原发生变化,那就需要不同的对照了.
