单克隆抗体制备的两种方法
简述单克隆抗体的制备过程及原理。
黄嘌呤(H)、氨基蝶呤(A)和胸腺嘧啶核苷(T))的选择培养基进行培养，未融合的脾细胞因不能在体外无限增值而死亡，未融合的骨髓瘤细胞因缺乏此黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)，不能利用此黄嘌呤而死亡。融合成功的杂交瘤细胞经筛选和克隆化建株，可获得能够产生某种特异性抗体的杂交瘤细胞。
制备单克隆抗体的过程
（一）脾细胞 1．材料 (1)免疫过的血清抗体滴度高的Balb\/c鼠。 (2)1640培养液 单克隆抗体制备流程 (3)2.5％FCS－1640营养液 2．操作方法 (1)拉颈或用CO2处死小白鼠。 (2)将小鼠放于70％酒精中浸泡消毒，取出固定于板上，在无菌条件下取脾。 (3)把脾放入5ml含有2...
单克隆抗体的制备技术路线和关键点
单克隆抗体的大量生产 大量生产单克隆抗体的方法主要有两种: (1)体外使用旋转培养管大量培养杂交瘤细胞,从一清液中获取单克隆抗体。但此方法产量低,一般培养液内抗体含量为10～60μg\/ml,如果大量生产,费用较高。 (2)体内接种杂交瘤细胞,制备腹水或血清。 ①实体瘤法:对数生长期的杂交瘤细胞按1～3×107\/ml...
免疫学技术知识总结 第二章
一、多克隆抗体制备的原理 抗体制备、动物免疫、抗体纯化 二、多抗的基本条件 1. 免疫原的制备 颗粒性抗原:细胞、病毒、细菌等,一般具有较强的免疫原性,可以不加佐剂,直接进行腹腔注射。 可溶性抗原:可溶性抗原的来源主要是天然纯化,或者用目的基因在原核细胞或者真核细胞中表达,可溶性抗原需要与弗氏佐剂完全或不完全...
多克隆抗体的分离纯化
多克隆抗体的提取纯化 一、批量提取法 称取DEAE-纤维素(DE32或DE52)50g，置于1000ml烧杯中，先以蒸馏水漂浮除去细颗粒，再经酸碱处理后，用0.01～0.05mol\/L，pH8.0左右的磷酸盐缓冲液(PB)平衡。将水分抽干，或用布氏滤斗(内放两层滤纸)过滤，收集湿纤维素，以降低其离子强度。按1ml血清...
单克隆抗体的制备原理是什么
单克隆抗体的制备原理：1、要制备单克隆抗体需先获得能合成专一性抗体的单克隆B淋巴细胞，但这种B淋巴细胞不能在体外生长；2、实验发现骨髓瘤细胞可在体外生长繁殖，应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与免疫的淋巴细胞二者合二为一，得到杂种的骨髓瘤细胞；3、杂种骨髓瘤细胞继承两种亲代细胞的特性，它既具有B...
人工制备抗体制备方法有哪些?
在体外，多克隆抗体主要来源于动物免疫血清、恢复期患者血清或免疫接种人群。其特点是来源广泛、制备容易。但由于多克隆抗体是多种不同抗原表位特异性抗体的混合，因此，它不能针对某一特定表位，特异性不高，常出现交叉反应；同时也不易大量制备，其应用受到限制。二、单克隆抗体 制备特异性抗体的理想方法...
如何通过细胞杂交技术制备单克隆抗体?
单克隆抗体技术：精准制造的独特武器 1. 单克隆抗体的诞生 - 抗体，免疫系统中的关键战士，是由B淋巴细胞经过分化，转化为浆细胞后，通过独特基因重排，专一地识别并合成的。每个细胞如同一支特异的箭矢，只瞄准一个特定的抗原目标。2. 千万种可能 - 机体的脾脏藏着无数个B细胞家族，每一种都有其独特...
单克隆抗体的制备原理是什么
单克隆抗体技术原理如下：由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体，称为单克隆抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤（hybridoma）抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。用具备这种特性的单个杂交...
单克隆抗体制备过程中两次筛选的作用分别是什么?
所以产生抗体是不纯的。如果不进一步提纯，这样得到的是多克隆抗体。所以就有了第二次筛选。第二次筛选 要想获得单克隆抗体，所以必须得到由一个细胞分裂而成的一个细胞群，由这样的细胞群产生的抗体才是真正意义的单克隆抗体。(一)筛选的目的 筛选只针对某一种特定的抗原决定簇产生抗体的杂交瘤细胞，...
桐梓县硫酸回答： 单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体.通常采用杂交瘤技术来制备,杂交瘤(hybridoma)抗体技术是在细胞融合技术的基础上,将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤...
归舒19858651726问： 大规模生产单克隆抗体用体内诱生法还是体外培养法 - ？
桐梓县硫酸回答： 大量生产单克隆抗体的方法主要有两种: (1)体外使用旋转培养管大量培养杂交瘤细胞,从一清液中获取单克隆抗体.但此方法产量低,一般培养液内抗体含量为10~60μg/ml,如果大量生产,费用较高.(2)体内接种杂交瘤细胞,制备腹水或...
归舒19858651726问： 关于单克隆抗体的两种培养方式 - ？
桐梓县硫酸回答： 因为活的小老鼠有免疫排斥反应,所以,让杂交瘤细胞在老鼠体内存活并增殖,很难. 但是,一旦成功,就直接抽取腹水 ,提取单克隆抗体,这样,算是比较容易. 体外培养,不设计免疫排斥反应问题,只需要把杂交瘤细胞所需的营养和外界条件设置好,就可以实现增殖了.相对比较容易. 但是因为培养时 所用培养基中加入了各种营养物质 还有细胞代谢产物 还有缓冲物质等等 所以分离提纯很困难.
归舒19858651726问： 单克隆抗体的制备方法 - ？
桐梓县硫酸回答： 常用方法:从经特定抗原刺激的动物体内抽取浆细胞,再与骨膸瘤细胞融合,经两次筛选即可获得杂交瘤细胞,然后进行克隆化培养,即可获得细胞产物----单克隆抗体.
归舒19858651726问： 如图表示单克隆抗体的两种制备方法,①→⑥表示不同的过程,请分析回答下列问题:.(1)在方法1中,细胞A应具备的特点是___.在体外培养细胞Y时,则... - ？
桐梓县硫酸回答：[答案] (1)从图中分析可知,细胞A为骨骼瘤细胞,能进行无限增殖,细胞B为浆细胞,能产生抗体,过程①为利用细胞工程制备单克隆抗体的过程,在细胞培养时需要满足以下条件,无菌、无毒、添加了血浆(或“血清”)的培养基,适宜的温度与pH、含...
归舒19858651726问： 单克隆抗体的制备筛选出的杂交瘤细胞应该直接在体外培养还是注射到小 ？
桐梓县硫酸回答： 单克隆抗体制备有两种方法. 第一种方法是:增量培养法,即将杂交瘤细胞在体外培养,在培养液中分离单克隆抗体.该法需用特殊的仪器设备,一般应用无血清培养基,以利于单克隆抗体的浓缩和纯化. 第二种也是最普遍采用的方法是小鼠腹腔接种法.选用BALB/c小鼠或其亲代小鼠,先用降植烷或液体石蜡行小鼠腹腔注射,一周后将杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中去.通常在接种一周后即有明显的腹水产生,每只小鼠可收集5~10ml的腹水,有时甚至超过40ml.该法制备的腹水抗体含量高,每毫升可达数毫克甚至数十毫克水平.此外,腹水中的杂蛋白也较少,便于抗体的纯化.接种细胞的数量应适当,一般为500000/鼠,可根据腹水生长情况适当增减.
归舒19858651726问： 如图是利用生物学技术制备单克隆抗体的两条途径模式简图.请据图回答相关问题.(1)经过程①依据的原理是___、___,通常用___诱导融合;过程②至少需... - ？
桐梓县硫酸回答：[答案] (1)①表示效应B细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞的过程,其依据的原理是细胞膜的流动性,骨髓瘤细胞能无限增殖,B细胞能产生单一性抗体;诱导动物细胞融合通常用灭活的病毒;过程②至少需要2次筛选才能得到X细胞,第一次筛选获得杂...
归舒19858651726问： 制备单克隆抗体的技术流程是怎样的呢? ？
桐梓县硫酸回答： (一)抗原提纯与动物免疫 对抗原的要求是纯度越高越好,尤其是初次免疫所用的抗... 发生污染、染包体丢失和细胞死亡的机率增加.抗体制备有两种方法.一是增量培养...
归舒19858651726问： 单克隆抗体中两次筛选分别是什么方法 - ？
桐梓县硫酸回答： 第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞,用连续注射抗原,下面具体介绍一下: 1、在实际免疫过程中,由于采用连续注射抗原的方法,且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞,因此,从小鼠脾脏中取出的效应B淋巴...
归舒19858651726问： 1975年科学家首次利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备出单克隆抗体.请观察下图,回答问题:(1)单克隆抗体是指,其特点是___.(2)如图所示的融合过程常用... - ？
桐梓县硫酸回答：[答案] (1)单克隆抗体的特点是化学性质单一,特异性强的抗体特异性强,灵敏度高. (2)图示的融合过程常用聚乙二醇(灭活病毒)作为诱导剂.科学家用针对鼠的单克隆抗体应用与人体,会作为异物产生免疫反应. (3)制备单克隆抗体的B淋巴细胞一般从...
