高效液相色谱中外标一点法计算方法 保留时间反应的是什么

HPLC含量测定时，最终的结果计算采用何种方法（外标一点、外标两点、标准曲线法），理由是什么？~

当然是标准曲线的，算出来的结果更科学合理了，可以避免一点或者两点法误差较大，算出来的结果不准。
但是一般的，HPLC做出来的结果还比较稳定，误差也大不到哪去，所以单点或者两点的话其实也是可以的，没有什么大问题，看你的具体要求了。。希望对你有用！

楼主，您好。 高效液相色谱法是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入供试品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器，色谱信号由记录仪或积分仪记录。　　1.对仪器的一般要求　　所用的仪器为高效液相色谱仪。色谱柱的填料和流动相的组分应按各品种项下的规定.常用的色谱柱填料有硅胶和化学键合硅胶。后者以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基键合硅胶次之，氰基或氨基键合硅胶也有使用；离子交换填料，用于离子交换色谱；凝胶或玻璃微球等，用于分子排阻色谱等。注样量一般为数微升。除另有规定外，柱温为室温，检测器为紫外吸收检测器。　　在用紫外吸收检测器时，所用流动相应符合紫外分光光度法（附录ⅣＡ）项下对溶剂的要求。　　正文中各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变外，其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变， http://www.rmhot.com/plist_1/plist_1_14_0_1.html　　以适应具体品种并达到系统适用性试验的要求。一般色谱图约于20分钟内记录完毕。　　2.系统适用性试验　　按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整，应达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度和拖尾因子.　　(1)色谱柱的理论板数(n)　　在选定的条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间t（以分钟或长度计，下同，但应取相同单位）和半高峰宽（W），按n＝5.54(t／W)计算色谱柱的理论板数，如果测得理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数，应改变色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色谱柱充填的优劣等），使理论板数达到要求。　　(2)分离度　　定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。分离度（R）的计算公式为：2(t－t)R＝──W＋W式中t为相邻两峰中后一峰的保留时间；t为相邻两峰中前一峰的保留时间；W及W为此相邻两峰的峰宽。除另外有规定外，分离度应大于1.5。　　(3)拖尾因子为保证测量精度，特别当采用峰高法测量时，应检查待测峰的拖尾因子(T)是否符合各品种项下的规定，或不同浓度进样的校正因子误差是否符合要求。拖尾因子计算公式为：WT＝──────2d式中W为0.05峰高处的峰宽；d为峰极大至峰前沿之间的距离。除另有规定外，T应在0.95～1.05间。也可按各品种校正因子测定项下，配制相当于80％、100％和120％的对照品溶液，加入规定量的内标溶液，配成三种不同浓度的溶液，分别注样3次，计算平均校正因子，其相对标准偏差应不大于2.0％。　　3.测定法定量测定时，可根据样品的具体情况采用峰面积法或峰高法。但用归一法或内标法测定杂质总量时，须采用峰面积法。(1)面积归一化法测定供试品（或经衍生化处理的供试品）中各杂质及杂质的总量限度采用不加校正因子的峰面积归一法。计算各杂质峰面积及其总和，并求出占总峰面积的百分率。但溶剂峰不计算在内。色谱图的记录时间应根据各品种所含杂质的保留时间决定，除另有规定外，可为该品种项下主成分保留时间的倍数。　　(2)主成分自身对照法　　当杂质峰面积与成分峰面积相差悬殊时，采用主成分自身对照法。在测定前，先按各品种项下规定的杂质限度，将供试品稀释成一定浓度的溶液作为对照溶液，进样，调节检测器的灵敏度或进样量，使对照溶液中的主成分色谱峰面积满足准确测量要求。然后取供试品溶液，进样，记录时间，除另有规定外，应为主成分保留时间的倍数。根据测得的供试品溶液的各杂质峰面积及其总和并和对照溶液主成分的峰面积比较，计算杂质限度。　　(3)内标法测定供试品中杂质的总量限度　　采用不加校正因子的峰面积法。取供试品，按各品种项下规定的方法配制不含内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图；再配制含有内标物质的供试品溶液，在同样的条件下注样，记录色谱图Ⅱ。记录的时间除另有规定外，应为该品种项下规定的内标峰保留时间的倍数，色谱图上内标峰高应为记录仪满标度的30％以上，否则应调整注样量或检测器灵敏度。　　(4)内标法加校正因子测定供试品中某个杂质或主成分含量　　按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子测定用的对照溶液，取一定量注入仪器，记录色谱图，测量对照品和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算校正因子：A／m校正因子（f）＝─A／m式中A为内标物质的峰面积或峰高；A为对照品的峰面积或峰高；m为加入内标物质的量；m为加入对照品的量。　　再取各品种项下含有内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图，测量供试品（或其杂质）峰和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算含量：A含量（m）＝f×──A／m式中A为供试品（或其杂质）峰面积或峰高；m为供试品（或其杂质）的量；f、A和m的意义同上。　　当配制校正因子测定用的对照溶液和含有内标物质的供试品溶液使用同一份内标物质溶液时，则配制内标物质溶液不必精密称（量）取。　　(5)外标法测定供试品中某个杂质或主成分含量，按各品种项下的规定，精密称(量)取对照品和供试品，配制成溶液，分别精密取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量对照品和供试品待测成分的峰面积（或峰高），按下式计算含量：A含量（m）＝m×──A式中各符号意义同上由于微量注射器不易精确控制进样量，当采用外标法测定供试品中某杂质或主成分含量时，以定量环进样为好。

C/C1=A/A1
C为未知物浓度 ，C1为标样浓度
保留时间与测量的物质结构有关，和浓度无关。

被分离样品组分从进样开始到柱后出现该组分浓度极大值时的时间，待测组分定性。

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康平县13555965046： HPLC含量测定中内标法和外标一点法的计算原理是什么? - ？
子命妇科：[答案] 内标法 internal standard method 是色谱分析中一种比较准确的定量方法,尤其在没有标准物对照时,此方法更显其优越性.内标法是将一定重量的纯物质作为内标物(参见内标物条)加到一定量的被分析样品混合物中,然后...

康平县13555965046： HPLC含量测定时,最终的结果计算采用何种方法(外标一点、外标两点、标准曲线法),理由是什么? - ？
子命妇科：[答案] 当然是标准曲线的,算出来的结果更科学合理了,可以避免一点或者两点法误差较大,算出来的结果不准. 但是一般的,HPLC做出来的结果还比较稳定,误差也大不到哪去,所以单点或者两点的话其实也是可以的,没有什么大问题,看你的具体要求...

康平县13555965046： 内标法和外标一点法的计算原理是什么? - ？
子命妇科： 内标法 internal standard method 是色谱分析中一种比较准确的定量方法,尤其在没有标准物对照时,此方法更显其优越性.内标法是将一定重量的纯物质作为内标物(参见内标物条)加到一定量的被分析样品混合物中,然后对含有内标物的样...

康平县13555965046： 有人知道高效液相色谱的外标法是怎样的吗 - ？
子命妇科： 外标法就是以待测成分的对照品作为对照物质,相对比较以求得供试品含量. 简单说,想要测定X样品的浓度,要先配制X对照品,进样分析.然后在配制X样品,进样分析. 根据公式:A样/A对=C样/C对,来计算样品的浓度.其中A是峰面积,C是浓度.因为对照品的含量是已知的,可以求得C对.而A样和A对是可以通过液相色谱读出来的.所以可以求出样品浓度了.

康平县13555965046： 高效液相色谱法的计算方法是什么? ？
子命妇科： 也可按各品种校正因子测定项下,配制相当于80%、100%和120%的对照品溶液,加入规定量的内标溶液,配成三种不同浓度的溶液,分别注样3次,计算平均校正因子,其相对标准偏差应不大于2.0%

康平县13555965046： 1、HPLC中常用的定量方法有几种?外标一点法有何优缺点?2、紫? ？
子命妇科： 常用的内标法,外标法,归一法 外标法有点就是理论上可以测任何浓度.干扰因素比内标法少一点.缺点就是进样量必须准,标样配置繁琐. 紫外检测器的优点就是可以检测任何物质.缺点就是对这种物质的灵敏度不一,波长确定比较难

康平县13555965046： 《中国药典》高效液相色谱法检查杂质的方法有哪些? - ？
子命妇科： 【答案】:B《中国药典》高效液相色谱法检查杂质的方法有;内标法加校正因子测定供试品中某个杂质的含量,计算公式:CX=f*AX/(AS/CS),其中校正因子f=(AS/CS)/(AR/CR);外标法测定供试品中某个杂质的含量,计算公式:CX=CR*AX/AR;加校正因子的主成分自身对照法;不加校正因子的主成分自身对照法;面积归一化法.高效液相色谱法含量测定的方法有:内标法、外标法和加校正因子测定供试品中主成分的含量.

康平县13555965046： 高效液相内标法与外标法有什么区别 - ？
子命妇科： 内标法:是一种间接或相对的校准方法.在分析测定样品中某组分含量时,加入一种内标物质以校谁和消除出于操作条件的波动而对分析结果产生的影响,以提高分析结果的准确度. 内标法在气相色谱定量分析中是一种重要的技术.使用内标法...

康平县13555965046： 高效液相色谱怎么分析分析色谱图和数据,计算含量,有色谱条件 - ？
子命妇科：[答案] 计算含量的方法很多: 面积归一化法,外标法,内标法 常用的: 面积归一化法那很简单,配制一个供试品,进样分析.一个色谱峰代表一个物质,最大的那个通常是你的主峰,其余的基本都是杂质. 杂质(%)=杂质的峰面积/主峰峰面积*100%(这个...