高效液相色谱外标法测含量时，对照品岀峰时间和样品不一致是什么原因？
先改变下流动相看看能不能分开。（设置梯度，有机相由低到高试试）
二者的吸收波长是否一样，如果不一样的话可以设双波长采集数据。分别用各自的波长计算含量。
做液相本人认为最重要的就是流动相，柱子及检测条件，如果你后两者均为改变，在你样品相同的情况下，就要注意流动相了，配制流动相的试剂必须是色谱纯，混合均匀后进行过滤和在线脱气。你可以试一下，希望能帮到你。
保证使用的分析方法（流动相、样品处理等）全部一致的情况下，如果保留时间不一致的可能因素有以下几点：1、自动进样器存在问题，如果是手动也可能触发时间存在问题，也就是系统中存在延时错误；
2、最大的可能是色谱柱的问题，更换色谱柱试试；
3、流路中有阻塞的地方，或者有漏液的地方，压力恒定的话这个可能性不大。
具体情况没有具体的描述，只能从这几方面考虑，也可能是别的原因。
有可能其他的组分与标样的组分有相互作用，导致样品的保留改变，试试尽量保持样品和标样的条件尽量一致，或通过前处理将有干扰的组分减少或去除。
具体什么品种，是不是对照品带酸，样品不带？应该是引入其他基团了吧
高效液相色谱有几种定量方法,其中哪种是比较精确的定量方法?
峰面积法、峰高法、归一法、外标法。峰面积法是比较精确的定量方法 简介：高效液相色谱法（HighPerformanceLiquidChromatography\\HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。它是在生化和分析化学中常用的柱层析仪。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以...
高效液相色谱法测定中药含量采用的方法有哪些?
遵照下面的要求选择合适的方法，HPLC法外标、内标两种，检测器一般UV即可。含量测定分析方法验证的可接受标准简介 摘要：本文介绍了在对含量测定所用的分析方法进行方法学验证时，各项指标的可接受标准，以利于判断该分析方法的可行性。关键词：含量测定 分析方法验证 可接收标准 在进行质量研究的过程中，...
药物分析:中药制剂的含量测定方法
对照品溶液的制备 精密称取桂皮酸对照品适量，加50%甲醇定量稀释成每ml中含0.01mg的溶液。色谱条件 inersil 5ods-ⅱ柱（25cm×4.6mm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸（29：71）；检测波长285nm；流速1.0ml\/min。用外标法测定其含量。桂皮酸对照品和样品的色谱图见图。展望 中药制剂质量标准应该能够...
高效液相色谱测定含量的方法
外标法和内标法。高效液相色谱测定含量的方法有外标法和内标法。高效液相色谱以经典的液相色谱为基础，是以高压下的液体为流动相的色谱过程。
羟苯乙酯检测:高效液相色谱测试尼泊金乙酯含量方法参考
在微源检测实验室，我们严格遵循标准流程，首先将样品溶解稀释，精确测定20μl，形成供试品溶液。对照品的测定同样严谨，外标法的峰面积计算，确保结果的精准可靠。应用广泛，定制服务 高效液相色谱检测不仅限于羟苯乙酯，实验室还针对医药、化工等行业的广泛需求，提供包括ph值、氯化物、硫酸盐等相关项目...
苯并(a)芘的高效液相色谱法测定
外标法定量。再根据试样测定浓度、称样量计算出试样中浓度。目标化合物峰面积和定量校准曲线可以由高效液相色谱仪工作站自动完成，定量校准曲线也可由EXCEL工作软件完成。对自动积分的峰面积应逐一检查各峰基线，对不合理基线进行必要修正。对含量接近检出限水平的试样，可以采用与其浓度相近的标准单点校正。
色谱分析中常用的定量分析方法有哪几种
色谱分析中常用的定量分析方法有哪几种 环境监测中常用到的色谱分析方法有： 气相色 谱法、 高效液相色谱法、 离子色谱法。 环境监测是通过对人类和环境有影响的各种物质的含量、排放量的检测，跟踪环境质量的变化，确定环境质量水平，为环境管理、污染治理等工作提供基础和保证。简单地说，了解环境水平，...
ESTD和ISTD是什么意思
ESTD意思是色谱测量中的外标法，ISTD意思是色谱测量中的内标法。ESTD和ISTD是在色谱法中，用来测样品浓度的方法。ESTD测量方法是按梯度添加一定量的标准品（对照品）于空白溶剂中制成对照样品，与未知试样平行地进行样品处理并检测。ISTD测量方法是将一定重量的纯物质作为内标物（参见内标物条）加到一定...
法莫替丁注射液测定方法
测定法莫替丁注射液中法莫替丁含量的方法采用高效液相色谱法。该方法适用于法莫替丁注射液的分析。原理是将供试品制成甲醇溶液，通过高效液相色谱仪进行色谱分离，紫外吸收检测器在254nm波长下检测法莫替丁的吸收值。通过外标法，根据峰面积计算法莫替丁的含量。所需试剂包括甲醇、水、乙腈、庚烷磺酸...
怎样用高效液相色谱法测定间苯二甲酸的溶解度
我给你设计一个实验方案，应该是可行的。精密量取一定量的溶剂，加间苯二甲酸配制成饱和溶液。然后用外标法来测定饱和溶液中间苯二甲酸的含量。间苯二甲酸可用反相HPLC法，流动相用甲醇-水试试，UV254nm下应该有强吸收。
鲜秆杰宾： 外标法就是以待测成分的对照品作为对照物质,相对比较以求得供试品含量. 简单说,想要测定X样品的浓度,要先配制X对照品,进样分析.然后在配制X样品,进样分析. 根据公式:A样/A对=C样/C对,来计算样品的浓度.其中A是峰面积,C是浓度.因为对照品的含量是已知的,可以求得C对.而A样和A对是可以通过液相色谱读出来的.所以可以求出样品浓度了.
剑川县19341189447： 用高效液相色谱仪测某样品的成分时,如何确定对照品溶液的浓度? - ？
鲜秆杰宾： 常用的是外标法 1、确定分析条件后(流动相比例,色谱柱类型,PH值,柱温等)用对照标准品进行分析,保存分析图,利用色谱工作站校正,得出校正曲线(校正因子); 2、用同样的条件分析未知样品,根据出峰时间确定样品(与标准品相同的物质出峰时间应该相同),对照标准样品的校正曲线计算出未知样品的含量.
剑川县19341189447： 高效液相色谱法采用外标法测定时,校正因子f会对待测物质含量有影响吗?(我用的是苏州岛津的)由于每次进对照品后都要计算f值(对照品浓度/对照品... - ？
鲜秆杰宾：[答案] 当然有影响了.外标法含量就是f值算的啊.外标法的原理就是样品进样量和峰面积(或峰高)相关.供试品含量=f对*标示含量/f供对于不同的方法f值没有什么范围.但如果操作规程一定,每次的f值是差不多的.当然也会有少量差异...
剑川县19341189447： 高效液相色谱法侧含量时对照图谱和样品图谱形状是不是一样啊 - ？
鲜秆杰宾： 中药成分很复杂,在色谱图上会体现出来很多峰,那么中药的对照品相对来说比较单一,在色谱图上表现出来的是一个峰,那么对照品色谱图与供试品色图肯定是不一样的.而单独对于被测成分而言,在供试品色谱图中与对照品色谱图峰保留时间相同的位置上应该有一个峰,这个峰就是要检测供试品中的主成分峰,这个主成分峰在峰形上应该与对照品主峰的峰形一致,如果供试品主成分的峰形相对对照品主峰的峰形变得很宽、或者前沿、或者拖尾,那说明供试品中还有其他杂质干扰主成分,未分离完全,还需要优化一下色谱条件.
剑川县19341189447： 高效液相色谱怎么分析分析色谱图和数据,计算含量,有色谱条件 - ？
鲜秆杰宾：[答案] 计算含量的方法很多: 面积归一化法,外标法,内标法 常用的: 面积归一化法那很简单,配制一个供试品,进样分析.一个色谱峰代表一个物质,最大的那个通常是你的主峰,其余的基本都是杂质. 杂质(%)=杂质的峰面积/主峰峰面积*100%(这个...
剑川县19341189447： 高效液相色谱法,进对照品之前,需要用0.45 μm针筒式过滤器过滤吗? - ？
鲜秆杰宾： 对照品溶液可不用经微孔滤膜过滤,因为对照品溶液都是用标准对照品经色谱纯溶剂或流动相稀释进行配制的.因此对照品溶液中没有不溶性的杂质,可省去过滤,直接进样.
剑川县19341189447： 请问用HPLC做药物含量测定时,是否一定要用药检所提供的标准品? - ？
鲜秆杰宾： 可以使用自己内部的工作对照品,前提是你的工作对照品需要进行结构鉴定(如果有外部买的标准品(reference substance),需要进行红外对比等)及检测(即标定),检测合格后可以作为工作对照品使用.标定工作对照品一般需要做全检,最终获得其含量,质量合格可作为内部使用的工作对照品(working standard)
剑川县19341189447： 高效液相色谱法测阿莫西林为什么对照品出现的峰多 - ？
鲜秆杰宾： 你的对照品是中检所的标准对照品吗?其实对照品杂质多是很常见的.首先你确定对照品的用途,对照品也有含量对照品、红外对照品等等.比如含量对照品,它就是保证这支对照品的含量,比如是98.5%,其他的杂质什么的人家不管的.再有就是你的实验方法的问题,比如溶液稳定性,如果你的对照品配制了很长时间,那么就有可能出现杂质.而且你的流动相里面可能有弱酸或者弱碱,那么阿莫西林的酸破坏,碱破坏情况怎么样,都有可能导致杂质变多的.
剑川县19341189447： 高效液相色谱法检测含量时峰面积一般是什么单位啊 ？
鲜秆杰宾： 峰面积是不需要单位的,在进行含量测定计算结果时,供试品的峰面积和对照品的峰面积分别作为分子和分母,有没有单位无关紧要,不影响含量测定结果的计算.
剑川县19341189447： 高效液相色谱法测定啊摸西林的含量中为什么称取样品量和对照品量要接近 - ？
鲜秆杰宾： 在方法确立时,每个方法都需要做方法学验证,在这个验证范围内,这个方法做出的结果才是有效的.就是说,如果你的样品浓度超出了这个测定范围,方法准确度和精密度就会发生变化,产生更大的误差.所以要按照方法要求的浓度进行测定,不然无法保证结果的准确. 举个例子,比如某物质在0.1mg/ml浓度下进样测得峰面积是1001,在1mg/ml浓度下进样可能就是10020,无形中就变化了0.1%的数值.而这也仅仅是从色谱角度考虑.如果从样品配制时的稀释样品的误差来讲,也是有很大的波动.这种波动叠加在一起会使你的结果变得非常不准确,得到的结果是没有意义的.
