DNA的琼脂糖凝胶电泳实验中可替代DNA的染料EB的电泳染料有哪些?优缺点各是什么?急!
1溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂,用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。
2溴化乙锭可以嵌入碱基分子中,导致错配。许多人认为溴化乙锭是强诱变剂,具有高致癌性。
溴化乙锭用标准302nm 紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号,可用Polaroid 底片或带CCD 成像头的凝胶成像处理系统拍摄。
溴化乙锭含有一个可以嵌入DNA堆积碱基之间的一个三环平面基团。它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性。在高离子强度的饱和溶液中,大约每2.5个碱基插入一个溴化乙锭分子。当染料分子插入后,其平面基团与螺旋的轴线垂直并通过范德华力与上下碱基相互作用。这个基团的固定位置及其与碱基的密切接近,导致与DNA结合的染料呈现荧光,其荧光产率比游离溶液中染料有所增加。DNA吸收254nm处的紫外辐射并传递给染料,而被结合的染料本身吸收302nm和366nm的光辐射。这两种情况下,被吸收的能量在可见光谱红橙区的590nm处重新发射出来。由于溴化乙锭-DNA复合物的荧光产率比没有结合DNA的染料高出20-30倍,所以当凝胶中含有游离的溴化乙锭(0.5ug/ml)时,可以检测到少至10ng的DNA条带。
聚丙烯酰胺凝胶电泳与琼脂糖凝胶电泳的区别为:支持介质不同、用途不同、优势不同。
一、支持介质不同
1、聚丙烯酰胺凝胶电泳:是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术
2、琼脂糖凝胶电泳:是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法
二、用途不同
1、聚丙烯酰胺凝胶电泳:用于分离蛋白质和寡核苷酸
2、琼脂糖凝胶电泳:用于分子量较大的样品,如大分子核酸、病毒等
三、优势不同
1、聚丙烯酰胺凝胶电泳:有较高的分辨率
2、琼脂糖凝胶电泳:它制备容易,分离范围广
参考资料来源:
百度百科——聚丙烯酰胺凝胶电泳
百度百科——琼脂糖凝胶电泳
这两个的优点都是低毒性,而且稳定性很高,但是sybr green 的灵敏度不如EB,且背景荧光很强,但普通的核酸检测都能做到; gelred 是目前市场上最好的核酸染料,号称无毒,而且耐热,无背景荧光,但是加入量多容易引起拖带,当然价格也挺贵的。
除此之外,国内有些不良商贩,拿AO(丫叮橙)做EB替代品,是剧毒致癌物质,且实验效果也不如EB。
琼脂糖凝胶电泳应用NA-Green的原理是_百度问一问
琼脂糖凝胶电泳应用NA-Green的原理是【提问】原理 琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。其分析原理与其他支持物电泳最主要区别是:它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。琼脂糖凝胶具有网络结构,物质分子通过时会受到阻力,大分子物质在涌动时受到的阻力大,因此在凝胶电泳中,带电颗粒...
琼脂糖凝胶的配制
(一)琼脂糖凝胶的制备 (1)称取琼脂糖1g,加入10倍电泳缓冲液10mL,再加入蒸馏水90mL,在电炉上加热溶解,配制成1%琼脂糖凝胶,稍凉后加入配好的EB溶液数滴。(2)将电泳模板两端密封,倒入琼脂糖凝胶溶液,插入梳子。(3)冷凝后将梳子拔出,电泳胶放入电泳槽中。(二)加样 取样品溶液20μl....
简述tbe在琼脂糖凝胶电泳中的作用
缓冲液在电泳过程中的一个作用是维持合适的pH。电泳时阳极与阴极都会发生电解反应,阳极发生的是氧化反应,阴极发生的是还原反应,长时间的电泳将使阳极变酸,阴极变碱。一个好的缓冲系统应有较强的缓冲能力,使溶液两极的pH保持基本不变。电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性,以利于DNA分...
琼脂糖凝胶电泳图中有拖尾可能是什么杂质
拖尾 应该是DNA降解严重,如果没降解,那么电泳出来的条带速率应该是一致的,所以是整齐的 而降解了以后,不同成分速率不同,也就造成了拖尾
怎么样在CA中筛选出包含一特定结构的新物质
转移产物在金属板上扩增,这个金属板含加有氨苄青霉素(100μg\/ml)、80μl X-gal(20mg\/ml)和4μl异丙基硫代-β-D一半乳糖苷(40mΜ)可以兰\/ 白扫描的 Luria-Bertani(LB)介质,用SpaO特殊引物的PCR筛选出真正的克隆,用琼脂糖凝胶电脉检查扩增片段。经PCR筛选的克隆片段在LB介质中于37℃扩增一整夜,并且在225...
DNA指纹图谱的产生的方法
(2)用 0.8%琼脂糖凝胶(内含 0.5μg\/ml EtBr)和 1 倍TAE 缓冲液进行电泳,电压为60V。(3)1 小时后,在紫外灯下检查酶切是否完全及各样品的DNA 浓度是否一致,以确保每个样品进行电泳时上样量一致。(4)如果发现某个样品酶切不完全,则另外加入5μl 左右的酶,在37℃条件下水浴保温6 小时。(5)已完全酶切...
电泳的影响因素
1.电泳介质的pH值溶液的pH值决定带电物质的解离程度,也决定物质所带净电荷的多少.对蛋白质,氨基酸等类似两性电解质,pH值离等电点越远,粒子所带电荷越多,泳动速度越快,反之越慢。因此,当分离某一种混合物时,应选择一种能扩大各种蛋白质所带电荷量差别的pH值,以利于各种蛋白质的有效分离....
简述tbe在琼脂糖凝胶电泳中的作用
电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性,以利于DNA分子的迁移,例如,一般电泳缓冲液中应含有0.01-0.04mol\/L的Na离子,Na离子的浓度太低时电泳速度变慢;太高时就会造成过大的电流使胶发热甚至熔化。电泳缓冲液还有一个组分是EDTA,加入浓度为1-2mmol\/L,目的是螯合Mg离子等,防止电泳时...
童视百赛:[答案] 目前为止,对身体低毒、稳定而灵敏度不输于EB的核酸染料只有sybr green ,和 gelred 这两个的优点都是低毒性,而且稳定性很高,但是sybr green 的灵敏度不如EB,且背景荧光很强,但普通的核酸检测都能做到; gelred 是目前...
凤凰县18484805618: DNA marker可否用蛋白marker替代?
童视百赛: 一般来说,不行 如果琼脂糖凝胶电泳,蛋白marker 完全不能替代DNA marker 如果是聚丙烯凝胶电泳,蛋白marker也应该完全不能替代DNA marker,因为DNA用的聚丙烯凝胶的浓度和蛋白用的浓度差别挺大的,且蛋白电泳时一般还是两层不同浓度的凝胶;而且电泳的缓冲液不同. 望采纳!
凤凰县18484805618: 在做凝胶电泳,什么可以替代溴化乙锭? - ?
童视百赛: Gold View或者Green View都可以替代溴化乙锭.实验室用了好长时间了,灵敏度会差一些,如果需要高分辨率的电泳还是推荐使用溴化乙锭,其他常规电泳替代品完全可以满足需要.
凤凰县18484805618: DNA的琼脂糖凝胶电泳的应用和发展举例.要详细一点的.谢谢了.很急啊! - ?
童视百赛: 应用: 1、DNA的制备. ⑴ 适合分离大片段DNA. 琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段,其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低,但它制备容易,分离范围广,尤其适于分离大片段DNA.普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb,利用脉冲...
凤凰县18484805618: 细胞凋亡的生化特征主要有哪些 - ?
童视百赛:[答案] 1.形态学变化 形态学观察细胞凋亡的变化是多阶段的,细胞凋亡往往涉及单个细胞,即便是一小部分细胞也是非同步发生... 该酶在核小体连接部位切断染色体DNA,这种降解表现在琼脂糖凝胶电泳中就呈现特异的梯状Ladder图谱,而坏死呈弥漫的...
凤凰县18484805618: DNA提取出来,不进行PCR,能直接跑电泳吗?如果可以,那用的琼脂糖凝胶是几乘的? - ?
童视百赛: 一般情况下不行,直接从样品中提取的DNA模板量都比较少,直接电泳的话容易出现假阴性的结果,如果你的实验还有其他的地方要用到DNA(比如核酸序列分析),直接从样本提取尤其比较珍贵的样本提取的DNA的量是满足不了你整个实验的要求的
凤凰县18484805618: 酯酶同工酶凝胶电泳试验中为什么要测定相对迁移率 - ?
童视百赛: 酯酶同工酶凝胶电泳试验中为什么要测定相对迁移率 凝胶电泳的实验原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳,普遍用于分离蛋白质及较小分子的核酸.琼脂糖凝胶孔径较大适用于分离同工酶及其亚型,大分子核酸等应用较广.琼脂糖和聚丙烯酰胺可以制成...
凤凰县18484805618: 除琼脂糖凝胶电泳还有什么方法提取dns - ?
童视百赛: 你说的是DNA提取吧?DNA提取主要是CTAB方法,其他的方法还有物理方式如玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法.化学方式如异硫氰酸胍法、碱裂解法.生物方式:酶法.根据核酸分离纯化方式的不同有;硅质材料、阴离子交换树脂等
凤凰县18484805618: 琼脂糖凝胶电泳中,判断DNA大小的是共价闭合还是开环DNA? - ?
童视百赛: 在琼脂糖凝胶电泳中,共价闭合的DNA(超螺旋结果)比开环DNA的泳动距离更长.因为,共价闭合DNA结构更紧凑收到的阻力更小,所以跑地更远
凤凰县18484805618: 1. 为什么琼脂糖凝胶电泳可以分离和鉴定核酸? - ?
童视百赛: 琼脂糖凝胶就像是一个网筛一样,里面有很多的孔,分子可以从孔中穿过去的.核酸分子有大有小,小的分子在凝胶中跑得比较快,大的分子就跑得比较慢,经过一段时间的电泳之后,凝胶上就会出现位置不一的条带.将条带与已知分子大小marker相比较,就可以知道核酸分子的大小了.