用hap纯化的引物可以进行实时定量pcr吗
实时定量的引物设计要求比较高，可以按普通引物设计的方法来做，但是设计时要注意扩增的片段不能太大，最好在250bp-100bp之间。同时要保证这对引物有绝对的特异性，因为要是产生非特异性扩增的话，就不能准确的计量模板量了，这样就失去了实时定量的意义了
一、方法不同
1、普通pcr引物设计：引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。
2、荧光定量pcr引物设计：通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，标记跟踪PCR产物进行实时监测反应，利用与之相适应的软件对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度
二、原理不同
1、普通pcr引物设计：为了找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板DNA序列。
2、荧光定量pcr引物设计：在PCR反应体系中加入荧光基团，通过荧光信号不断累积而实现实时监测PCR全程，然后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。在实时荧光定量PCR中，对全程PCR扩增过程进行实时检测，根据反应时间和荧光信号的变化可以绘制成一条曲线。
三、注意事项不同
1、普通pcr引物设计：引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。产物不能形成二级结构。引物长度在15~30碱基之间。
2、荧光定量pcr引物设计：实时荧光定量 PCR 仪应安放在湿度较低、灰尘较少、远离水池的平稳台面上，不能有强光直射，室内应通风良好，无腐蚀性气体
参考资料来源：百度百科-荧光定量PCR
参考资料来源：百度百科-PCR引物设计
我个人觉得，hap纯化的引物用来做rt-pcr一般来说问题不大。你看看溶解曲线，只要溶解曲线没问题，就没啥问题。
hap是什么意思
HAP是英文HIGE AFFINITY PURIFICATIION的缩写用HAP方法纯化的引物可用于绝大多数分子生物学实验，包括DNA测序基因合成PCR反应点突变分子杂交和基因芯片技术等其纯度对于一般的PCR实验而言更是绰绰有余从2000年起；HAP是一种新最新出的免流模式，通过服务器的转发而完成免流量上网，简单的来说就是通过三大营运...
用hap纯化的引物可以进行实时定量pcr吗
最好是用page纯化的。我个人觉得，hap纯化的引物用来做rt-pcr一般来说问题不大。你看看溶解曲线，只要溶解曲线没问题，就没啥问题。
什么是HAP?
羟基磷灰石（HAP）是脊椎动物骨骼和牙齿的主要组成，人的牙釉质中羟基磷灰石的含量约96Wt.%（92Vol.）。羟基磷灰石具有优良的生物相容性和生物活性，并可作为一种骨骼或牙齿的诱导因子，在口腔保健领域中对牙齿具有较好的再矿化、脱敏以及美白作用。实验证明HAP粒子与牙釉质生物相容性好，亲和性高，其矿化...
人工合成hap是啥
人工合成HAP，其成份、形态、结构与自然骨的矿物成份非常接近，这个HAP是答案--羟基磷灰石 功成HAP，其气、形、体裁与天气甚近之石骨，此HAP为羟基磷灰石行王氏：掌接网备常行理，为主：（）遂具析；触网作车作台不得重，回心不满1000kg，端不满300kg。<。）br >至今而止，构携之体高点上未得...
去哪购买比较好点的PGK启动子的载体?
pDB20(HAP5)质粒带LEU选择标记,该载体由ADH1启动子控制酵母HAP5基因的表达用作鉴定水稻类似HAP5 cDNA时的阳性对照。pYP2质粒由本实验室构建,它带有PGK启动子及色氨酸合成酶基因,PGK启动子后的BamHⅠ和KpnⅠ切点间插入用于表达的cDNA。1.3 PCR引物 酵母pPC86载体cDNA插入5'端Gal4激活功能域侧的引物为:GAL4(5'...
微生物基因建库怎么做
通过对文库的筛选或适用简并引物进行 PCR 反应,常常只能获得不完整的 cDNA 片段。为了得到 cDNA 全长,常常要重新筛选文库。重新筛选文库工作量大,RACE 虽然为此提供可方便,但应用该方法需重新提取 mRNA 和反转录。而用 PCR 法从 cDNA 文库中快速克隆基因的方法,只需提取 λ 噬菌体 DNA,按保守序列设计 PCR 引物...
基因文库构建的过程、原理及方法
通过对文库的筛选或适用简并引物进行 PCR 反应,常常只能获得不完整的 cDNA 片段。为了得到 cDNA 全长,常常要重新筛选文库。重新筛选文库工作量大,RACE 虽然为此提供可方便,但应用该方法需重新提取 mRNA 和反转录。而用 PCR 法从 cDNA 文库中快速克隆基因的方法,只需提取 λ 噬菌体 DNA,按保守序列设计 PCR 引物...
缑利氢溴： 最好是用page纯化的.我个人觉得,hap纯化的引物用来做rt-pcr一般来说问题不大.你看看溶解曲线,只要溶解曲线没问题,就没啥问题.
梅江区13384782807： 实时荧光定量PCR中两种引物的设计有什么要求 - ？
缑利氢溴： 参照以下real-time PCR引物设计原则:1.最好位于编码区5'端的300-400bp区域内,可以用DNAman,Alignment 软件看看结果.2. 产物不能形成二级结构(自由能小于58.61KJ/mol).3.引物长度一般在17-25碱基之间,上下游引物不能相差太...
梅江区13384782807： 什么是HAP?？
缑利氢溴： 1、什么是HAP? HAP是英文HIGE AFFINITY PURIFICATIION的缩写.HAP方法是生工自主开发的新型oligo DNA纯化方法.HAP方法和HAP纯化柱已取得国家专利(专利号:200310208040.X).用HAP纯化的引物纯度可达98%以上,完全可与...
梅江区13384782807： 如何稀释实时荧光定量PCR的引物? - ？
缑利氢溴： 1纳摩尔(nmol)=1000皮摩尔(pmol)9.96nmol/X=100pmol/ul 解出X=99.6ul答:加入100微升vddH20PS....一般我们买回引物,管它那么多,都加100微升水用着,没啥问题- -
梅江区13384782807： 如何选择引物纯化方式 - ？
缑利氢溴： 这个都差不多,如果是用于定量PCR的探针,建议使用PAGE纯化,或者HPLC纯化.如果是普通PCR的引物,差别不是很大
梅江区13384782807： 做实时定量PCR时,如果有引物二聚体,对实验结果有什么影响吗?在做实时定量PCR之前,做了一个普通的PCR,但是发现有引物二聚体,不知道这样的... - ？
缑利氢溴：[答案] 影响不大.探针法没影响,染料掺入法,现在的仪器都自动刷掉那些长度太小的扩增信号. 有人说可能对溶解曲线产生影响,不过我做染料掺入法做的少,没试过. 当然在设计引物时避免引物形成自身二聚体或互相二聚体是最好的,实在是形成了也没关...
梅江区13384782807： PCR仪的PCR仪的分类 - ？
缑利氢溴： 在普通PCR仪的基础上增加一个荧光信号采集系统和计算机分析处理系统,就成了荧光定量PCR仪.其PCR扩增原理和普通PCR仪扩增原理相同,只是PCR扩增时加入的引物是利用同位素、荧光素等进行标记,使用引物和荧光探针同时与模板...
梅江区13384782807： 实时荧光定量PCR的结果该怎样分析? - ？
缑利氢溴： 1、如果有标准曲线,按照标准曲线计算; 2、一般都是相对量,则用delta delta CT方法来计算; 3、引物或探针降解:可通过PAGE电泳检测其完整性; 4、模板量不足:对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起; 5、看CT值是分析...
梅江区13384782807： 为什么做pcr和测序用的引物不一样 - ？
缑利氢溴： pcr引物和测序引物是可以通用的,最多是纯化方式不一样,测序的要求高一些. 最重要的是,pcr扩增是从引物开始的,而测序一般要从引物下游几十个bp以后,信号才逐渐稳定,能够读出来.所以拿pcr引物去测序,那只能测出引物下游几十个bp以后的片段,这样你pcr的片段就会测不全.故而需要重新设计测序引物,一般要在所测片段的上游一些.
梅江区13384782807： 实时荧光定量PCR扩增效率低怎么办 - ？
缑利氢溴： 引物和探针设计不当 为了最高效地设计用于实时荧光定量PCR的引物和探针,我们强烈建议您使用引物设计软件.大多数引物设计程序均包含了可调节的参数以设计最佳的引物和探针.这些参数涉及了引物/探针的Tm值、互补性、二级结构以及...
