荧光定量引物纯化方式
qpcr原理及流程
它基于PCR技术的基本原理，利用特定的引物对模板DNA进行扩增，同时加入荧光染料或特异性探针，随着PCR循环的进行，模板DNA的复制量呈指数增长，荧光信号也随之增强。通过检测荧光信号的积累，实现对DNA起始拷贝量的定量分析。二、流程 1. DNA提取与纯化：从样本中提取目标基因的DNA，确保DNA的纯度和浓度适合...
纯化方式dsl和page的区别
根据纯化方式的不同， DNA 制品可分为三个级别： OPC 级、 PAGE 级、高纯度级。OPC 级制品 ： 进行 OPC 纯化，纯度大于 95% 。适用于 PCR 用引物、 DNA 测序用引物、各种探针等。此级别只接受 30mer 以下的制品。PAGE 级制品 ： 用 PAGE 胶纯化，纯度大于 95% 。适用于 PCR 用引物、 DNA...
引物是怎么合成的
合成仪的合成原理均相同，主要差别在于合成规模、耦合效率、循环时间及合成质量及纯度的高低。引物合成之后，还需通过氨水高温处理，将连接在CPG上的引物切割下来，通过C18脱盐\/OPC\/ PAGE\/HPLC等纯化方式对引物进行纯化，之后对成品引物进行定量、根据客户需求进行分装。
引物是怎么合成的
确保引物的纯度。质量控制则通过凝胶电泳、质谱分析等方法来验证引物的长度、序列和纯度，确保引物符合实验要求。总之，引物的合成是一个高度精确和自动化的过程，通过计算机设计、DNA合成仪的合成以及后续的纯化和质量控制，可以制备出高质量的引物，为分子生物学实验提供可靠的工具。
定量PCR Taqman探针设计与体系优化
通常采用用 对DNA模板进行稀释 的方法消除PCR抑制,但是某些情况下,由于模板量较少,稀释的办法并不适合,就需要对模板进行额外的纯化。 引物浓度太低会致使反应不完全,若引物浓度太高,则发生错配,并产生非特异性的扩增产物。 对于大多数PCR反应,0.5μmol\/L是适宜的引物浓度 ,若初次实验结果并不理想,可在 0.3～1.0...
检验科开展免疫荧光定量检测应收集哪些资料
定量检测包括总RNA提取和纯化、（可能还需要做mRNA提取和纯化）、RT、定量PCR 还需要反转录用的引物、定量PCR用的一对引物、荧光信号源（荧光染料或荧光标记的探针，看你用什么策略来做定量PCR）报价要看你需要服务商提供什么服务，如果你只提供实验材料，要求服务商做以上全部工作，只检测一个指标（一个...
用hap纯化的引物可以进行实时定量pcr吗
最好是用page纯化的。我个人觉得，hap纯化的引物用来做rt-pcr一般来说问题不大。你看看溶解曲线，只要溶解曲线没问题，就没啥问题。
荧光定量PCR检测需要多少费用啊
定量检测包括总RNA提取和纯化、（可能还需要做mRNA提取和纯化）、RT、定量PCR 还需要反转录用的引物、定量PCR用的一对引物、荧光信号源（荧光染料或荧光标记的探针，看你用什么策略来做定量PCR）报价要看你需要服务商提供什么服务，如果你只提供实验材料，要求服务商做以上全部工作，只检测一个指标（一个...
20世纪研究DNA结构有哪些小组?这些小组的特点及成败原因分析?
模板(靶基因)核酸 模板核酸的量与纯化程度,是PCR成败与否的关键环节之一,传统的DNA纯化方法通常采用SDS和蛋白酶K来消化处理标本。 SDS的主要功能是: 溶解细胞膜上的脂类与蛋白质,因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜,并解离细胞中的核蛋白,SDS 还能与蛋白质结合而沉淀;蛋白酶K能水解消化蛋白质,特别是与DNA结合的组蛋白,...
聚合酶链反应的反应体系
市购的游离核苷酸冻干粉,溶解后要用NaOH中和,再用紫外分光光度计定量。 典型PCR反应混合物中,所用酶浓度为2.5U\/μl,常用范围为1～4U\/100μl。由于DNA模板的不同和引物不同,以及其它条件的差异,多聚酶的用量亦有差异,酶量过多会导致非特异产物的增加。由于生产厂家所用兵配方、制造条件以及活性定义不同,不同...
广宁县复方回答： 1纳摩尔(nmol)=1000皮摩尔(pmol)9.96nmol/X=100pmol/ul 解出X=99.6ul答:加入100微升vddH20PS....一般我们买回引物,管它那么多,都加100微升水用着,没啥问题- -
淫咸19543414719问： 如何选择引物纯化方式 - ？
广宁县复方回答： 这个都差不多,如果是用于定量PCR的探针,建议使用PAGE纯化,或者HPLC纯化.如果是普通PCR的引物,差别不是很大
淫咸19543414719问： 引物纯化的方式有哪些? - ？
广宁县复方回答： 引物纯化的方式有多种,金开瑞生物提示你,常用的引物纯化方式有C18脱盐、RPC纯化、PAGE纯化、HPLC纯化,你们可以根据具体要求选择纯化的方式.
淫咸19543414719问： 我需要做荧光定量PCR - ？
广宁县复方回答： 做RT-PCR的PCR管,要求比普通PCR管更高:可靠的密封性效果,低蒸发,管盖易开合. 薄壁,良好的热传递效率. 管壁均匀光滑,传热精确,低吸附. 材质:医疗级PP原料生产, 热稳定好:加热到125度不变形. 无DNase.RNase.等透光性好,低背景荧光;加工均一,规格切合所用PCR的孔位. 我想到的就这么多,祝愉快!
淫咸19543414719问： 请问引物纯化方式有哪些,该如何进行选择? - ？
广宁县复方回答： OPC纯化: OPC纯化是根据DNA保护基(DMTr基)和Cartridge柱中树脂间的亲合力作用的原理进行纯化目的DNA片段.OPC法纯化的DNA纯度大于95%.适用于40mer以下引物的纯化.
淫咸19543414719问： 荧光定量的方法有哪些 - ？
广宁县复方回答： 可以做siRNA或者miRNA降低其蛋白表达量,观察表型;提高蛋白表达,观察表型;PT-PCR可用作研究其对预测下游目的基因的mRNA表达量的影响.荧光定量PCR对此意义不大,荧光定量用来检测蛋白定量还行.
淫咸19543414719问： 荧光绝对定量中标准品指的是什么,如何获取 - ？
广宁县复方回答： 荧光绝对定量中标准品:指用含有目的基因的质粒,知道质粒的分子量和浓度计算出拷贝数,然后倍比稀释就作为绝对定量的标准品. 获取:把目的基因p出来,然后接到质粒上,转染摇菌扩增,然后再抽质粒,酶切纯化.最后把纯化的目的...
淫咸19543414719问： 实时荧光定量PCR的结果该怎样分析? - ？
广宁县复方回答： 1、如果有标准曲线,按照标准曲线计算; 2、一般都是相对量,则用delta delta CT方法来计算; 3、引物或探针降解:可通过PAGE电泳检测其完整性; 4、模板量不足:对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起; 5、看CT值是分析...
淫咸19543414719问： 如何稀释实时荧光定量PCR的引物?我马上要做实时荧光定量PCR了,引物已经获得,引物管上面的标注是:OD=2,nmoles=9.96,现在我要把引物干粉溶解... - ？
广宁县复方回答：[答案] 1纳摩尔(nmol)=1000皮摩尔(pmol) 9.96nmol/X=100pmol/ul 解出X=99.6ul 答:加入100微升vddH20 PS.一般我们买回引物,管它那么多,都加100微升水用着,没啥问题- -
淫咸19543414719问： 做荧光定量时提取的RNA必须纯化吗?我用的是trizol法提的,请各位指点啊,谢谢？
广宁县复方回答： 你意思是做定量PCR吗?提RNA用trizol是可以的,只要提取步骤没问题,可以不需要RNA纯化.如果是要求更高的实验比如microarray,RNA-seq,那必须是纯度高的RNA
