在单克隆抗体中，为何需要多次检测细胞阳性，有何目的

在单克隆抗体中，为何需要多次检测细胞阳性，有何目的起何作用~

动物脾脏有上百万种不同的B淋巴细胞系，具有不同基因不同的B淋巴细胞合成不同的抗体。当机体受抗原刺激时，抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的B细胞。被激活的B细胞分裂增殖形成效应B细胞（浆细胞）和记忆B细胞，大量的浆细胞克隆合成和分泌大量的抗体分子分布到血液、体液中。如果能选出一个制造一种专一抗体的浆细胞进行培养，就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群，即单克隆。单克隆细胞将合成针对一种抗原决定簇的抗体，称为单克隆抗体。
检测细胞阳性是避免分离过程中分离不纯，参入了没有杂交的瘤细胞或者其他B细胞。可以去除阴性瘤细胞和B细胞。

第一次筛选：

（1）筛选对象：脾细胞、瘤细胞、脾-脾细胞、瘤-瘤细胞、脾-瘤细胞（即羊红细胞免疫过的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合后得到的细胞混合液）。另有少量多细胞聚体，因寿命短而迅速死亡，故无需特殊筛选。

（2）筛选方法：用HAT选择培养基筛选出正常生长的细胞。（注重：HAT培养基含有次黄嘌呤H、氨基喋呤A和胸腺嘧啶核苷T。其中氨基喋呤能阻断核酸合成的主通路，而次黄嘌呤在磷酸核糖转移酶HGPRT的催化下能合成RNA或胸腺嘧啶核苷在胸腺嘧啶核苷激酶TK的催化下合成DNA均属于核酸合成的旁通路。）

（3）筛选结果：脾-瘤细胞正常生长，其它细胞都会死亡。（析因：脾细胞和脾-脾细胞的核酸合成主通路被氨基喋呤阻断，虽有核酸合成的旁通路，但不能长期增殖；瘤细胞和瘤-瘤细胞缺乏核酸合成旁通路的酶，核酸合成主通路又被氨基喋呤阻断，因核酸合成障碍而死亡；脾-瘤细胞具有脾细胞的核酸合成旁通路酶，虽核酸合成主通路被氨基喋呤阻断，但可利用培养基中的次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷合成核酸而得以生存。）

第二次筛选：

（1）筛选对象：多克隆杂交瘤细胞群体。（即产生多种抗体的脾-瘤细胞混合群体。）

（2）筛选方法：抗体检测（ 如 免疫荧光技术、放射免疫技术等，实际上是利用稀释法，在聚乙烯微板孔内逐个杂交瘤细胞分开培养，然后检查每孔中产生特定抗体的能力）。

（3）筛选结果：产生专一性抗体的杂交瘤细胞。

在单克隆抗体中，为何需要多次检测细胞阳性，
检测阳性，就是能产生特定抗体的杂交瘤细胞。
杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快速、特异的免疫学方法，筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增。经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后，及时进行冻存。

动物脾脏有上百万种不同的B淋巴细胞系，具有不同基因不同的B淋巴细胞合成不同的抗体。当机体受抗原刺激时，抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的B细胞。被激活的B细胞分裂增殖形成效应B细胞（浆细胞）和记忆B细胞，大量的浆细胞克隆合成和分泌大量的抗体分子分布到血液、体液中。如果能选出一个制造一种专一抗体的浆细胞进行培养，就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群，即单克隆。单克隆细胞将合成针对一种抗原决定簇的抗体，称为单克隆抗体。
检测细胞阳性是避免分离过程中分离不纯，参入了没有杂交的瘤细胞或者其他B细胞。可以去除阴性瘤细胞和B细胞。

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轮台县17113307824： 在单克隆抗体中,为何需要多次检测细胞阳性,有何目的 - ？
靳垄德宝： 在单克隆抗体中,为何需要多次检测细胞阳性, 检测阳性,就是能产生特定抗体的杂交瘤细胞. 杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞,只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞,因此,必须进行筛选和克隆化.通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养.采用灵敏、快速、特异的免疫学方法,筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞,并进行克隆扩增.经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后,及时进行冻存.

轮台县17113307824： 细胞工程中,制备单克隆抗体时,需要经过三次筛选检测,这三次的目的是什么? - ？
靳垄德宝：[答案] 记得只经过两次筛选 第一次是筛选杂交瘤细胞 第二次是筛选能够产生单一抗体的杂交瘤细胞 当筛选完毕就可以进行体内或体外培养了

轮台县17113307824： 为什么植被单克隆抗体要经过两次筛选 - ？
靳垄德宝： 第一次是筛选出杂交瘤细胞;但这些杂交瘤细胞中有些是不能产生抗体的,还有些是不能产生我们需要的抗体的; 第二次就要筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞.

轮台县17113307824： 在制备单克隆抗体是为什么要进行两次筛选 - ？
靳垄德宝： 第一次筛选出杂交瘤细胞,第二次筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞

轮台县17113307824： 制备单克隆抗体过程,是需要两次筛选还是三次筛选?为什么? - ？
靳垄德宝： 两次. 第一次是筛选出杂交瘤细胞,第二次是筛选出能产生特异抗体的杂交瘤细胞.

轮台县17113307824： 单克隆抗体需哪2次筛选? - ？
靳垄德宝： 第一次筛选是在两细胞融合后 目的是选出符合要求的杂交瘤细胞 而第二次筛选则是在杂交瘤细胞培养后 此次筛选则是为了选出能产生符合要求的单一抗体的杂交瘤细胞 就是这样 这些内容在高三生物课本第七十二页有详细叙述

轮台县17113307824： 利用细胞………单克隆抗体时有两次筛选,第一次筛选的目的是?第二次筛选的目的? 过程中有两种酶是什么? - ？
靳垄德宝： 在进行单克隆抗体实验时,第一次筛选的目的是为了把与骨髓瘤细胞结合的效应B细胞与其他普通的细胞分离开来,用的是特定的选择培养基.而第二次筛选是为了把我们真正需要的杂合效应B细胞提取出来.在我的印象中好像没有用到什么酶,筛选用的都是选择培养基.

轮台县17113307824： 单克隆抗体中两次筛选分别是什么方法 - ？
靳垄德宝： 第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞,用连续注射抗原,下面具体介绍一下: 1、在实际免疫过程中,由于采用连续注射抗原的方法,且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞,因此,从小鼠脾脏中取出的效应B淋巴...

轮台县17113307824： 在免疫过程中为什么需要多次向健康人体注射特定抗原 - ？
靳垄德宝： 是这了让这人产生更多的抗体和记忆细胞.

轮台县17113307824： 为什么在制作单克隆抗体时,对已经选出的杂交瘤细胞还需要进一步的进行筛选啊??？
靳垄德宝： 以为用抗原刺激小鼠时在小鼠的脾脏中有多种效应B淋巴细胞,所以第一步筛选出来的杂交瘤细胞也就有多种,所以才要对进行第二次筛选,选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞