有谁知道细胞培养的详细步骤

有谁知道细胞培养的详细步骤啊~

这个问题问的太笼统，细胞培养是一门科学，不是单纯的几个步骤就可以解决问题的。你可以多收集点资料，慢慢积累。祝早日成功！

悬浮细胞可采用加入等量新鲜培养基后直接吹打分散进行传代，或用离心法后，加入新培养基后再吹打分散进行传代
贴壁细胞实验需准备超净台喷洒酒精，紫外照射30min。准备好培养瓶/皿，离心管，10%DMEM，0.25%胰酶，D-hanks液等，带上手套，口罩等，倒去旧培养基，用D-hanks液清洗一遍，去除沉积的死细胞等。
加入2ml 0.25％胰蛋白酶消化液，消化2～3min，倒置显微镜下观察，待细胞单层收缩突起出现空隙时，倒去酶液。加入1～2滴管含有血清的培养液，反复吹打细胞，使其成细胞悬液。
以1：2或1：3进行分装，补充新鲜培养基，并在培养瓶上做好标记，注明代号、日期，轻轻摇匀，37℃CO2培养箱培养。细胞培养24h后，即可观察培养液的颜色及细胞的生长情况。

扩展资料：
注意事项
1、传代培养时要注意无菌操作并防止细胞之间的交叉污染。所有操作要尽量靠近酒精灯火焰。每次最好只进行一种细胞的操作。每一种细胞使用一套器材。培养用液应严格分开。
2、每天观察细胞形态，掌握好细胞是否健康的标准：健康细胞的形态饱满，折光性好，生长致密时即可传代。
3、如发现细胞有污染迹象，应立即采取措施，一般应弃置污染的细胞，如果必须挽救，可加含有抗生素的BSS或培养基反复清洗，随后培养基中加入较大量的抗菌素，并经常更换培养基等。
参考资料：百度百科-传代培养

原代分离细胞培养是指从供体内取出组织后，经机械以及消化分离成单个细胞或单一型细胞群，使之在体外模拟人体生理环境，在无菌、适当温度和一定的营养条件下，生存、生长和繁殖。原代培养细胞常有不同的细胞成分，生长缓慢，但是更能代表所来源的组织细胞类型和表达组织的特异性特征。利用原代细胞培养做各种实验，如药物测试、细胞分化及病毒学方面的试验效果很好。其操作步骤如下。
1. 剪切组织　先将所取得的组织，用D-Hanks或Hanks液清洗，以去除表面血污，并用手术镊去除黏附的结缔组织等非培养所需组织。再次清洗后，用手术刀将组织切成若干小块，移入青霉素小瓶或小烧杯中，加入适量缓冲液，用弯头眼科剪，反复剪切组织，直到组织成糊状，约1mm3大小。静置片刻后，用吸管吸去上层液体，加入适当的缓冲液再清洗一次。
2. 消化分离　消化分离的目的是将细小的组织块消化分离成细胞团或分散的单个细胞，以利于进一步的培养，常用的消化酶有胰蛋白酶和胶原酶。
3. 培养　细胞悬液用计数板进行细胞计数。用培养液将细胞数调整为（2～5）×105 cells／ml，或实验所需密度，分装于培养瓶中，使细胞悬液的量以覆盖后略高于培养瓶底部为宜。置CO2培养箱内，5％CO2，37℃静置培养。一般3～5d，原代培养细胞可以黏附于瓶壁，并伸展开始生长，可补加原培养液量1／2的新培养液，继续培养2～3d后换液，一般7～14d可以长满瓶壁，进行传代。
4. 注意事项
（1）无菌操作：细菌或霉菌污染是培养失败的常见原因，必须加强各个环节的无菌操作观念，以预防为主，一旦污染，一般很难消除。
（2）培养液：所用的培养液必须满足细胞生存和生长的必要条件。由于细胞来源的动物种类、组织类型不同，对培养液的要求有一定的差异，必要时可用预实验的方法选择适当的培养液。
（3）小牛血清：小牛血清对于维持培养细胞的生存和促进细胞增殖起着关键性作用。可选择多种不同批号的小牛血清进行小样分析。一旦确定某一厂家的某一批号小牛血清后，就保持应用至实验完成。
（4）胶原酶溶液：必须新鲜配制，贮存时间过长(即使是-20℃低温保存)，也将影响消化效力，导致消化时间过长，细胞损伤增加。
（5）L-谷氨酰胺：几乎所有细胞对谷氨酰胺都有较高的要求，细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，在缺少谷氨酰胺时，细胞会因生长不良而死亡。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，加有谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱贮存两周以上时，就应重新加入原来量的谷氨酰胺。
（6）静置培养：原代细胞在消化分离后，置于CO2培养箱的头24～48h (必要时72h)内，应处于绝对静置状态，切忌不时地取出培养瓶观察生长状况，这将使原代分离细胞难以贴壁，更谈不上伸展和增殖，初学者尤应注意。不必担心培养液中的营养成分会消耗光，在细胞增殖之前对营养的要求并不大。原代培养初期仅加一薄层培养液的目的也在于有利于细胞贴壁伸展。
（7）消化时间：一般消化至肉眼尚可见微小组织颗粒即可，因为此时组织颗粒已经松散，略经吹打即成细胞团或单个细胞，过久的消化往往导致细胞损伤加重，细胞培养成活率降低。
（8）其他生长因子：经过以上处理，一般原代分离细胞培养均可以成功。对于少数特殊类型细胞也可以考虑加一些特殊的生长因子，如胰岛素能促使细胞摄取葡萄糖和氨基酸。另外，内毒素、EGF、FGF等均有促有丝分裂作用，但费用较高。

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蒸治好及：[答案] 细胞培养首先分为原代培养和传代培养. 原代培养需要从组织中消化、分离、纯化出单细胞,然后继续进行传代、冻存; 传代培养首先: 细胞复苏: 1.应遵守慢冻快融的原则.先将水温锅调至37-38度,取出冻存的细胞迅速放入后交细胞面浸至水面以...

陆丰市17291824688： 细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项 - ？
蒸治好及： 一、 复苏 1. 把冻存管从液氮中取出来,立即投入37℃水浴锅中,轻微摇动.液体都融化后(大概1-1.5分钟),拿出来喷点酒精放到超净工作台里. 2. 把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中(用培养基把冻存管洗一遍,把粘在壁...

陆丰市17291824688： 分子生物学中,体外细胞培养的具体操作过程和注意事项 - ？
蒸治好及：[答案] 那要看你做什么实验啊,要培养什么细胞啊? 你是要培养动物细胞吗? 动物细胞培养最关键就是一定不要染菌,要不细胞全死了,培养瓶灭菌,最好接种室也用紫外光杀菌,再接着,接种前,买来的细胞要复苏,培养液要配好,复苏之后就可以培...

陆丰市17291824688： 细胞培养流程及注意事项有哪些? ？
蒸治好及： 一般原代培养进入培养后有一段潜伏期(数小时到数十天不等),在潜伏期细胞一般不分裂,但可贴壁和游走

陆丰市17291824688： 植物细胞与组织培养的基本过程包括哪些步骤 - ？
蒸治好及： 植物组织培养包括2个过程,脱分化和再分化. 1.外植体(被培养的组织块--叶片碎片、茎尖、幼胚等或细胞--去壁的叶肉细胞)细胞恢复分裂,形成大量的细胞--愈伤.这个过程是脱分化.由于是已经成熟的细胞脱离了成熟细胞的状态,回到类似胚胎阶段的状态,故称脱分化. 2.愈伤组织的细胞经过诱导,分化形成根、茎、叶等器官甚至形成类似种子中的胚一样的结构--胚状体(体胚),这个过程就是再分化.

陆丰市17291824688： 肿瘤细胞培养方法哪位比较了解啊? ？
蒸治好及： 2、把消化液吸入离心管中,离心去上清,吸入另瓶中,加培养液置温箱中培养,向原瓶内也补加新的培养液继续培养.用此法处理后,成纤维细胞比肿瘤细胞易先脱落,经过几次反复处理,可能把成纤维细胞除净.

陆丰市17291824688： 细胞传代培养的步骤 - ？
蒸治好及： 拿到的细胞,如果是冻存的,首先要复苏,步骤是,取出立刻用37摄氏度水浴溶解,然后离心去冻存液,加入十倍体积的培养液,悬浮,离心去培养液,再加入培养液,转入培养瓶培养即可.关键是快速解冻.传代是细胞在培养瓶中长满后,去培养液,胰酶消化使细胞脱壁,转入离心管离心,去消化液,用培养液悬浮,取部分细胞悬液(按需要)接入新的培养瓶,加入足够的培养液培养即可.

陆丰市17291824688： 分子生物学体外细胞培养具体操作过程和注意事项 - ？
蒸治好及： 一、准备工作 准备工作对开展细胞培养异常重要,工作量也较大,应给予足够的重视,推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行.准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒,培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌,无菌室或超...

陆丰市17291824688： 细胞工程育种的过程是什么? - ？
蒸治好及： 植物细胞培养的基本过程主要包括的步骤:(1)从健康植株的特定部位或组织,如根、茎、叶、花、果实、花粉等,选择用于培养的起始材料,(2)用一定的化学药剂(最常用的有次氯酸钠、升汞和酒精等)对外植体表面消毒,建立无菌培养...

陆丰市17291824688： 作业:简述细胞原代培养的过程. - ？
蒸治好及： 这个具体得分抄什么组织(一个子一个字打出来的..累死我了)1、一般取出组织之后,先要对组织块进行修剪,去除有害物袭质.以鸡胚为例,取出鸡胚之后,去除头部和内脏,用BSS也进行清洗两次.2、将组织进行剪碎处理,加入一2113定量的胰酶5261进行消化,多放入37°二氧化碳培养箱中静止5分钟左右.3、轻轻的倒掉上清液,并加入一定量的DMEM溶液.4、用纱布进行4102过滤,滤除大的组织块,一般纱布至少六层以上.5、直接将过滤后1653的细胞液,进行率为的处理之后,然后直接分装到培养瓶中,放入培养瓶中进行培养即可.