流式细胞术检测细胞凋亡早期凋亡细胞极少，但坏死细胞很多，怎么解释
你是要问早期凋亡多，晚期少吗？
首先你要明白你的样本是怎么准备的？你说的这个所谓早晚期凋亡，我猜是用了Annexin V +PI 染色吧。这种方法最适用的是悬浮细胞，而贴壁细胞采用这个方法。在搜集样本的时候，会导致大量的人为细胞膜损伤。结果就是Annexin V 的阳性率增高，看起来就是早期比例增高了。我见过最极端的例子就是有人的健康对照组，结果是100%阳性的。
建议你采用其他的方法测贴壁细胞的凋亡，就算是用流式，也可以用其他的方法。比如测caspase底物降解活性等等。
一、原理
在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V进行荧光素（EGFP、FITC）标记，以标记了的Annexin V作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。
碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。
二、注意事项
1、必须活细胞检测，不能用能破坏细胞膜完整性的固定剂和穿透剂固定或穿膜。
2、特殊细胞的染色方法：在消化或吹打时，有些细胞（如神经元细胞）很容易受到损伤，导致晚期凋亡或坏死比例非常高，不能反映真实结果。实验的解决方法：先低速离心，吸取细胞培养板中的液体，留少许液体，加入适量PI和Annexin-V染色10min后，将漂浮细胞吸至离心管中，离心洗涤两次，用PBS漂洗贴壁细胞两次，加胰酶消化后将细胞悬液移至另一离心管中，离心洗涤，再与漂浮细胞合并后上流式细胞仪检测。应用该法可降低晚期凋亡和坏死比例，增加早期凋亡细胞比例。
3、由于Annexin-V为钙离子依赖的磷脂结合蛋白，只有在钙离子存在的情况下与PS的亲和力才大，因而在消化细胞时，建议一般不采用含EDTA的消化液。
4、必须设置阴性对照和补偿对照（分别单染）。
有几个可能性：
染色特异性差，这个最常见于PI+anexin V 双染的情况。其实没有方法可以特异性的染坏死细胞，就认为PI阳性的是，其实只要细胞膜通透性增高，就会PI阳性，没有特异性。另外anexin V阳性也不一定就是凋亡早期，任何干扰膜稳定性的操作，比如培养皿的刮取细胞，就可导致假阳性。所以，不管你用这个方法得到什么结论，都要用其他方法来证实。这个方法只是一个初步的筛选实验而已。
假如你的结果是真的，那说明你收集细胞太晚了，细胞基本都死光了。
细胞的死亡和凋亡无关。
细胞凋亡检测方法汇总
操作步骤简单，首先将细胞收集并预处理，之后使用特定染色试剂进行细胞标记。之后，通过流式细胞仪分析细胞标记情况。实验中需设置对照组，包括空白对照、单染对照、阳性对照和阴性对照，以确保实验结果的准确性。在结果分析中，横坐标表示Annexin V强度，纵坐标表示PI强度。依据对照比较结果，可准确判断细胞的...
流式细胞术检测细胞周期和凋亡
最后，将细胞上流式细胞仪检测。细胞凋亡检测：细胞凋亡的早期就有细胞膜表面破损发生，破损时凋亡细胞表面的磷脂腺丝氨酸(PS)可以从细胞内膜翻转至细胞的外膜。该过程发生在DNA片段化之前，检测PS的表达，能反映早期凋亡。AnnexinV是Ca2+依赖的磷脂结合蛋白，对PS有很高的亲和性，并且可以与暴露于细胞外...
流式细胞术检测细胞凋亡早期凋亡细胞极少,但坏死细胞很多,怎么解释_百度...
染色特异性差，这个最常见于PI+anexin V 双染的情况。其实没有方法可以特异性的染坏死细胞，就认为PI阳性的是，其实只要细胞膜通透性增高，就会PI阳性，没有特异性。另外anexin V阳性也不一定就是凋亡早期，任何干扰膜稳定性的操作，比如培养皿的刮取细胞，就可导致假阳性。所以，不管你用这个方法得到什...
怎样鉴定细胞凋亡
1 悬浮细胞的染色:将正常培养和诱导凋亡的悬浮细胞(0.5~1×106)用PBS洗2次,加入100ul Binding Buffer和FITC标记的Annexin-V(20ug\/ml)10ul,室温避光30min,再加入PI(50ug\/ml)5ul,避光反应5min后,加入400ul Binding Buffer,立即用FACScan进行流式细胞术定量检测(一般不超过1h), 同时以不加AnnexinV-FITC及PI的...
最常用的细胞凋亡检测方法是什么?
检测细胞凋亡的方法很多，如电子显微镜或者光学显微镜下的形态学观察、细胞DNA提取物的DNA梯状带电泳实验等。而流式细胞术是非常重要的检测细胞凋亡的方法，不仅可以定性，也可以定量。流式细胞术检测细胞凋亡的方法也有很多，其中最重要是annexinV\/PI双染色法。其他的还有SYTO\/PI双染色法、细胞DNA含量分析...
细胞功能实验有哪些
细胞功能实验有：1. 细胞增殖与凋亡实验 细胞增殖和凋亡是细胞生命活动中的基本过程。相关实验通过观察细胞的生长曲线、细胞周期变化以及凋亡细胞的百分比，来研究细胞的增殖和凋亡机制。常见的实验方法有细胞计数、细胞周期测定、流式细胞术分析凋亡细胞等。这些实验对于了解细胞生长、发育和疾病发生发展机制具有...
流式细胞术检测贴壁细胞凋亡,是否需收集上清中漂浮的细胞?
要，里面有不少凋亡细胞，将上清吸在离心管理，贴壁的细胞胰酶消化后混一起离心就可以了
流式细胞测凋亡率.数据中哪个代表凋亡率
FITC代表的是annexin V 染色, 代表早期凋亡,PI 单染,代表死亡的细胞,双染阳性的是正在凋亡的细胞.所以,Q2+ Q4就是所有凋亡的细胞
做流式细胞,检测凋亡,必须要固定么
用流式检测细胞凋亡的方法很多种，有些需要固定，有些不能固定的。根据方法而定，不能一概而言。如果是测细胞内抗原的，比如抗体识别活化caspase-3, 那就要固定。其他检测功能的，比如caspas3-3活性的，就要活细胞来测试。
怎样利用PI单染色法进行流式细胞仪检测细胞凋亡?
这个方法看凋亡，主要是看sub-G1期的细胞数量。原理就是凋亡的细胞，由于DNA正在降解，所以含量比正常细胞要少。在以PI荧光强度（代表DNA量）为横坐标的柱状图上，一般会有2个峰，G1和G2，G1就是正常细胞，G2是正在分裂的2倍体。2者间是S期细胞。如果有凋亡的细胞，在G1前会有细胞出现，就是...
浑蒲喉疾： 一、原理 在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧.Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高...
琼海市13721631267： 细胞凋亡的早期检测方法有哪些 - ？
浑蒲喉疾： 1、PS(磷脂酰丝氨酸)在胞外膜分布的检测 PS从胞膜内侧转移到外侧现象是在细胞凋亡的早期即可发生标志.AnnexinV是一种钙依赖性的磷脂结合蛋白,能专一性的结合暴露在胞膜外侧的PS,使用荧光素标记的AnnexinV 蛋白(如Annexin ...
琼海市13721631267： 做流式细胞凋亡实验总是抓不住早期凋亡怎么办 - ？
浑蒲喉疾： 你需要做两件事,一是时间曲线,而是剂量曲线.时间曲线就是从同时处理一批细胞样本,每个时间点取一个样本来分析,看何时开始出现.一般的诱导,几小时就可以出现了.所以不能等时间很长,可以每隔一,两小时取一次样,六小时候可以延长取样间隔.找到最佳时间点后,同时用不同剂量处理细胞,然后在同一个时间点测量.看剂量的影响
琼海市13721631267： 流式细胞测凋亡率.数据中哪个代表凋亡率?？
浑蒲喉疾： 你做的是annexin V 和PI双染吧. FITC代表的是annexin V 染色, 代表早期凋亡,PI 单染,代表死亡的细胞,双染阳性的是正在凋亡的细胞. 所以,Q2+ Q4就是所有凋亡的细胞
琼海市13721631267： 如何看待流式细胞术检测结果:早期凋亡较多,晚 - ？
浑蒲喉疾： 你是要问早期凋亡多,晚期少吗? 首先你要明白你的样本是怎么准备的?你说的这个所谓早晚期凋亡,我猜是用了Annexin V +PI 染色吧.这种方法最适用的是悬浮细胞,而贴壁细胞采用这个方法.在搜集样本的时候,会导致大量的人为细胞膜损伤.结果就是Annexin V 的阳性率增高,看起来就是早期比例增高了.我见过最极端的例子就是有人的健康对照组,结果是100%阳性的. 建议你采用其他的方法测贴壁细胞的凋亡,就算是用流式,也可以用其他的方法.比如测caspase底物降解活性等等.
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浑蒲喉疾： 流式细胞术分析 方法:收获细胞正常或凋亡细胞?PBS洗涤?加Ac-DEVD-AMC?373:临床病理切片的染色、检测. 4:原代细胞的培养、检测. 5:分析TFAR19
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浑蒲喉疾： 博凌科为解答:仅供参考一下:流式样品的准备:DNA含量的测定:用本法可以测定细胞周期、细胞倍体和凋亡,在样品的制备中存在的问题主要是细胞的聚集和碎片,建议在固定细胞...
琼海市13721631267： 流式细胞仪能不能测胚胎细胞凋亡率?最少需要多少个小鼠发育到囊胚阶段的细胞? - ？
浑蒲喉疾：[答案] 用流式测细胞凋亡最少需要准备500000 细胞,实测100000个细胞,中间处理过程会有损失.建议你用hochest染色法在荧光显微镜下观察凋亡情况.
