单克隆抗体制备过程中的专一抗体检测阳性的检测原理是什么

单克隆抗体制备的基本原理与过程？有什么意义~

单克隆抗体制备的原理：
B淋巴细胞在抗原的刺激下,能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力、B细胞的这种能力和量是有限的,不可能持续分化增殖下去，因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的、将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，再进一步克隆化，这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力，又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力，将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的高效价、单一的特异性抗体.这种技术即称为单克隆抗体技术。
单克隆抗体制备的过程：
免疫动物
免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。
细胞融合
采用二氧化碳气体处死小鼠，无菌操作取出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。
选择性培养
选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，一般采用HAT选择性培养基。在HAT培养基中，未融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，不能利用补救途径合成DNA而死亡。 未融合的淋巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。 只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性，因此能在HAT培养基中存活和增殖。
杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化
在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快速、特异的免疫学方法，筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增。经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后，及时进行冻存。
单克隆抗体的大量制备
单克隆抗体的大量制备主要采用动物体内诱生法和体外培养法。
(1)体内诱生法 取BALB/c小鼠，首先腹腔注射0.5ml液体石蜡或降植烷进行预处理。1-2周后，腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖，并产生和分泌单克隆抗体。约1-2周，可见小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可获得大量单克隆抗体。
(2)体外培养法 将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。在培养过程中，杂交瘤细胞产生并分泌单克隆抗体，收集培养上清液，离心去除细胞及其碎片，即可获得所需要的单克隆抗体。但这种方法产生的抗体量有限。各种新型培养技术和装置不断出现，大大提高了抗体的生产量。
单克隆抗体制备的意义：
用于以下各种生命科学实验并具有医用价值
（1）沉淀反应：Precipitation reaction
（2）凝集实验：haemaglutination
（3）放射免疫学方法检测免疫复合物
（4） 流式细胞仪：用于细胞的分型和细胞分离.
（5）ELISA 等免疫学检测
（6）BIAcore biosensor:检测Ab-Ag或与蛋白的亲和力 .
（7）免疫印记（western blotting)
（8） 免疫沉淀：
（9） 亲和层析：分离蛋白质
（10） 磁珠分离细胞
（11）临床疾病的诊断和治疗；

第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，用连续注射抗原，下面具体介绍一下：
1、在实际免疫过程中，由于采用连续注射抗原的方法，且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞，因此，从小鼠脾脏中取出的效应B淋巴细胞的特异性是不同的，经HAT培养液筛选的杂交瘤细胞特异性也存在差异，所以必须从杂交瘤细胞群中筛选出能产生针对某一预定抗原快定簇的特异性杂交瘤细胞；
2、通常采用有限稀释克隆细胞的方法，将杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔的细胞培养板上，使每一孔含一个或几个杂交瘤细胞（理论上30%的孔中细胞数为0时，才能保证有些孔中是单个细胞），再由这些单细胞克隆生长，最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩大培养。

拓展资料：
单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体，称为单克隆抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤（hybridoma）抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。
参考资料：单克隆抗体百度百科：网页链接

2.杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快速、特异的免疫学方法，筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增。经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后，及时进行冻存。抗原-抗体杂交原理

专一性抗体是只针对一种抗原的抗体。
阴性指检测没有反应，阳性指检测有反应。如果单一抗体阳性就是有反应的，指示你疑似患该病了。。。

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邢台市13035938730： 单克隆抗体制备过程中的专一抗体检测阳性的检测原理是什么 - ？
敖温康萨： 2.杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞,只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞,因此,必须进行筛选和克隆化.通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养.采用灵敏、快速、特异的免疫学方法,筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞,并进行克隆扩增.经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后,及时进行冻存.抗原-抗体杂交原理

邢台市13035938730： 生产单克隆抗体通常涉及三个筛选过程: ①选出杂交瘤细胞 ②选出能产生特定抗体的B淋巴细胞 ③选出能产生特定抗体并能大量增殖的细胞群 这三个过程的... - ？
敖温康萨：[选项] A. ②③① B. ③①② C. ②①③ D. ①③②

邢台市13035938730： 单克隆抗体技术中,最后＂克隆专一抗体,检验阳性细胞＂是什么意思,具体怎么操作? - ？
敖温康萨： http://wenku.baidu.com/view/33a781272af90242a895e5b1.html 望采纳应该是特异性抗体吧.单克隆抗体,是在体外培养B细胞,用抗原刺激后,B细胞分化,形成抗原产生不同抗体的浆细胞,选择特异性抗原位点结合力强的浆细胞和骨髓瘤细胞融合,形成可以无限分化,可以持续不断的分泌特异性抗体的细胞,把单个融合好的细胞注入小鼠体内,就可以产生高浓度的抗体单一种类的抗体.这种抗体就是单克隆抗体

邢台市13035938730： 如图是单克隆抗体制备流程阶段示意图.请根据示意图回答下列问题.(1)单克隆抗体技术是___技术中最重要的用途.将特定的抗原注入小鼠体内,其目的是使... - ？
敖温康萨：[答案] (1)单克隆抗体技术是动物细胞融合技术中最重要的用途.将特定的抗原注入小鼠体内,使小鼠产生浆细胞.(2)单克隆抗体的化学本质是球蛋白;涉及到的细胞器是核糖体、内质网、高尔基体、线粒体.(3)骨髓瘤细胞与...

邢台市13035938730： 单克隆抗体的制备:专一性抗体检测在克隆化培养之前还是之后 - ？
敖温康萨： 是之前,有任务,望采纳.

邢台市13035938730： 图为利用生物技术生产单克隆抗体过程,请回答下列问题:(1)单克隆抗体制备是在___技术基础上发展.(2)从小鼠脾脏获取A细胞前需对小鼠进行___处... - ？
敖温康萨：[答案] (1)动物细胞融合技术是动物细胞工程的基础,单克隆抗体制备是在动物细胞融合技术基础上发展起来的. (2)从小鼠脾脏获取A细胞前需对小鼠进行注射特定抗原蛋白处理.经过特定培养基筛选出来的许多细胞B是不同种杂交瘤细胞,因此需要对细胞...

邢台市13035938730： 下列关于单克隆抗体制备过程的叙述,正确的是()A.单克隆抗体最广泛的用途是用作体外诊断试剂B.杂 - ？
敖温康萨： A、单克隆抗体特异性强,灵敏度高,可大量制备,最广泛的用途是用作体外诊断试剂,故A正确; B、杂交瘤细胞具有浆细胞产生专一抗体和癌细胞无限增殖的特点,但不一定具有它们所有特点,故B错误; C、制备单克隆抗体中需要对对小动物注射特定抗原以获取所需的B淋巴细胞,故C错误; D、单克隆抗体的制备是将骨髓瘤细胞与浆细胞结合,经过选择培养基的筛选得到杂交瘤细胞并经专一抗体检测后,培养能产生特定抗体的杂交瘤细胞即可得单克隆抗体,在筛选和培养生产过程中都利用了动物细胞培养技术,故D错误. 故选:A.

邢台市13035938730： 图是单克隆抗体制备流程阶段示意图.(1)___技术和___技术是获得单克隆抗体的基础.(2)图中A过程是从小鼠的脾脏中取得___细胞,该细胞能够产生___... - ？
敖温康萨：[答案] (1)动物细胞培养技术和动物细胞融合技术是获得单克隆抗体的基础.(2)图中A过程是从小鼠的脾脏中取得免疫过的B淋巴细胞,该细胞能够产生特异性抗体.从小鼠体内提取分离该细胞之前,应给小鼠注射抗原类物质.(3...

邢台市13035938730： 请回答有关单克隆抗体制备过程的问题:(1)生产单克隆抗体应用到了___、___等生物技术.(2)选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的___特点,又具备... - ？
敖温康萨：[答案] (1)生产单克隆抗体应用到了细胞融合技术(将浆细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞)和细胞培养技术(体内培养和体外培养). (2)选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的迅速大量繁殖的特点,又具备淋巴细胞的分泌专一抗体的特点,经过选择...

邢台市13035938730： 为什么制备单克隆抗体时要用已免疫的B淋巴细胞 为什么用选择培养基选出杂交瘤细胞后还要进行抗体阳性检测 - ？
敖温康萨： 书上说的B淋巴细胞是指效应B细胞(浆细胞),只有已免疫的B淋巴细胞(即效应B细胞)才能分泌抗体.浆细胞有专一性,还要进行抗体阳性检测是因为:第一次用选择培养基筛选出的杂交瘤细胞有多种,因为当初取自小鼠脾脏的效应B细胞有多种,总共能分泌多种不同抗体,这次筛选只是去处未融合细胞和同种融合细胞,所以最后体内体外培养前还有一步分离各种杂交瘤细胞,专一抗体阳性检测是为了保证我们现在所需要制备的这种单克隆抗体一直存在,避免实验操作失误导致产生的这种单克隆抗体的杂交瘤细胞死亡.