大分子量蛋白 电泳时间

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大分子量蛋白，电泳时间：

SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳根据分子量大小分离蛋白质，分子量小的快，琼脂糖凝胶电泳根据硫酸根与某些蛋白质作用分离蛋白，有可能分子量大的快。

降低蛋白电泳中丙烯酰胺的浓度，低浓度的蛋白电泳胶更有利于大分子量蛋白的分离，延长电泳的时间，即使溴酚蓝指示线已经到底也可以继续电泳一段时间，这样大分子量的蛋白会分得更开。

电泳现象

在确定的条件下，带电粒子在单位电场强度作用下，单位时间内移动的距离（即迁移率）为常数，是该带电粒子的物化特征性常数。不同带电粒子因所带电荷不同，或虽所带电荷相同但荷质比不同，在同一电场中电泳，经一定时间后，由于移动距离不同而相互分离。分开的距离与外加电场的电压与电泳时间成正比。

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库尔勒市17190899807： western blot中目的蛋白分子量<=30KDa(30KDa,24KDa,14KDa)时,电泳和转膜(湿转)各需要多长时间较好? - ？
祢义世可： 电泳一般电泳就行. 浓缩胶 80v ,蛋白跑出后,电压增大为110v 跑结束即可. 湿转条件为100mv 时间为50-80分钟都行... 关键是采用的配胶浓度10%以上,12% 15%.

库尔勒市17190899807： 对于大分子的蛋白做western blot 有哪些需要注意的 - ？
祢义世可：[答案] 大分子蛋白和小分子蛋白做western blot其实要求是一样的,区别就在于大分子蛋白跑得慢,所以电泳和转膜需要的电压或电流更大,时间更长,当然,一般大分子蛋白需要用低浓度胶,而小分子蛋白则选择高浓度胶.

库尔勒市17190899807： 在做蛋白印迹实验时,目标蛋白分子量是180,请问电泳时电压用250V,会不会把目标蛋白震碎?如果不会震碎,跑胶多长时间比较合适? - ？
祢义世可：[答案] 这么大.跑1.5-2小时吧 其实跑到1小时以后电流就很小了 跑起来就很慢了.所以时间长点没关系

库尔勒市17190899807： 怎样计算电泳中蛋白分子量 - ？
祢义世可： 1.首先要选择一款未经过染色的蛋白Marker,和你所要确定分子量大小的蛋白一起电泳. 2.在电泳过程中尽量选择靠中间的泳道,避免边缘效应引起条带歪斜,没有样的孔用loading填满. 3.电泳结束后,考马斯亮蓝染色. 4.如果有凝胶成像系统,可以直接先拍照,然后用系统带的软件,根据Marker每一个条带的位置,分析目标蛋白分子量. 5.如果没有这种系统,就只能用土一点的办法,量每一个Marker条带相对于加样孔的迁移量,对应每个条带的分子量做标准曲线(excel可以),通过标准曲线得到的方程和目标蛋白的迁移率计算目标蛋白的分子量大小就可以了.

库尔勒市17190899807： 电泳时间可以适当延长的原因是什么? ？
祢义世可： 3. 蛋白质的分子量较大,则电泳时间可以适当延长,以使目的蛋白质有足够的迁移率和其它的蛋白质分开,反之亦然;

库尔勒市17190899807： 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native - PAGE)应该注意哪些问题 - ？
祢义世可： 1. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的过程中,蛋白质的迁移率不仅和蛋白质的等电点有关,还和蛋白质的分子量以及分子形状有关,其中蛋白质的等电点是最重要 的影响因子,要根据蛋白质的等电点来选择对应的电泳缓冲系统;2. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的过程中,要注意电压过高引起发热而导致蛋白质变性,所以最好在电泳槽外面放置冰块以降低温度;3. 蛋白质的分子量较大,则电泳时间可以适当延长,以使目的蛋白质有足够的迁移率和其它的蛋白质分开,反之亦然;4. 变性样品的离子强度不能太高(I

库尔勒市17190899807： western blot中目的蛋白分子量扫码下载搜索答疑一搜即得 - ？
祢义世可：[答案] 电泳一般电泳就行. 浓缩胶 80v ,蛋白跑出后,电压增大为110v 跑结束即可. 湿转条件为100mv 时间为50-80分钟都行. 关键是采用的配胶浓度10%以上,12% 15%.

库尔勒市17190899807： 蛋白质分离鉴定电泳时哪些时候分子量小快哪些分子量大的快? - ？
祢义世可：[答案] SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳根据分子量大小分离蛋白质,分子量小的快 琼脂糖凝胶电泳根据硫酸根与某些蛋白质作用分离蛋白,有可能分子量大的快

库尔勒市17190899807： 影响蛋白质电泳速度的因素是什么 - ？
祢义世可： 主要是蛋白质的分子量大小,电荷性质,电泳电压和凝胶的浓度.分子量越大电泳越慢,凝胶浓度越大电泳越慢,电压越高速度越快

库尔勒市17190899807： 你怎么知道上样孔附进的电泳条带是蛋白污染或盐离子浓度过高造成的?有文献依据没?也可能是电泳时间短,可 - ？
祢义世可： 电泳时间长短你可以和marker对比啊,如果marker迁移率过低确实可能是电泳时间短.此外,loading buffer中的溴酚蓝和二甲苯青等指示剂也能反映出电泳时间是否恰当.所以,对于一般熟手来说不存在电泳时间过短DNA未迁移的问题.在琼脂...