大分子量蛋白wb技巧
WB蛋白电泳实验步骤,液体的配置及相关问题解答
深入探讨WB蛋白电泳实验：步骤详解与常见问题解答 Western Blot，简称WB蛋白印迹法，是科研领域中不可或缺的实验手段。以下是一份详细的电泳液配置和实验步骤，以及常见问题的解答，希望对您的实验工作提供有力支持。1. 试剂配置与选择电泳液: 以100ml为基准，准备Tris 3.03g, 甘氨酸 18.8g, SDS 1g。
70多和200多的分子量能在一块胶上跑wb吗
70多和200多的分子量能在一块胶上跑wb。根据查询相关公开信息显示：70多和200多的分子量的蛋白质可以同时在同一块胶上进行西方印迹（Westernblot）分析。这是因为，蛋白质在电泳过程中会受到电场力的作用，根据它们的分子大小和电荷大小而在凝胶中移动的速度不同，从而形成不同的带。一般来说，较小...
【Western-blotting】WB实验看过来!纯干货,不忽悠!
对于初次尝试WB实验的人来说，这个1979年诞生的技术虽然复杂但已成熟，关键在于理解和实践。以下是WB实验的基本流程和细节介绍：WB实验基于抗体与抗原结合原理，用于研究蛋白表达和定量。首先，样本制备至关重要，需注意原始样本的保存和蛋白提取的保存条件。强RIPA裂解液是首选，但要根据蛋白特性选择适合的...
WB实验干货|实验介绍、蛋白提取、蛋白定量
深入解析WB实验：蛋白识别的精密工具一、蛋白世界中的精密导航：Western Blot实验详解<\/ Western Blot，简称WB，是一种不可或缺的蛋白分析技术，通过抗原抗体间的特异性结合，揭示细胞内的蛋白动态。其流程犹如一场精密的接力赛：首先，从组织或细胞中提取出关键的蛋白成分（根据样本大小选择相应的裂解液）...
Western Blot(WB)-小实验中蕴含大文章
做好Western Blot实验，了解掌握原理是关键。接下来，让我们了解一下WB检测的原理、流程和应用。Western Blot原理：抗原与抗体反应。该方法利用SDS-PAGE技术将生物样品中的蛋白质分子按分子量大小在凝胶上分离，然后用电转移的方法将蛋白转移到固相膜上，以固相膜上的蛋白质作为抗原，与对应的抗体起免疫反应...
实验技术|蛋白免疫印迹WB(上)
对于科研人员来说，Western Blot（蛋白免疫印迹）是一项不可或缺的技术。别人实验效率高的秘诀，除了精细操作，关键在于选择优质试剂和优化实验步骤。在竞技科研的跑道上，领先一步就可能多发表几篇SCI论文。阳春三月，我们从WB技术的基础讲起。WB是通过抗原抗体特异性结合，用来定量分析复杂样品中的特定蛋白...
western blot 试验中蛋白转膜总是颜色很浅... 分子量是27KD,电流和电压...
注：本资源来源于网络。(1)通常如果使用Bio-Rad的标准湿式转膜装置，可以设定转膜电流为300-400mA，转膜时间为30-60)分钟。也可以在15-20mA转膜过夜。转膜时也可以使用碧云天的多功能电泳仪(带定时)。具体的转膜时间要根据目的蛋白的大小而定，目的蛋白的分子量越大，需要的转膜时间越长，目的蛋白的分子...
wb胶的浓度
有的时候蛋白跑不出来，其实未必是分离胶浓度选的不好，也有可能是marker的问题。marker起到的是蛋白分子量指示剂作用，但是要根据蛋白分子量选择合适的marker。一般的marker分子量范围在10-130kDa之间，都可以满足正常蛋白的需要。但有些分子量范围较广的marker，比如说6-250kDa，虽然说它范围很广，可...
wb跑胶时是小分子量蛋白先跑出吗
是的。wb跑胶时是小分子量蛋白先跑出去，其他分子紧跟其后。蛋白质（protein）是组成人体一切细胞、组织的重要成分。机体所有重要的组成部分都需要有蛋白质的参与。一般说，蛋白质约占人体全部质量的18%，最重要的还是其与生命现象有关。
western blot胶浓度的选择
western blot中分离胶浓度的选择取决于目的蛋白分子量 不同的分离胶浓度对不同的目的蛋白分子量的分辨率不一样，比如15%的分离胶更适合45kDa的分目的蛋白，而10%的分离胶更适合70kDa的目的蛋白而因为western blot的膜应该是完全覆盖SDS PAGE的凝胶，所以不用太担心条带在凝胶上位置偏上活偏下 所以...
阜南县显尔回答：[答案] 建议用tris-acetate gel+tris-tricine running buffer,这个系统很适合做大分子蛋白的western blot.电泳时间要很长,2个小时?转膜时间也要长点下面这个是胶的浓度范围蛋白质分子量范围 适用的凝胶浓度(%)1-4*10`4 ...
益待18930493414问： 如何做大分子量蛋白的western blot实验 - ？
阜南县显尔回答： 用蛋白Marker做对比分子量大校 用内参、对照样品做蛋白表达量相对变化分析.
益待18930493414问： 对于大分子的蛋白做western blot 有哪些需要注意的 - ？
阜南县显尔回答：[答案] 大分子蛋白和小分子蛋白做western blot其实要求是一样的,区别就在于大分子蛋白跑得慢,所以电泳和转膜需要的电压或电流更大,时间更长,当然,一般大分子蛋白需要用低浓度胶,而小分子蛋白则选择高浓度胶.
益待18930493414问： 求WB高手解惑:我的蛋白分子量91KD,该用多少浓度的胶,上样量多少啊? - ？
阜南县显尔回答：[答案] 10%的分离胶,上样量一般10微升-15微升
益待18930493414问： 跑western为什么条带不在对应分子量区域 - ？
阜南县显尔回答： 但即使是这样,Western Blot得到的条带大小依然会和预计的分子量大小有出入.大部分常见的原因如下:1.翻译后修饰—比如蛋白的磷酸化,糖基化等,这些都会增加蛋白的分子量大小.2.翻译后剪切—比如很多蛋白首先被合成为前体形式,然后通过剪切获得生物学活性,比如pro-caspases.3.剪接变异体—相同的基因,经过选择性剪接会产生不同分子量大小的蛋白.4.相对电荷—氨基酸的组成 (带点 vs 不带电) 5.多聚体—比如蛋白二聚体.
益待18930493414问： 请问WB是干什么的有什么作用? ？
阜南县显尔回答： WB即是指WesternBlot印迹方法,又称为免疫印迹,是将获得的蛋白质样品通过SDS-聚丙,烯酰胺凝胶电泳,对不同分子量的蛋白质进行分离,并通过转移电泳将凝胶上分离到的蛋白质转印至固相支持物(NC膜或PVDF膜)上,用抗靶蛋白的非标记抗体(一抗)与转印后膜上的靶蛋白进行特异性结合,再与经辣根过氧化物酶标记(偶联)的二抗结合,最后用E,CL超敏发光液试,剂检测.如果转印膜上含有靶蛋白,经X光片曝光、显影,后,则会在X-光片上出现特异性蛋白,条带,详情可以咨询菩禾生物.
益待18930493414问： 多少KD算小分子蛋白.20KD以下算不.20 - 250KD算大分子还是小分子 - ？
阜南县显尔回答：[答案] 没有一个标准的界限,大家来界定小分子蛋白的时候,主要都是考虑到要对蛋白做什么分析,例如如果做WB实验,要转膜,如果蛋白分子量小于20kDa,则需要使用小孔径的转印膜,防止蛋白穿膜,而如果是电泳,小于15kDa的蛋白需要用tris-...
益待18930493414问： 在WB中心肌细胞蛋白应该用什么做内参 - ？
阜南县显尔回答： 要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot.因为Western Blot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化.虽然,顺利的时候Western Blot做起来...
益待18930493414问： WB蛋白提取 - ？
阜南县显尔回答： 这个应该不是Western blot的问题,应该是SDS-PAGE没有跑好造成的. 最后两个样品可能和SDS的结合不够彻底. 建议做Western的时候,同一批次样品SDS-PAGE跑两块胶,一块胶用来转膜印染,另一块胶用来考染作为对照.这样比较容易分析出Western的异常.
益待18930493414问： 怎样计算电泳中蛋白分子量 - ？
阜南县显尔回答： 1.首先要选择一款未经过染色的蛋白Marker,和你所要确定分子量大小的蛋白一起电泳. 2.在电泳过程中尽量选择靠中间的泳道,避免边缘效应引起条带歪斜,没有样的孔用loading填满. 3.电泳结束后,考马斯亮蓝染色. 4.如果有凝胶成像系统,可以直接先拍照,然后用系统带的软件,根据Marker每一个条带的位置,分析目标蛋白分子量. 5.如果没有这种系统,就只能用土一点的办法,量每一个Marker条带相对于加样孔的迁移量,对应每个条带的分子量做标准曲线(excel可以),通过标准曲线得到的方程和目标蛋白的迁移率计算目标蛋白的分子量大小就可以了.
