单克隆抗体制备的基本原理与过程？有什么意义？

简述单克隆抗体的制备过程~

第一次筛选的原理与方法 细胞融合后 杂交瘤细胞的选择性培养是第一次筛选的关键 普遍采用的HAT选择培养液是在普通的动物细胞培养液中加入次黄嘌呤（H） 氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶核苷酸（T）其依据是细胞中的DNA合成有两条途径是生物合成途径（D途径）即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸 为DNA分子的合成提供原料 在此合成过程中 叶酸作为重要的辅酶参与这一过程 而HAT培养液中氨基酸喋呤是一种叶酸的拮抗物 可以阻断DNA合成的D途径 另一条途径是应急途径或补救途径（S途径）它是利用次黄嘌呤一鸟嘌呤磷酸核苷转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸 两种酶缺一不可 因此 在HAT培养液中 未融合的效应B细胞和两个效应B细胞融合的 D途径 被氨基嘌呤阻断 虽 S途径 正常 但因缺乏在体外培养液中增殖的能力 一般10d左右会死亡 对于骨髓瘤细胞以及自身融合细胞而言 由于通常采用的骨髓瘤细胞是次黄嘌呤一嘌呤磷酸核苷转移酶缺陷型（HGPRT）细胞 因此自身没有 S途径 且 D途径 又被氨基喋呤阻断 所以在HAT培养液中也不能增殖而很快死亡 惟有骨髓瘤细胞与效应B细胞相互融合形成的杂交瘤细胞 即具有效应B细胞的 S途径 又具有骨髓瘤细胞在体外培养液中长期增殖的特性 因此能在HAT培养液中选择性存活下来 并不断增殖
第二次筛选的原理和方法在实际免疫过程中 由于采用连续注射抗原的方法 且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞的特异性是不同的 经HAT培养液筛选的杂交瘤细胞特异性也存在差异 所以必须从杂交瘤细胞群中筛选出能产生针对某一预定抗原决定簇的特异性杂交瘤细胞 通常采用有限稀释克隆细胞的方法 将杂交瘤细胞多倍稀释 接种在多孔的细胞培养板上 使每一孔含一个或几个杂交瘤细胞（理论上30%的孔中细胞数为0时 才能保证有些孔中是单个细胞）再由这些单细胞克隆生长 最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩大培养 因此 单克隆抗体制备过程中 两次筛选的原理和方法是不相同的
原理
B淋巴细胞在抗原的刺激下 能够分化 增殖形成具有针对这种抗原分泌特异抗体的能力 B细胞的这种能力和量是有限的 不可能持续分化增殖下去 因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的 将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞 再进一步克隆化 这种克隆化的杂交瘤细胞是即具有瘤的无限生长的能力 又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力 将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的高效价 单一的特异性抗体 这种技术即称为单克隆抗体技术

哈哈~我们刚考到这题
原理：
B淋巴细胞在抗原的刺激下，能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力。B细胞的这种能力和量是有限的，不可能持续分化增殖下去，因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的。将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，再进一步克隆化，这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力，又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力，将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的高效价、单一的特异性抗体。这种技术即称为单克隆抗体技术。
过程
1）免疫脾细胞的制备 制备单克隆抗体的动物多采用纯系 Balb/c小鼠。免疫的方法取决于所用抗原的性质。免疫方法同一般血清的制备，也可采用脾内直接免疫法。
2）骨髓瘤细胞的培养与筛选 在融合前，骨髓瘤细胞应经过含8-AG的培养基筛选，防止细胞发生突变恢复HGPRT的活性（恢复HGPRT的活性的细胞不能在含8-AG的培养基中存活）。骨髓瘤细胞用10%小牛血清的培养液在细胞培养瓶中培养，融合前24h换液一次，使骨髓瘤细胞处于对数生长期。
3）细胞融合的关键:
1技术上的误差常常导致融合的失败。例如，供者淋巴细胞没有查到免疫应答。这必然要失败的。
2融合试验最大的失败原因是污染，融合成功的关键是提供一个干净的环境，以及适宜的无菌操作技术。

4）阳性克隆的筛选 应尽早进行。通常在融合后10天作第一次检测，过早容易出现假阳性。检测方法应灵敏、准确、而且简便快速。具体应用的方法应根据抗原的性质，以及所需单克隆抗体的功能进行选择。常用的方法有 RIA法、 ELISA法和免疫荧光法等。其中ELISA法最简便，RIA法最准确。阳性克隆的筛选应进行多次，均阳性时才确定为阳性克隆进行扩增。
5）克隆化 克隆化的目的是为了获得单一细胞系的群体。克隆化应尽早进行并反复筛选。这是因为初期的杂交瘤细胞是不稳定的，有丢失染色体的倾向。反复克隆化后可获得稳定的杂交瘤细胞株。克隆化的方法很多，而最常用的是有限稀释法。
（1）显微操作法：在显微镜下取单细胞，然后进行单细胞培养。这种方法操作复杂，效率低，故不常用。
（2）有限稀释法：将对数生长期的杂交瘤细胞用培养液作一定的稀释后，按每孔1个细胞接种在培养皿中，细胞增值后成为单克隆细胞系。第一次克隆化时加一定量的饲养细胞。由于第一次克隆化生长的细胞不能保证单克隆化，所以为获得稳定的单克隆细胞株需经2～3次的再克隆才成。应该注意的是，每次克隆化过程中所有有意义的细胞都应冷冻保存，以便重复检查，避免丢失有意义的细胞。
（3）软琼脂法：将杂交瘤细胞稀释到一定密度，然后与琼脂混悬。在琼脂中的细胞不能自由移动，彼此互不相混，从而达到单细胞培养的目的。但此法不如有限稀释法好。
（4）荧光激光细胞分类法：用抗原包被的荧光乳胶微球标记杂交瘤细胞，然后根据抗原与杂交瘤细胞结合的特异性选出细胞，并进行单细胞培养。

6）细胞的冻存与复苏
7）大规模单克隆抗体的制备 选出的阳性细胞株应及早进行抗体制备，因为融合细胞随培养时间延长，发生污染、染包体丢失和细胞死亡的机率增加。抗体制备有两种方法。一是增量培养法，即将杂交瘤细胞在体外培养，在培养液中分离单克隆抗体。该法需用特殊的仪器设备，一般应用无血清培养基，以利于单克隆抗体的浓缩和纯化。最普遍采用的是小鼠腹腔接种法。选用BALB/c小鼠或其亲代小鼠，先用降植烷或液体石蜡行小鼠腹腔注射，一周后将杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中去。通常在接种一周后即有明显的腹水产生，每只小鼠可收集5～10ml的腹水，有时甚至超过40ml。该法制备的腹水抗体含量高，每毫升可达数毫克甚至数十毫克水平。此外，腹水中的杂蛋白也较少，便于抗体的纯化。
意义：
用于以下各种生命科学实验并具有医用价值
（1）沉淀反应：Precipitation reaction
（2）凝集实验：haemaglutination
（3）放射免疫学方法检测免疫复合物
（4） 流式细胞仪：用于细胞的分型和细胞分离。
（5）ELISA 等免疫学检测
（6）BIAcore biosensor:检测Ab-Ag或与蛋白的
亲和力 。
(7) 免疫印记（western blotting)
（8） 免疫沉淀：
（9） 亲和层析：分离蛋白质
（10） 磁珠分离细胞
（11）临床疾病的诊断和治疗；

要制备单克隆抗体需先获得能合成专一性抗体的单克隆B淋巴细胞，但这种B淋巴细胞不能在体外生长。而实验发现骨髓瘤细胞可在体外生长繁殖，应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与免疫的淋巴细胞二者合二为一，得到杂种的骨髓瘤细胞。这种杂种细胞继承两种亲代细胞的特性，它既具有B淋巴细胞合成专一抗体的特性，也有骨髓瘤细胞能在体外培养增殖永存的特性，用这种来源于单个融合细胞培养增殖的细胞群，可制备抗一种抗原决定簇的特异单克隆抗体。
过程的话，你看示意图吧
http://www.zszx.info/imagematerial/upload/sw/LLJS5UR626B824B8.jpg

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莱芜市19749023143： 单克隆抗体制备的原理是什么 - ？
裔注百红：[答案] 原理: B淋巴细胞在抗原的刺激下,能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力.B细胞的这种能力和量是有限的,不可能持续分化增殖下去,因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的.将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形...

莱芜市19749023143： 如图是单克隆抗体制备的过程,请据图回答下列问题.(1)单克隆抗体制备的技术原理有___和___.(2)从小鼠体内提取B淋巴细胞之前,需对小鼠___.(3)... - ？
裔注百红：[答案] (1)单克隆抗体的制备采用了动物细胞融合技术和动物细胞培养技术,它们的原理依次是细胞膜的流动性和动物细胞增殖. (2)从小鼠体内提取B淋巴细胞之前,需对小鼠注射特异性抗原,使小鼠发生免疫反应产生相应的B淋巴细胞. (3)诱导原生质...

莱芜市19749023143： 简述单克隆抗体的制备过程 - ？
裔注百红：[答案] 1.对小鼠注射特定的抗原蛋白,使小鼠产生免疫反应;2.得到相应的B淋巴细胞;3.将小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合,再用特定的选择培养基进行筛选;4.在该培养基上,未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡,只...

莱芜市19749023143： 单克隆抗体制备的基本原理与过程?有什么意义? - ？
裔注百红： 哈哈~我们刚考到这题 原理: B淋巴细胞在抗原的刺激下,能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力.B细胞的这种能力和量是有限的,不可能持续分化增殖下去,因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的.将这种B细胞与...

莱芜市19749023143： 单克隆抗体的制备原理和方法如图1所示,这样制得的抗体为鼠源性抗体.(1)在此过程中,小鼠必须经过___才能获得所需的小鼠细胞;杂交瘤细胞的特点是... - ？
裔注百红：[答案] (1)在此过程中,小鼠必须经过注射(相应)抗原才能获得具有免疫能力的B淋巴细胞.杂交瘤细胞既具有效应B细胞的特点又具有骨髓瘤细胞的特点,即既能无限增殖又能产生特异性抗体.单克隆抗体的应用包括用于治疗疾病、运载药物和 作为诊断试剂 ...

莱芜市19749023143： 1、什么是单克隆抗体?有哪些优点和缺点?2、简述单克隆抗体的基本过程?3、如何制备杂交瘤细胞? - ？
裔注百红：[答案] 单克隆抗体是利用体外培养技术生产的抗体,它由于是由一个细胞分裂而来的,所有只含有一种抗体. 单克隆抗体的优点是:理化性状高度均一、生物活性单一、与抗原结合的特异性强、便于人为处理和质量控制,并且来源容易.这些优点使其广泛应...

莱芜市19749023143： 如图是单克隆抗体制备流程的简明示意图.请据图回答下列问题:(1)生产单克隆抗体的基础技术是______.制备单克隆抗体依据的基本原理是______.(2)... - ？
裔注百红：[答案] (1)单克隆抗体制备的技术涉及动物细胞融合和动物细胞培养,基础是动物细胞培养,原理是B淋巴细胞在抗原的刺激下,能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力;(2)据图分析,给小鼠注射流感病毒,...

莱芜市19749023143： 单克隆抗体制备的原理是什?单克隆抗体制备的原理是什么 ？
裔注百红： 将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞,再进一步克隆化,这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤细胞的无限分裂的能力,又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力

莱芜市19749023143： 单克隆抗体制备原理 - ？
裔注百红： 首先取几只健康的老鼠,让它感染,然后从它的血液中提出效应淋巴细胞 然后用电击法让他们融合. 然后把这些细胞放在选择培养基上培养.这就得到了相应的细胞 最后把这些细胞防在小老鼠体内.就可得到干扰素单克隆抗体这种细胞有效应淋巴细胞与骨髓瘤细胞的基因,所以即能分泌干扰素,又能无限繁殖.

莱芜市19749023143： 高中生物!制备单克隆抗体原理? - ？
裔注百红： 制备单克隆抗体的原理是杂交瘤细胞,既具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性,又能分泌一种特异性抗体