请教关于流式细胞检测胞内蛋白的问题
你的具体问题呢？
可以，这个和western定量的原理类似，需要有标准品来作比对。不过很难。因为流式主要是用来最相对量的比较的。
细胞内的蛋白，用荧光标记的单克隆抗体识别后，用流式可以测出每个细胞的相对荧光强度。有一种特异性的微球，可以吸附一系列不同定量分子数的抗体。这种微球吸附同样的荧光抗体，可以做出荧光强度和所吸附抗体分子数量的标准曲线。然后拿细胞检测的荧光强度和这个标准曲线对比，得到细胞内所结合的抗体数。因为单克隆抗体只结合相同的抗原表位，所以可以推算出细胞内蛋白的分子数量了。
解释结果的时候要考虑到抗体的特异性和染色的效果等影响因素。
不少公司，比如BD都有成套的试剂供应，固定，通透一次性完成。然后就是使用非特异性的同种动物血清（和抗体一个物种，比如小鼠血清）来封闭。再染色。
流式细胞仪的原理是什么
1、将待测细胞染色后，制成单细胞悬液。2、用一定压力将待测样品压人流动室，同时不含细胞的磷酸缓冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管人口方向与待测样品流成一定角度，鞘液就能够包绕着样品高速流动，组成一个圆形的流束，待测细胞在鞘液的包被下单行排列，依次通过检测区域。3、流式细胞仪通常以...
流式FSC检测细胞大小,如何分析数据?
流式细胞只能比较细胞的相对大小和胞内的复杂程度，FSC对应的是细胞的相对大小，FSC的值越大表示细胞越大，SSC对应的是细胞内部复杂程度，SSC的值越大说明细胞内部的颗粒越多。在检测细胞大小的变化是，应使用未处理的细胞为对照，确定电压等检测条件后，在不改变检测条件的前提下，对处理后的细胞进行分析...
流式细胞仪检测原理
流式细胞仪检测原理如下：流式细胞仪是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量，并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。多数流式细胞计是一种零分辨率的仪器，它只能测量一个细胞的诸如总核酸量...
请教关于流式细胞检测胞内蛋白的问题
流式细胞仪检测细胞内的蛋白首先需要把细胞固定，然后细胞膜通透处理，再染色。不少公司，比如BD都有成套的试剂供应，固定，通透一次性完成。然后就是使用非特异性的同种动物血清（和抗体一个物种，比如小鼠血清）来封闭。再染色。
流式课堂 | 流式中的抗体滴定
流式细胞术（flow cytometry）是一种生物技术，它通过流式细胞仪检测标记的荧光信号，对单细胞悬液中的细胞、血小板、细胞器等生物粒子实现高速、逐一的细胞定量分析和分选。这一技术在临床医学和基础医学中应用广泛，尤其在血液病研究和机体免疫功能研究方面占有重要地位。为什么要进行抗体滴定？由于实验所用...
流式细胞仪测DNA含量具体步骤怎么调
第二个峰是正常的肝细胞。 比如下面这个图，是正常细胞的1，做的是肝癌患者活检后的检查，比如PI染色。第三个峰是DNA含量多于正常细胞（也就是癌细胞流式细胞仪测DNA含量具体步骤怎么调流式检测DNA含量，是通过DNA荧光染料，然后和已知DNA含量的商品化标准品（比如鸡红细胞）比对，得到含量。横坐标代表...
流式细胞术(Flow Cytometry)抗体的选择
在实验中，抗体的使用涉及荧光标记，包括直接偶联抗体和通过二抗间接标记。直接检测（直接流式细胞术）利用抗体与荧光团的共价结合，而间接检测则涉及一抗和二抗的组合，其中二抗如抗小鼠IgG抗体，根据一抗的来源和类型进行选择。二抗的选择需考虑种属、类别、亚类、标记形式，以及实验所需的特定标记（如酶...
肝脏细胞流式检测的方法
可以检测出细胞的基因，对某些化学性药物的敏感性和耐药性以及有无细胞的良性或者恶性病变的方式。检测的方法最先是要在体内进行肝脏的组织活检，再冷冻组织标本，需要把活体的组织用科学方式做成单个的细胞，之后再将单个的细胞放在等渗的溶液里面，做成悬浮的细胞液，将悬浮的细胞液放在流式细胞检测仪器...
一文读懂--流式细胞术及其应用简介
免疫细胞分型和肿瘤免疫微环境分析通过多参数检测提供深入的细胞功能和状态信息。百奥赛图提供一站式临床前药效研究与安全性评价服务，包括药效研究、PK-PD研究、毒理学研究等，帮助客户加速药物开发进程。平台积累了丰富的小鼠同源移植肿瘤模型的免疫微环境数据，支持药物选择和药效评估。通过流式细胞术检测...
请教流式细胞的具体实验步骤是怎样的?
10.加入PBS 500l。上机前4度保存。11.上机检测。注意：本实验室可提供流式细胞检测服务或流式细胞仪,不会的新手可以自行上门观察.本实验室为正规三甲医院科研共享平台,所有开放的实验均为本实验最常规的技术服务,暂时开放的除了流式细胞术外还有荧光定量pcr,ChIP免疫沉淀,wester blot,细胞培养,细胞株.
中叔芝胰酶： 流式细胞仪检测细胞内的蛋白首先需要把细胞固定,然后细胞膜通透处理,再染色.不少公司,比如BD都有成套的试剂供应,固定,通透一次性完成.然后就是使用非特异性的同种动物血清(和抗体一个物种,比如小鼠血清)来封闭.再染色.
山海关区19484489915： 流式与westen在检测蛋白表达方面各有什么优缺点? - ？
中叔芝胰酶：[答案] 流式细胞仪当然可以检测细胞内蛋白,这一点,并不是很难,当然要比检测细胞表面抗原复杂些,好在都已经有现成的方法,不成问题.不过流式的应用原理主要还是抗原和抗体反应和western、免疫组化没有本质差别,但是由于免疫组...
山海关区19484489915： 流式细胞仪可以做细胞内某种蛋白定量吗 - ？
中叔芝胰酶： 可以,这个和western定量的原理类似,需要有标准品来作比对.不过很难.因为流式主要是用来最相对量的比较的. 细胞内的蛋白,用荧光标记的单克隆抗体识别后,用流式可以测出每个细胞的相对荧光强度.有一种特异性的微球,可以吸附一系列不同定量分子数的抗体.这种微球吸附同样的荧光抗体,可以做出荧光强度和所吸附抗体分子数量的标准曲线.然后拿细胞检测的荧光强度和这个标准曲线对比,得到细胞内所结合的抗体数.因为单克隆抗体只结合相同的抗原表位,所以可以推算出细胞内蛋白的分子数量了. 解释结果的时候要考虑到抗体的特异性和染色的效果等影响因素.
山海关区19484489915： 流式细胞术是不是只能检测细胞表面蛋白 - ？
中叔芝胰酶： 还可以检测细胞内的蛋白.需要:1、收集细胞;2、多聚甲醛溶液固定细胞;3、细胞打孔(破膜);4、封闭;(此步有时候可省略);5、孵育抗体;6、上机检测;其中2和3有时可同时进行.
山海关区19484489915： 流式细胞分选可以检测细胞质中表达的蛋白吗 - ？
中叔芝胰酶： 流式细胞分选可以检测细胞质中表达的蛋白 流式细胞计是对细胞进行自动分析和分选的装置.它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量,并可以根据预选的参量范围把指定的细胞...
山海关区19484489915： 做细胞内细胞因子的流式细胞仪检测应该注意什么？
中叔芝胰酶： 1. 标本处理:避 免使用络合钙的抗凝剂,如ACD与EDTA,因为它们会限制钙依赖性激活过程,推荐用肝素钠.此外LPS,一种常见的生物试剂污染物,是强细胞激活剂,可 能会混淆试验结果.血样在8小时内分析,超过8小时会导致活性的损...
山海关区19484489915： 请教:测细胞内蛋白的ELISA怎么做 - ？
中叔芝胰酶： 一般来说检测细胞内的蛋白质需要破碎细胞,非结构蛋白较易提取,破碎细胞后离心取上清即可.而结构性蛋白则需破碎脂膜提取蛋白,具体方法可参照膜蛋白提取的相关文献.提取的总蛋白需定量,然后以每mg或g的蛋白的相同浓度稀释后用于测定.提取时注意要保持低温及加入必要蛋白酶抑制剂(protease inhibitor).
山海关区19484489915： 如果某种蛋白在细胞中低表达,用流式细胞术能不能检测 - ？
中叔芝胰酶： 这个要看具体情况,这个蛋白是不是荧光融合蛋白,如果不是,抗体是否敏感性和特异性都很高,有没有荧光标记的抗体等等.不来笼统的直接回答能,或者不能.
山海关区19484489915： 如何应用流式细胞仪检测荧光蛋白的表达量 - ？
中叔芝胰酶： 可以.这个是流式细胞仪一个常见的应用. 上流式细胞仪以前,需注意的是 1.细胞打散到单细胞的悬液,没有聚团成块.如果有顾虑的话用纱网过滤一次才用. 2.细胞悬液的浓度不能过高和过低.详请参考你的仪器说明建议值.我的经验每毫升一百万足...
山海关区19484489915： 流式细胞术怎么检测 autofluorescence - ？
中叔芝胰酶： 所谓autofluorescence就是细胞在没有使用荧光抗体或者荧光染料染色时所发出的荧光.细胞内的很多大分子都可以被激发而发出荧光.因为流式细胞仪是检测的相对荧光强度,所以必须要有对照才能进行比较. 一般把未染色的细胞作为阴性对照,其发出的本地荧光作为阴性的阈值,高于该阈值的,认为是染色所导致的阳性信号.
