逆转录原理
循环反应：1．变性，即对待扩增的RNA模板加热变性，温度条件89～95℃，保温定时间(5～120秒)；2．复性，即RT引物(用于RT过程中，与RNA链结合并能引导CDNA合成的DNA寡核苷酸)与RNA链上的互补序列结合复性，温度条件55～68℃，保温一定时间(5～90秒)；3．延伸，即逆转录酶催化RT引物延伸合成CDNA，形成RNA-DNA杂合双链，温度条件60～70℃，保温一定时间(60～180秒)；杂合双链变性解链后，RT引物再结合到RNA链上，由逆转录酶第二次催化引物延伸合成CDNA，如此，利用RNA模板，可以反复进行CDNA合成，因而，称之为循环逆转录(Cycle Reverse Transcription,CRT)。
这个不同温度持续时间，以实际逆转录反应不同而有所差异。
原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。
该技术主要用于：分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。
RT- PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction）即逆转录PCR，是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。
首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。
作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA，关键是确保RNA中无RNA酶和基因组 DNA的污染。
用于反转录的引物可视实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT 及基因特异性引物中的一种。对于短的不具有发卡结构的真核细胞mRNA，三种都可。
扩展资料
反转录酶的选择
1、Money 鼠白血病病毒（MMLV）反转录酶：有强的聚合酶活性，RNA酶H活性相对较弱。最适作用温度为37℃。
2、禽成髓细胞瘤病毒（AMV）反转录酶：有强的聚合酶活性和RNA酶H活性。最适作用温度为42℃。
3、Thermus thermophilus、Thermus flavus等嗜热微生物的热稳定性反转录酶：在Mn存在下，允许高温反转录RNA，以消除RNA模板的二级结构。
4、MMLV反转录酶的RNase H突变体：商品名为SuperScript 和SuperScriptⅡ。此种酶较其它酶能多将更大部分的RNA转换成cDNA，这一特性允许从含二级结构的、低温反转录很困难的mRNA模板合成较长cDNA。
参考资料：百度百科——RT -PCR
逆转录PCR (RT-PCR )具有较高的灵敏性、操作简单等优点，常用于基因定量分析、生物学检测等，此外常用逆转录PCR克隆目的基因。 本文主要讲述了逆转录PCR的原理、重要参数以及操作注意事项。
cDNA的合成是RT-PCR 的重要环节。以mRNA为模板，在逆转录酶的催化下，随机引物、oligo(dT)或基因特异性引物的引导下合成互补的DNA(complementary DNA，cDNA)，再按照普通PCR的方法用两条引物以cDNA为模板，则可扩增出不含内含子的可编码完整基因的序列。
逆转录PCR 重要参数
不同mRNA拷贝成cDNA的效率不同;因此，适合于一种mRNA拷贝的条件可能对另一种mRNA不适合。一般来说，从事不均一mRMA群体时，所使用的条件是导致cDNA合成的终产量达到最大，下述参数十分重要。
1.逆转录酶 有两种不同的逆转录酶可以催化以mRNA为模板，oligo(dT)作为引物，合成与mRNA互补的cDNA链。一种来自纯化的禽成髓细胞瘤病毒(AMV)，由两条肽链组成，具有聚合酶活性和很强的RNA酶H活性，它最适温度是42℃，最适pH8.3。在高反应温度时可消除mRNA的二级结构对逆转录的阻碍，然而高水平的RNA酶H的活性既抑制cDNA产生也限制其长度。另外，禽源逆转录酶制剂可被能切割DNA的核酸内切酶污染。
另一种来源于鼠白血病病毒(Mo-MLV)，是单肽链的，有RNA聚合酶活性和相对较弱的RNA酶H活性，最适温度37℃，最适pH7.6，较弱的RNA酶H活性对获得2-3kb的mRNA的全长cDNA有很大好处。
在第一链反应前可用氢氧化甲基汞处理，破坏mRNA的二级结构，这一步对于最适反应温度较低(37)℃的鼠源逆转录酶催化的反应可能更为重要。临合成cDNA第一链之前加入过量的巯基试剂，可以使氢氧化甲基汞从RNA上解离。
2.单价阳离子 离子条件基本上影响各种模板的转录效率。用钾比用钠离子可获得较长的转录产物。对于cDNA长度的最适钾离子浓度为140-150mM。
3.二价阳离子 对于反转录酶活性来说，二价阳离子是必需的。低于4mM Mg2 未能观察到活性;产生全长转录产物的最适浓度是6-10mM。
4.脱氧核苷三磷酸 使用四种脱氧核苷三磷酸(dNTP)中每一种的高浓度对于有效合成cDNA是特别重要的。如果其中只有一种的浓度下降到10-50微摩尔以下，全长转录物的产量将明显下降。常用的dNTP的浓度为200-250微摩尔。
材料与方法
「单细胞测序1」单细胞转录组测序原理-欧易生物
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终止之后的RNA聚合酶2转录定向性原理
过程如下：种名为RNA聚合酶的酶将自身包裹在DNA的双螺旋上，利用一条链与核苷酸匹配来复制遗传物质，从而产生一条新合成的RNA链，在转录完成后断裂。RNA使蛋白质的产生成为可能，蛋白质对所有生命都至关重要，并在细胞内完成大部分工作。
胰岛素的转录翻译原理
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两种方法的区别为什么以目的基因转录成的mRNA为模
转录水平上的检测主要方法是Northern杂交，它是以DNA或RNA为探针，检测RNA链。和Southern杂交相同，Northern杂交包括斑点杂交和印迹杂交。也可用RT-PCR（reverse transcribed PCR）方法检测外源DNA在植物体内的转录表达。其原理是以植物总RNA或mRNA为模板进行反转录，然后再经PCR扩增。如果从细胞总RNA提取物中...
谁知道基因表达的原理和转录是RNA的作用分别是什么?
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pcr技术的基本原理和过程
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试述三种RNA在蛋白质合成中的作用及原理
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RNA反转录成cDNA只要一个引物还是一对引物,原理是啥,我有点糊涂了_百度...
一个,运用反转录,以一条DNA单链为模板,以一个引物为转录的开始,通过DNA聚合酶进行链接（反转录的最终长度是不确定的,可能无限长）
转录组原理、分析步骤介绍
-2 定量 数每个基因上落了几条reads，需要将基因结构画在染色体上 → 基因表达量（表格），又称 原始的reads count 矩阵 以上为 转录组标准分析 （非模式物种的可变剪接、融合基因分析不值当）-3 原始reads count矩阵标准化（细节见转录组原理篇课程） RPKM(PE)\/FPKM(SE) （该方法是...
姓姚康复： 逆转录(reverse transcription)是以RNA为模板合成DNA的过程,即RNA指导下的DNA合成.此过程中,核酸合成与转录(DNA到RNA)过程与遗传信息的流动方向(RNA到DNA)相反,故称为逆转录.逆转录过程是RNA病毒的复制形式之一,需逆转录酶的催化. 逆转录过程的揭示是分子生物学研究中的重大发现,是对中心法则的重要修正和补充.人们通过体外模拟该过程,以样本中提取的mRNA为模板,在逆转录酶的作用下,合成出互补的cDNA,构建cDNA文库,并从中筛选特异的目的基因.该方法已成为基因工程技术中最常用的获得目的基因的策略之一.
聂拉木县17772657918： 重组DNA技术中,如何采用逆转录PCR方法直接从mRNA获得特定基因的cDNA.(即逆转录PCR的基本原理) - ？
姓姚康复：[答案] 一般是由DNA的一条链为模板,合成mRNA,逆转录由mRNA,密码子,氨基酸中一种合成DNA,mRNA是A,T,U,C组成,而且要遵守碱基互补配对原则,所以根据mRNA上的碱基推算出模板链碱基组成,同时将U换成T,然后由DNA模板链推算出对应...
聂拉木县17772657918： 什么是逆转录?是从RNA→DNA吗?碱基互补配对是怎样的 - ？
姓姚康复： 逆转录是中心法则的发展,就是RNA→DNA,只会在病毒体内发生,它所遵循的碱基互补配对原则个转录时是一样的,U→A,G→C,C→G,A→T.
聂拉木县17772657918： RNA的逆转录是怎么回事 - ？
姓姚康复： 在“逆转录酶”的作用下,能够发生以RNA为模板,合成DNA 逆转录的发现,无疑是对“遗传中心法则”的一个重要补充.逆转录现象表明,在蛋白质的合成过程中,不单DNA能决定RNA,而且RNA同样可以决定DNA,再通过mRNA翻译成蛋白质
聂拉木县17772657918： 培养细胞如何提取mRNA,如何逆转录?培养细胞提取mRNA的原理是什么?如何用所提取的mRNA进行逆转录? - ？
姓姚康复：[答案] 1 细胞总RNA的提取 1)、6孔板细胞(CNE-2)汇合度为90-100%时,取出无菌室,去其上清,用PBS洗两次后,每孔加... 10)、电泳. RNA提取的原理就是核酸在异丙醇中的溶解度很低!其他步骤都是防止RNA降解和使RNA从细胞中溶出. 逆转录过程请...
聂拉木县17772657918： 反转录和逆转录有什么区别 - ？
姓姚康复： 两者是同一生理过程的不同提法,没有本质的区别,都是遗传信息流动的方向是从RNA到DNA.但在一些考题中,它们又有所区别的.反转录是人工条件下 ,借用逆转录酶,根据逆转录原理,实现用细胞生物mRNA为模板,合成目的基因的过...
聂拉木县17772657918： RNA病毒的RNA为什么要逆转录 - ？
姓姚康复： RNA病毒有四种 携带+RNA的 携带-RNA和复制酶的 携带+ -RNA和复制酶的 以及 致癌RNA病毒携带两条 +RNA 切5'具有CAP 3'具有Poly A尾 两条RNA在5'端 有氢键 相连 形成特殊的二倍体 只有最后一种 致癌RNA病毒 需要逆转录 整合到宿主基因组中 进行扩增 此后形成胞外相 侵染其他细胞 而前三中 RNA病毒 都不须逆转录 可以自行进行RNA的复制 然后装配
聂拉木县17772657918： RT - PCR原理及操作 - ？
姓姚康复： 原理:RT-PCR 为反转录RCR(reverse transcription PCR)和实时PCR(real time PCR)共同的缩写.逆转录PCR,或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形.在RT-PCR中,一条...
聂拉木县17772657918： 什么是逆转录?请详细解释.大神们帮帮忙 - ？
姓姚康复： 转录是DNA→RNA,所以,顾名思义逆转录就是RNADNA.这是一些病毒侵入细胞进行繁殖的一种方式,需要逆转录酶的,病毒RNA变为DNA后就可以像正常细胞的DNA一样转录、翻译了.当然可能不只这一种方法,特殊的有RNA的自我复制,出现新个体~ 这应该很容易懂的吧,希望有用~
聂拉木县17772657918： 用逆转录方法获得目的基因在细胞外还是细胞内 - ？
姓姚康复：[答案] 逆转录(reverse transcription)是以RNA为模板合成DNA的过程,即RNA指导下的DNA合成.核酸合成与转录(DNA到RNA)过程与遗传信息的流动方向(RNA到DNA)相反,故称为逆转录.逆转录过程是RNA病毒的复制形式之一,需逆转录酶的催...
