质粒提取时,为何要去内毒?
内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁(cell wall)上的特有成分，主要是脂多糖中的类脂A，在细菌被裂解时被释放出来，由于其化学结构和特性，在质粒的纯化过程中很容易混入质粒DNA一同提取出来。内毒素的存在会严重的影响质粒转染细胞的效率，此外会激活造血细胞（如B细胞、巨噬细胞等）的非特异免疫反应，造成实验的假阳性，所以转染级质粒的提取纯化必须去除内毒素。
内毒素是细菌体内释放的毒素，在一般的杀菌过程中都伴随内毒素的产生，如果想去除需要特殊的处理，需要特殊的膜能把内毒素过滤掉
若做转染，需要去内毒素，因为内毒素会对细胞造成伤害，严重的甚至杀死细胞。在提取质粒的过程中，可能会残留有细菌（如大肠杆菌）产生的内毒素，虽然有时可能内毒素含量很少，但为了以防万一，若做转染，一般都要去内毒素。如果质粒用于转染，要去内毒素。如果用于酶切或转化，就不用去内毒素。
质粒提取时,为何要去内毒?
若做转染，需要去内毒素，因为内毒素会对细胞造成伤害，严重的甚至杀死细胞。在提取质粒的过程中，可能会残留有细菌（如大肠杆菌）产生的内毒素，虽然有时可能内毒素含量很少，但为了以防万一，若做转染，一般都要去内毒素。
在质粒提取中如有蛋白质残留会有什么现象?如何去除蛋白污染
在质粒提取中如有蛋白质残留，会出现提取的质粒不纯净的现象，加入溶液III可以去除蛋白污染。质粒抽主要的目的是为了去除 RNA，将质粒与细菌基因组 DNA分开，然后去除蛋白质及其它杂质，如果去除的不够彻底或者有残留，那么得到的质粒就不会相对纯净。蛋白质的去除，主要是靠不溶解的 K-SDS-蛋白质复合物...
关于小提质粒的步骤、解说以及注意
吸附分离：洁净质粒离心后，将上清转移至吸附柱，低速离心去除废液，确保质粒被有效吸附。洁净程序：反复洗涤用试剂盒中的溶液洗涤吸附柱，重复2-3次，确保杂质被彻底清除。去酒精：等待干燥高速离心后，让柱子上的酒精自然挥发，为后续操作准备一个干燥的环境。释放质粒：提取DNA加入预热的EB buffer或ddH2O...
质粒提取的注意事项
3、蛋白质的去除，主要是靠不溶解的 K-SDS-蛋白质复合物的形成。虽然将中和后的体系置于 4C 一段时间，可以形成更多的该不溶复合物，从而使蛋白质残留更少，但实践证明这样做并不是必须的，除非是大量抽提。首先，质粒的提取可分为质粒小提、质粒中提、质粒大提。目前大多数实验室都选用试剂盒进行...
提取pet28质粒时,怎样才能得到高的浓度
1、增加收菌次数,相对提高了质粒的量,这样的话裂解液的量可以适当增加；2、裂解要充分,变性和复性按说明应该是不超过5分钟,合理控制时间,一般在3分到4分半的时间都是可以的；3、过柱子时,吸附的时间尽量长一些,可以在这期间做做其他实验或者吃个饭什么的；4、如果没有必要,不使用去蛋白液,因为每...
大肠杆菌质粒提取过程中,哪一步最关键?
2M的醋酸是为了中和NaOH。基因组DNA一旦发生断裂，只要是50-100 kb大小的片断，就没有办法再被 PDS共沉淀了，所以碱处理的时间要短，而且不得激烈振荡，不然最后得到的质粒上总会有大量的基因组DNA混入，琼脂糖电泳可以观察到一条浓浓的总DNA条带。75%酒精主要是为了清洗盐份和抑制Dnase；同时溶液III的...
怎样提取质粒?
如果要求是30度则培养20h；（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）；⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
为什么要提取单个核细胞是什么意思呢
提取单个核细胞是用粒细胞容易产生杂质，分离时比较难，而使用单个核细胞时，少去了分离的工序，容易进行。单个核细胞就是指外周血中具有单个细胞核的细胞，单个核细胞包括两类细胞，一类是淋巴细胞，另一类是单核细胞。人外周血单个核细胞分离自外周血。外周血单个核细胞(PBMC)即外周血中具有单个核的...
质粒提取的时候为什么会有丝?
因为在强碱性条件下，膜由双层膜结构转变为微胶囊结构。SDS与NaOH配合使用，增强NaOH的强碱性，SDS作为阴离子表面活性剂，破坏脂质双层膜。这一步的注意事项：首先，不要太久，因为基因组DNA片段在这样的碱性条件下会慢慢分解。第二，加入溶液2后，操作一定要轻柔，剧烈混合会导致基因组DNA污染。
碱裂解法提取质粒的溶液I是什么颜色的,是不是应该是透明的啊?_百度知 ...
你要是懒，非要灭菌长期使用，就不要加葡萄糖，葡萄糖只是离心的时候调节密度的，不加对质粒提取的影响不大。书本是人写的，实验是灵活的，人家怎么写你怎么做，那你还做得出什么创新的东西来？人家说灭菌，也没说是多少温度灭菌，还是紫外消毒。掌握了原理，你就不要管什么书本，按照自己的想法去做...
蓍俘奈狄： 若做转染,需要去内毒素,因为内毒素会对细胞造成伤害,严重的甚至杀死细胞.在提取质粒的过程中,可能会残留有细菌(如大肠杆菌)产生的内毒素,虽然有时可能内毒素含量很少,但为了以防万一,若做转染,一般都要去内毒素.
延川县13596291620： 质粒提取的步骤 - ？
蓍俘奈狄： 实验一 ApaLI (178) P(BLA) ALPHA 质粒DNA的提取、 质粒DNA的提取、酶切 DNA的提取 及琼脂糖凝胶电泳 ApaLI (2367) EcoRI (397) AvaI (413)XmaI (413) SmaI (415) APr pUC19 BamHI (418) PstI (440)HindIII (448) P(LAC) ORI 2686 bp ApaLI ...
延川县13596291620： 质粒提取的11个为什么 - ？
蓍俘奈狄： 1.溶液I—溶菌液:溶菌酶:它是糖苷水解酶,能水解菌体细胞壁(cell wall)的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键,因而具有溶菌的作用.当溶液中pH小于8时,溶菌酶作用受到抑制.葡萄糖:增加溶液的粘度,维持渗透压,防止DNA受机械...
延川县13596291620： 质粒DNA提取和细胞基因组DNA提取的异同 - ？
蓍俘奈狄： 不同点 一、提取方法不同 DNA提取主要是CTAB方法,其他的方法还有物理方式如玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法.化学方式如异硫氰酸胍法、碱裂解法.生物方式:酶法. 质粒抽提方法即去除 RNA,将质粒与细菌基因组 DNA分开,...
延川县13596291620： 不用试剂盒提质粒可以直接转染细胞吗? - ？
蓍俘奈狄： 可以的,但是要去内毒素
延川县13596291620： 提取质粒时这样去除基因组总DNA - ？
蓍俘奈狄： 用碱裂解法提质粒,基因组DNA会与细胞残骸聚集,而小的质粒DNA溶在水相中,通过离心就能除去;如果还担心有少量基因组DNA污染,可以电泳后从胶中回收质粒片段;用核酸外切酶也能消化掉线性的DNA,而环形和超螺旋的质粒DNA则得以保留.
延川县13596291620： 质粒的提取原理 - ？
蓍俘奈狄： 质粒提取是指去除 RNA,将质粒与细菌基因组 DNA分开,去除蛋白质及其它杂质,以得到相对纯净的质粒. 目录 一、质粒提取原理 质粒是细胞内的一种环状的小分子DNA,是进行DNA重组的常用载体.作为一个具有自身复制起点的复制单位...
延川县13596291620： 质粒提取过程中,应注意哪些操作,为什么? - ？
蓍俘奈狄：[答案] 1.提取过程应尽量保持低温.2.提取质粒DNA过程中除去蛋白很重要,采用酚/氯仿去除蛋白效果较单独用酚或氯仿好,要将蛋白尽量除干净需多次抽提.3.沉淀DNA通常使用冰乙醇,在低温条件下放置时间稍长可使DNA沉淀完全.沉淀DN...
延川县13596291620： 质粒DNA的提取过程中染色体的去处和原理是什么 - ？
蓍俘奈狄： 首先加入溶液1,:改变细胞膜的通透性. 加入溶液2:使细胞裂解,释放出质粒DNA和染色体DNA,在碱性条件下,破坏碱基配对,使这两种DNA都变性. 加入溶液3:使DNA分子复性.此时,线状染色体DNA的两条链已经全部分开,不会再复合.而质粒DNA,由于处于拓扑缠绕状态而彼此不分开,你可以想象一下,两个环分开之后也是环环相套的情况.所以质粒DNA能够很快的找到自己相对应的那条链,因此在最适条件下,便可复性. 此时,已经完全分开的线状染色体DNA交联形成不溶于水的线团结构,缠绕附着在细胞壁碎片上,通过离心可去除. 而质粒DNA则留在上清中,通过异丙醇沉淀以及70%乙醇洗涤后便可得到.
延川县13596291620： 碱法提取质粒中,基因组dna和蛋白质怎样被去除,其原理何在 - ？
蓍俘奈狄： 现质粒提取论手提试剂盒其根本原理碱裂解:菌体NaOH SDS溶液裂解蛋白质与DNA发变性加入液质粒DNA能够迅速复性呈溶解状态离留清;蛋白质与染色体DNA变性 呈絮状离沉淀 进步质粒DNA获取手提经苯酚、氯仿抽提RNA酶消化乙醇沉淀 等简单步骤除残余蛋白质RNA及盐试剂盒则基础使用DNA吸附柱吸附质粒DNA洗脱质粒 评价:一通琼脂糖电泳检查所获质粒(准确需酶切)细菌基组DNARNA污染及质粒断裂少同根据marke量品进行致浓度定量; 二通紫外光光度计测定品OD二吧0OD二陆0计算其比值衡量品纯度经验值:纯DNA:OD二陆0/OD二吧0≈一.吧(>一.9,表明RNA污染;
