请问如何绘制标准曲线
(1)标准液浓度的选择:在制备标准曲线时,标准液浓度选择一般应能包括待测样品的可能变异最低与最高值,一般可选择5种浓度.浓度差距最好是成倍增加或等级增加,并应与被测液同样条件下显色测定.
(2)标准液的测定:在比色时,读取光密度至少读2-3次,求其平均值,以减少仪器不稳定而产生的误差.
(3)标准曲线图的绘制:一般常用的是光密度一浓度标准曲线.
①用普通方格纸作图.图纸最好是正方形(长:宽=l:1)或长方形(长:宽=3 :2),以横轴为浓度,纵轴为光密度,一般浓度的全距占用了多少格,光密度的全距也应占用相同的格数.
在适当范围内配制各种不同浓度的标准液,求其光密度,绘制标准曲线,以浓度位置向上延长,光密度位置向右延长、交点即为此座标标点.然后,将各座标点和原点联成一条线,若符合Lambert-Beer氏定律,则系通过原点的直线.
②若各点不在一直线,则可通过原点,尽可能使直线通过更多点,使不在直线上的点尽量均匀地分布在直线的两边.
③标准曲线绘制完毕以后,应在座标纸上注明实验项目的名称,所使用比色计的型号和仪器编号、滤光片号码或单色光波长以及绘制的日期、室温.
④绘制标准曲线:一般应作二次或三次以上的平行测定,重复性良好曲线方可应用.
⑤绘制好的标准曲线只能供以后在相同条件下操作测定相同物质时使用.当更换仪器、移动仪器位置、调换试剂及室温有明显改变时,标准曲线需重新绘制.
⑥标准曲线横坐标的标度:从标准液的含量换算成待测液的浓度.
qRT-PCR中标准曲线制作及浓度梯度问题
是的,标准曲线法是绝对定量法 不是,既然用到了内参,就是相对定量了 反转录的时候按照试剂盒的要求转录特定质量的RNA(RNA的浓度可以通过分光光度计测定),反转完后按照推荐的比例稀释产物即可,一般确保你要的基因的Ct值在20~25比较理想 对于同一类生物样本,提取三份RNA(每份RNA都应包含若干不同...
分光光度计测定酶活中的问题
需要,空白对照一般是指缺少关键的成分,而其他的步骤完全和实验步骤一样的。再设计标准曲线时,空白设计的梯度应该是范围较大的。而进行试验测定时,在使用空白样时,应该和实验样的量一样,这样稀释时是不影响的。但是吸光值应该在标准曲线内,否则有误差。这时应该重新设计标准曲线或稀释样品。
关于标准曲线的问题
一般都达到4个9 3个9的也有 相关系数越接近1越好 (是偶们搞分析的博士姐姐给的答案哦)
如何根据rt-pcr的电泳结果确定基因的表达情况
7.求RealTime PCR 内参引物序列GAPDH或Actin(内参引物序列,扩增曲线,溶解曲线,引物序列)8.RT-QPCR大家都用什么做标准曲线(标准曲线,扩增效率,标准品,反转录)9.pcr-sscp法(pcr-sscp,凝胶,单链,玻璃)10.【心得】Primer3中几个参数设置问题(参数设置,引物,互补性,设计引物)11.实时荧光PCR检测技术(...
关于标准曲线的问题
0.2~0.8范围内的标准曲线不能用于0.03或1.20的测定,因为在0.03~0.2和 0.8~1.20之间是什么样的曲线不得而知。如果可能,做一条0.01~1.22范围 的标准曲线来应用。
招标方在评标时应注意哪些问题?
二、严格按招标文件标准和评标程序进行 研读招标文件:在评审投标文件前,给予评标委员会成员充分时间研读招标文件,掌握评标要点。规范评审流程:严格按照招标文件规定的评标程序进行评审,不得随意减少中间环节。统一评审标准:所有评标标准应一致统一,严格按照招标文件要求进行评审。初步评审与详细评审:先进行...
磷标准曲线遇到的问题
空白按理说是无色的,有一点点没关系。标准曲线浓度太大,配的时候小一个数量级试试。如果是水的问题,加深程度应该一样,不会浓得区别不出来。我们的自来水里面东西多了,你可以用pH试纸测一下,变化大得很。蒸馏水重新做咯,如果污染源不是桶,那用的应该是去离子水,交换柱该洗了 ...
可见分光光度计测定标准曲线的值太小了,线性度还是挺好的,只有0.04-0...
对于分光光度法,做工作曲线线性很好的A值范围在0.2到1.0之间,低于0.2或大于1.0,时,曲线比较平滑,线性不好。当然,这样说是指你测出来的标准样品的吸光度跨度范围大,既有低于0.2,或者还包含高于1.0的,这样会影响整体的线性相关度。现在你测得这个整体都低于0.2,在这个区间内线性是没...
ELISA标准曲线很好,样品测不出的问题
Elisa标准曲线不管国产的还是进口的,一般都会做的很好。但是由于前处理方法以及试剂盒本身抗体的原因,会导致在实际检测的时候出现样品检测不出,或者不管什么样的样品检测结果一样的问题。通常,或者开发新方法,也就是改进前处理那部分的方法。或者干脆使用进口试剂盒。不知道你是在测什么指标,我可以帮你...
火焰原子吸收标准曲线问题
不需要,只要标准曲线能测出来即可,有一定的斜率和线性相关系数达到0.999以上,一旦标准曲线确定,样品在相同的条件下测定即可,不得改变任何参数,当然测定值要落入线性范围。
豆泰拉美: 标准曲线应在坐标纸上绘制,横坐标轴距坐标纸底边1.5——2cm,标示出刻度和葡萄糖的毫克数;纵坐标轴距坐标纸左边1.5——2cm,标示刻度和光密度值;曲线为过原点的直线,测定点均匀分布在直线的两侧;标准曲线只能在测试条件完全相同的情况下,用于确定样品中的物质含量.对于重复的测定,应取吸光度的平均值查标准曲线;测定数据不应记在标准曲线上.
成都市19111572333: 请问如何绘制标准曲线 - ?
豆泰拉美: 标准曲线的作法 (1)标准液浓度的选择:在制备标准曲线时,标准液浓度选择一般应能包括待测样品的可能变异最低与最高值,一般可选择5种浓度.浓度差距最好是成倍增加或等级增加,并应与被测液同样条件下显色测定. (2)标准液的测定...
成都市19111572333: 食品分析如何绘制标准曲线 - ?
豆泰拉美:[答案] 首先用已知的一系列成浓度梯度(例如1、2、3、4、5mg/ml)的已知溶液,用分光光度计在最大吸收波长下分别测出吸光度,然后以浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,做一次函数,就是标准曲线了.
成都市19111572333: 一般标准曲线的绘制是怎样的呢? ?
豆泰拉美: 2.5.2标准曲线的绘制准确吸取0.5,1.0,2.0,5.0mL氯标准溶液A及1.0,2.0,5.0mL氯标准溶液B,分别置于7个塑料小烧杯中,并用装有去离子水的微量滴定管补足各溶液为5.0mL,分别准确加入5.0mL缓冲溶液(2.4.2),混匀,与试样同样操作
成都市19111572333: 怎么用坐标纸绘制标准曲?怎么用坐标纸绘制标准曲线 ?
豆泰拉美: 标准曲线的作法 (1)标准液浓度的选择:在制备标准曲线时,标准液浓度选择一般应能包括待测样品的可能变异最低与最高值,一般可选择5种浓度.浓度差距最好是成...
成都市19111572333: 如何绘制气相色谱标准曲线 - ?
豆泰拉美:[答案] 童鞋,翻一翻仪器分析书吧,用预测组分的纯物质加稀释剂配成不同质量分数的标准溶液N组,然后每组测量吧,然后绘制响应信号(纵坐标)对质量分数(横坐标)的标准曲线,这是个过原点的曲线. 再做一组待测组分的气象,得到式样的响应信号...
成都市19111572333: 怎么样绘制标准曲线 - ?
豆泰拉美: 用EXCEL画吧.将数据输入EXCEL后用散点图绘制,如果数据是线性、抛物线、指数、对数特性,可以添加趋势线,并且可以达到拟合曲线. 具体使用办法可以查看EXCEL的帮助.把图表复制,再粘贴到WORD里就可以.
成都市19111572333: 如何绘制吸光度标准曲线? - ?
豆泰拉美: 吸光度标准曲线的绘制可以使用Excel的图表功能来实现.在化学分析中,吸光度标准曲线是用于量化分析物质浓度的重要工具.它基于比尔-朗伯定律,该定律指出吸光度与物质的浓度和光程长度成正...
成都市19111572333: 如何用excel 绘制标准曲线 - ?
豆泰拉美: 首先打开做好了数据的统计表然后全选数据然后在选择插入.在选择折线状!然后在根据你的数据类型选择折线状的显示形式.我这里演示的是每日消费情况的,效果图如下!
成都市19111572333: 如何绘制ELISA标准曲线 - ?
豆泰拉美: 在ELISA实验结束后,我们得到的是经酶标仪得出的标准品以及样本的OD值.其中,标准品的浓度已知,我们可以利用标准品的OD值及其相对应的浓度,以OD值为横坐标,浓度为纵坐标,做一条标准曲线,并用公式表示出来.这样,我们把...