10步填上免疫组织化学 (IHC) 的坑
1. 标本固定：选择合适的固定剂，如甲醛、多聚甲醛或特定组织适用的苦味酸、戊二醛等，确保抗原性保存并防止自溶。固定方法包括浸透法、灌注法等，其中后者要求精确找到主动脉进行灌注。
2. 脱水、石蜡包埋和制片：使用梯度乙醇脱水，石蜡包埋时需控制好温度和比例，以防止抗原损失。切片时要求技术熟练，确保完整切面。
3. 脱蜡和水化：确保切片充分脱蜡，否则可能导致非特异性背景着色。水化是为了与染色液兼容，进行后续反应。
4. 抗原修复：由于固定过程中的交联作用，抗原修复是提高检测率的关键步骤，可通过高压加热、微波或胰酶消化等方式进行。
5. 灭活内源性酶：在免疫组化反应前，需要用过氧化氢和卵白素消除内源性过氧化物酶干扰，确保反应的准确性。
6. 血清封闭：使用血清封闭避免一抗与非特异性组织结合，降低假阳性风险。
7. 抗体浓度和孵育时间：一抗和二抗的浓度需依据抗体说明书调整，孵育时间影响染色效果，推荐低温慢孵。
8. 选择抗体和筛选：利用The Human protein atlas和CiteAb等资源，选择高质量的抗体，并根据引文数量优化筛选。
9. 切片清洗和DAB显色：清洗步骤需充分去除杂质，DAB显色时间需根据染色效果调整，以获得理想对比度。
10. 图像分析：使用OSIRIS/GSA Image Analyser等软件进行定量分析，如IHC Profiler插件，可以自动化评估免疫组化图片的染色结果。
通过这些细致的操作，IHC实验的每个步骤都需精心把控，以确保实验结果的可靠性和精确性。
免疫组化实验操作要点,新手快速入门必看!
4. 脱蜡至水：Step1:二甲苯(7min)；Step2:二甲苯(7min)；Step3:二甲苯(7min)；Step4:100%酒精(7min)；Step5:85%酒精(7min)；Step6:70%酒精(7min)；注：具体脱蜡时间可结合室温做调整，以组织上的石蜡脱干净为准。5. 灭活：一般组织使用3%H2O2室温孵育10min；显色系统为过氧化物酶(HRP)...
请专家帮忙看看这份组织病理学检查与诊断报告单
你最应该的是找一个你信得过的医师，带着患者，病理单（必要时免疫组化），术前CT。肿瘤的治疗和患者的体质、耐受也有关系的，20岁的人和80岁的人不会一样的。从病理单上看能确定的：1.恶性肿瘤；2.存在局部淋巴结转移。是否存在远端转移呢？全面的影像学检查是pet-ct，价格在一万以上，条件好...
解忧小工具|保姆式教程!用Image J进行免疫组化分析(IHC score评分)_百...
然后再次点击Plugins的IHC Profiler Macro（Plugins → IHC Profiler Macro），即可得到结果：由结果可得，该IHC图的细胞核染色强度评分为阴性，计0分。第二步：计算阳性细胞百分比（以上述细胞质染色的IHC图为例进行后续操作）。打开图片，并将图片格式转换为RGB Stack（Image →type→RGB Stack）：将进度...
免疫组化注意事项?
做免疫组化前需要注意的方面：1、抗原有无丢失主要看组织切片的新鲜程度，一般切片室温保存超过3-6个月，可能切片内的抗原丢失很严重，此时可以通过重新用石蜡块切片来进一步验证（蜡块需要低温保存）。2、石蜡切片在制作过程中可能因醛基对抗原决定族的封闭，这需要通过抗原修复来充分暴露，从而增加抗原抗...
免疫组化原理
、间接法（二步法）、桥联法（多步法）等，用于标记的抗体可以是用免疫动物制备的多克隆抗体或特异性单克隆抗体，最好是特异性强的高效价的单克隆抗体。直接法是将酶直接标记在第一抗体上，间接法是将酶标记在第二抗体上，检测组织细胞内的特定抗原物质。目前通常选用免疫酶组化间接染色法。
免疫细胞化学技术的概述
免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。· 具有特异性...
求助HE染色和免疫组化
3、免疫组织化学染色SP法1)脱蜡、水化;2)PBS洗2～3次各5分钟;3)3%H2O2(80%甲醇)滴加在TMA上,室温静置10分钟;4)PBS洗2～3次各5分钟;5)抗原修复;6)PBS洗2～3次各5分钟;7)滴加正常山羊血清封闭液,室温20分钟。甩去多余液体。8)滴加Ⅰ抗50μl,室温静置1小时或者4℃过夜或者37℃1小时。9)4℃过夜后...
免疫组化技术的标准化质控管理
免疫组化检测的切片厚以3～4 μm为宜，淋巴结组织可行2 μm厚切片，太厚影响染色结果和诊断。因免疫组化反应步骤多，易出现脱片现象，需要将载 玻 片处理后方可使用。处理方法：先将载 玻 片用肥皂水洗净后，放入清洁液中浸泡12～24 h，清水冲洗2 h，蒸馏水洗5遍，体积分数0.95乙醇浸泡后，...
急切求解WB,IHC的意思!
帮助的人:0 我也去答题访问个人页 关注 展开全部 免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)和免疫印迹法(western blotting.WB). 免疫组化是利用抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的...
免疫组化和westernblot有什么区别
1、原理不同：免疫组化利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。westernblot也是利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的...
敏春五灵： 简写是 IHC,做石蜡切片的是 IHC-P
庐江县13741277633： 免疫组织化学的全过程包括哪些步骤 - ？
敏春五灵： 免疫组织化学的全过程包括哪些步骤 免疫组织化学的全过程包括:1.抗原的提取与纯化;2.免疫动物或细胞融合,制备特异性抗体(免疫球蛋白)以及抗体的纯化;3.将显色剂与抗体结合形成标记抗体
庐江县13741277633： 什么是免疫组织化学 - ？
敏春五灵： 免疫组织化学(immunohistochemistry)又称免疫细胞化学,是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术.它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来,借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用,在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等). 免疫组化技术近年来得到迅速发展.50年代还仅限于免疫荧光技术,50年代以后逐渐发展建立起高度敏感,且更为实用的免疫酶技术.
庐江县13741277633： 医学代词IHC - ？
敏春五灵： IHC: 免疫组化;免疫组织化学;染色;免疫组织化学法免疫组化
