免疫组化原理
抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的，因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来，以其达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性，定位或定量的研究。
免疫组化技术是一种综合定性、定位和定量；形态、机能和代谢密切结合为一体的研究和检测技术。在原位检测出病原的同时，还能观察到组织病变与该病原的关系，确认受染细胞类型，从而有助于了解疾病的发病机理和病理过程。免疫酶组化技术是通过共价键将酶连接在抗体上，制成酶标抗体，再借酶对底物的特异催化作用，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，于普通显微镜或电镜下进行细胞表面及细胞内各种抗原成分的定位，根据酶标记的部位可将其分为直接法（一步法）、间接法（二步法）、桥联法（多步法）等，用于标记的抗体可以是用免疫动物制备的多克隆抗体或特异性单克隆抗体，最好是特异性强的高效价的单克隆抗体。直接法是将酶直接标记在第一抗体上，间接法是将酶标记在第二抗体上，检测组织细胞内的特定抗原物质。目前通常选用免疫酶组化间接染色法。
（一）、仪器设备
1）18cm不锈钢高压锅或电炉或医用微波炉；2）水浴锅
（二）、试剂
1）PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L，KH2PO4 1.4mmol/L.
2）0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0，1000ml）：柠檬酸三钠 3g，柠檬酸 0.4g.
3）0.5mol/L EDTA缓冲液（pH8.0）：700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O，用10 mmol/L NaOH调至pH8.0，加水至1000ml.
4）1mol/L的TBS缓冲液（pH8.0）：在800ml水中溶解121gTris碱，用1N的HCl调至pH8.0，加水至1000ml.
5）酶消化液： a、0.1%胰蛋白酶液：用0.1%CaCl2（pH7.8） 配制。 b、0.4%胃蛋白酶液：用0.1N的HCl配制。
6）3%甲醇-H2O2溶液：用30%H2O2和80%甲醇溶液配制。
7）封裱剂：
a、甘油和0.5mmol/L碳酸盐缓冲液（pH9.0～9.5）等量混合；
b、油和TBS（或PBS）配制。
8）TBS/PBS pH9.0～9.5，适用于荧光显微镜标本；pH7.0～7.4适合于光学显微镜标本。
（三）、操作流程
1、脱蜡和水化
脱蜡前，应将组织芯片在室温中放置60分钟或60℃恒温箱中烘烤20分钟。
1）组织芯片置于二甲苯中浸泡10分钟，更换二甲苯后再浸泡10分钟；
2）无水乙醇中浸泡5分钟；
3）95%乙醇中浸泡5分钟；
4）70%乙醇中浸泡5分钟；
2、抗原修复
用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片。
1）抗原热修复
（1）高压热修复 在沸水中加入EDTA（pH8.0）或0.01M枸橼酸钠缓冲溶液（pH6.0）。盖上不锈钢高压锅的盖子，但不进行锁定。将玻片置于金属染色架上，缓慢加压，使玻片在缓冲液中浸泡5分钟，然后将盖子锁定，小阀门将会升起来。10分钟后，去除热源，置入凉水中，当小阀门沉下去后打开盖子。本方法适用于较难检测或核抗原的抗原修复。
（2）煮沸热修复 电炉或者水浴锅加热0.01M枸橼酸钠缓冲溶液（pH6.0）至95℃左右，放入组织芯片加热10~15分钟。
（3）微波热修复 在微波炉里加热0.01M枸橼酸钠缓冲溶液（pH6.0）至沸腾后将组织芯片放入，断电，间隔5~10分钟，反复1-2次。适用的抗原有：AR，Bax，Bcl-2，C-fos，X-jun，C-kit，C-myc，E-cadherin，Chromogranin A，Cyclin，ER，Heat shock protein，HPV，Ki-67，MDMZ，p53，p34，p16，p15，P-glycoprotein，PKC，PR，PCNA，ras，Rb，TopoismeraseⅡ等。
2）酶消化方法 常用0.1%胰蛋白酶和0.4%胃蛋白酶液。胰蛋白酶使用前预热至37℃，切片也预热至37℃，消化时间约为5~30分钟；胃蛋白酶消化37℃时间为30分钟。适用于被固定遮避的抗原，其中有：Collagen，Complement，Cytokeratin，C-erB-2，GFAP，LCA，LN等。
3、免疫组织化学染色
SP法
1）脱蜡、水化；
2）PBS洗2～3次各5分钟；
3）3%H2O2（80%甲醇）滴加在TMA上，室温静置10分钟；
4）PBS洗2～3次各5分钟； 5）抗原修复；
6）PBS洗2～3次各5分钟；
7）滴加正常山羊血清封闭液，室温20分钟。甩去多余液体。
8）滴加Ⅰ抗50μl，室温静置1小时或者4℃过夜或者37℃1小时。
9）4℃过夜后需在37℃复温45分钟。
10）PBS洗3次各5分钟；
11）滴加Ⅱ抗40～50μl，室温静置，或37℃1小时；
12）II抗中可加入0.05%的tween-20.
13）PBS洗3次各5分钟；
14）DAB显色5～10分钟，在显微镜下掌握染色程度；
15）PBS或自来水冲洗10分钟；
16）苏木精复染2分钟，盐酸酒精分化；
17）自来水冲洗10～15分钟；
18）脱水、透明、封片、镜检。
SABC法
1）脱蜡、水化。
2）PBS洗两次各5分钟。
3）用蒸馏水或PBS配置新鲜的3%H2O2，室温封闭5～10分钟，蒸馏水洗3次。
4）抗原修复。
5）PBS洗5分钟。
6）滴加正常山羊血清封闭液，室温20分钟。甩去多余液体。
7）滴加Ⅰ抗，室温1小时或者4℃过夜或者37℃1小时（4℃过夜后在37℃复温45分钟）。
8）PBS洗三次每次2分钟。
9）滴加生物素化二抗，20℃～37℃20分钟。
10）PBC洗3次每次2分钟。
11）滴加试剂SABC，20℃～37℃20分钟。
12）PBS洗4次每次5分钟。
13）DAB显色：DAB显色试剂盒或者自配显色剂显色（镜下掌握显色程度）。
14）蒸馏水洗。苏木素复染2分钟、盐酸酒精分化。
15）脱水、透明、封片、镜检。
为什么要做免疫组化 探究免疫组化在医学领域的重要性?
2.免疫疾病 二、药物研发 免疫组化是一种检测技术，利用抗体与特定抗原结合的原理，对组织或细胞中的特定蛋白进行定位和鉴定。在医学领域中，免疫组化技术广泛应用于疾病的诊断和治疗。本文将探究免疫组化在医学领域中的重要性。免疫组化是一种检测技术，利用抗体与特定抗原结合的原理，对组织或细胞中...
免疫组化的分类
免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自显影法等。这些常用免疫组织化学方法的原理如下：1. 免疫荧光细胞化学技术将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察.当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后...
“免疫组化CD20”是什么意思?
（2）治疗上的意思是：可以应用抗CD20单克隆抗体治疗。2、“CD20”的定义：白细胞分化抗原重要分布在B细胞中，免疫组化检测时前B细胞后期和浆细胞之前的B细胞呈阳性。因此在恶性淋巴瘤尤其是T细胞或B细胞淋巴瘤的分类上，CD20是最常用的B细胞标记。3、免疫组化的定义是：是应用免疫学基本原理——抗原...
活检后为什么免疫组化
免疫组化，是运用医学免疫学基本基本原理——抗原和抗体反映，即抗原体与抗原特异性融合的基本原理，根据化学变化使标识抗原的显色剂(荧光素、酶、金属离子、放射性核素)着色来明确组织体细胞内抗原体(活性多肽和蛋白)，对其开展精准定位、判定及相对性定量分析的科学研究，称之为免疫力组织有机化学技术性...
免疫组化中,一抗、二抗的制备方法?原理?
ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来，发展十分迅速，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。(一) 原理 ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、牵9体的特异性反应与酶...
免疫组织化学染色诊断是什么
免疫组织化学染色诊断是医学领域中一种重要的诊断方法。答案：免疫组织化学染色诊断是通过应用免疫组织化学原理及染色技术，检测细胞或组织中的特定抗原或抗体，从而对疾病进行定位、定性及鉴别诊断的一种技术。详细解释：1. 定义与原理：免疫组织化学染色诊断是一种基于免疫组织化学原理的诊断技术。免疫组织化学...
免疫组化实验原理(Vector kit)
首先来谈一下免疫组织化学（IHC, Immunohistochemistry）、免疫细胞化学（ICC, Immunocytochemistry）和免疫荧光(IF, immunofluorescence technic )的共通之处和区别。 平常说的 免疫组化 就是用石蜡切片做的免疫组织化学，样品是经过甲醇或甲醛固定后脱水包埋得到的...
免疫组化试剂盒的试验原理
被石蜡包埋的组织切片在二甲苯中脱去石蜡并逐级水化后，进行内源性的过氧化物酶淬灭。内源性过氧化物酶可以被甲醇或Zymed's Peroxo-Block （目录号:00-2115）中的3%的过氧化氢所抑制。说明：非免疫血清用来去除非特异性背景。孵育一抗后，加入二抗，再经过一步冲洗，加入链霉亲和素过氧化物酶藕联物...
免疫组化费要19800元吗
不要。根据查询山东省立医院官网显示，免疫组化需要4500元到5000元，不需要要花费19800这么多。免疫组化又称免疫组织化学染色，原理就是抗原抗体结合，再用显色剂显色，因为不同部位组织有特定的抗体，这样可以对病理作出更加明确的诊断。
免疫组化的解释 请教专家 急!急!急!
免疫组化的原理就是通过一些标记物找出肿瘤中表达而正常组织不会表达的蛋白质类物质。你上面所列的P63(+)、Ck8\/18(+)就是p16和ck8两种免疫标记蛋白阳性，在送检的标本中有表达，D2-40(-)、Calretinin(-)、CgA(-)、Syn(-)就是阴性不表达，Ki-67(+10%)小部分表达。
照洋膜固： 免疫组化是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的方法.免疫组化方法有直接法和间接法;按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自影法等.
墨玉县17648063482： 什么叫免疫组化 - ？
照洋膜固： 是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry).
墨玉县17648063482： 什么是免疫组化染色,它的原理和步骤是什么?请尽量的准备和详细一点, - ？
照洋膜固：[答案] 这个网页 专门介绍 它的原理和步骤的,很详细,看看吧! 这个网页 是 关于 免疫组化的 相关知识,很全.
