如何从血清中提取RNA

血清RNA提取实验前，血清如何保存？~

这里有个文献，不要抗凝
http://clincancerres.aacrjournals.org/content/5/8/1961.full

红细胞破裂将其中的mRNA,tRNA,rRNA释放出来，所以血清中有RNA

血液（全血，也就医学上说的外周血）中RNA的含量很低，1ml一般在3ug左右（1-7ug）。一般是处理抗凝血液。
像以上全血的RNA提取有两种思路：
1）直接处理抗凝的全血，即加入如Trizol的裂解液直接往下做。此方法有个缺点：处理的体积血液体积有限，一般1ml Trizol处理100ul血液，最多不超过200ul.
2) 先去除血液中的红细胞分离出其中的白细胞（即淋巴细胞），然后提取白细胞的RNA。此方法的缺点：只能提取得到淋巴细胞的RNA，血液中游离的如病毒RNA无法提得。

血清RNA提取，biog的具体操作步骤如下：

1. 请自行准备：无水乙醇、无RNA酶1.5mL离心管。2. 取出洗涤液，按以下操作：a) 洗涤液A：21mL加入9mL无水乙醇；35mL加入15mL无水乙醇；42mL加入18mL无水乙醇。b) 洗涤液B：9mL加入21mL无水乙醇；15mL加入35mL无水乙醇；18mL加入42mL无水乙醇。c) 配制好的洗涤液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。3. 取无RNA酶的1.5mL离心管，加入200μL样本，4μLRNA Carrier混合均匀，再加入300μL 裂解液及20μL 消化液，漩涡震荡10秒，充分混匀，56℃水浴10 分钟至完全裂解。4. 加入1000μL无水乙醇，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响RNA的提取与后续实验。5. 将吸附柱放入收集管内，将760μL上述溶液转入吸附柱内，静置2 分钟，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液.6. 将剩余760μL溶液转移至吸附柱内，重复步骤5。7. 将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液A至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。8. 将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液B至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。9. 将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 4℃离心2 分钟，离去残留的洗涤液。10. 取出吸附柱，放入新的无RNA酶的1.5 mL 离心管内，加入30-50μL 洗脱液，静置3 分钟，12,000 rpm 4℃ 离心2 分钟，收集RNA溶液。11. -70℃保存，或直接用于下一步实验。

现在我们做实验大多不用繁琐的手提方法了，BIOG cfDNA Easy Kit可以用于提取血清中的RNA

我的实验是从血清中提取microRNA, 用过biog的，结果还可以。

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西安市17860655679： 怎样用TRIzol 法提取动物血清总RNA - ？
进柏瑞白： 1、将组织在液氮中磨成粉末后,再以50-100mg组织加入1ml的Trizol液研磨;每2E6个细胞加入1mLTrizol.注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%.2、研磨液室温放置5min,然后以每1ml Trizol液加入0.2ml的比例加入氯仿,盖紧离心管...

西安市17860655679： 如何提取血RNA - ？
进柏瑞白： 都应该是可以的.不过提取RNA一般都用kit(试剂盒),RNA和DNA不一样,杂质多,易降解,所以基本上不用自己配的溶液提. 虽然我个人没有做过,但是全血和血清中提取RNA都是可以的,只是用的trizol和提取组织细胞中的不一样. 你尝试搜索一下Trizol LS,看看是不是你需要的.

西安市17860655679： trizol法提取血中的RNA,怎样做量会更多 - ？
进柏瑞白： 或再适当延长一点时间.迅速离心,少加些血.混匀之后放置10分钟左右,混匀再去离心. 可以不用先离心去沉淀之后再加三氯甲烷1 血要新鲜,之后加75%乙醇.只洗一遍. 3 每个步骤操作要快,用的时间药短些,防止降解 4 异丙醇沉淀的时候,放-20°C的冰箱半个小时.一般我都加的30.如果需要浓度高点可以少加水. 6 提取RNA之后迅速反转录成cDNA再保存,洗2遍易损失部分RNA.如果是冻存的,在解冻时要完全,之后再加Trizol. 2 可以稍多加一些Trizol,直接加三氯甲烷.干燥一会就迅速加DEPC水少量. 5 不要过分干燥,管内稍有点残余的乙醇也没关系

西安市17860655679： 如何选择最佳的全血DNA,RNA提取方法 - ？
进柏瑞白： 如何选择最佳的全血DNA、RNA提取方法?从全血中提取DNA和RNA应该说是最基本的工作了,提取的DNA和RNA质量的好坏直接影响了下游的实验和分析,可供选择的方法非常多,乱花渐欲迷人眼,如何选择最适合的方法,成了很多人实验...

西安市17860655679： 请教血清中提取RNA - ？
进柏瑞白：[答案] 血清中是可以提取RNA的

西安市17860655679： 从全血里提取RNA的方法? - ？
进柏瑞白： 10月13日 13:35 RNAgents总RNA提取系统 1)Promega有哪些系统用于提取总RNA及poly(A)+RNA? 2)RNAgents®总RNA提取系统的工作原理怎样? 3)RNAgents®总RNA提取系统的一般得率是多少? 4)RNAgents®总RNA提取系统的各组分的...

西安市17860655679： 如何从血液中提取mirna？
进柏瑞白： 全血提取我用过百泰克的,提取的效果比较好,最终纯度也还不错.大概1ml全血最多能提出来8ug吧,已经比一般传统方法3~7ug要好的多. 血清血浆就推荐QIAgen的试剂盒217004,小量提取试剂盒,每个纯化柱只能提200ul,最终出来的量一般是150ng~300ng(正常人的都很少,有炎症或癌变人的血清血浆miRNA会更多). 另外,这样出来的都是total RNA,只不过是其中保留下了小分子的miRNA,如果要分离miRNA,还需要别的手段,例如PEG分离法,专门试剂盒分离.实际实验中,很多都只需要total RNA起始即可.

西安市17860655679： Trizol法提取流感病毒 RNA - ？
进柏瑞白： 1、取200ul样品数+阴性对照+阳性对照加入1.5ml灭菌eppendorf管;2、加600ul异硫氰酸胍,然后加入对照和样品,再加200ul氯仿,颠倒混匀;3、13000rpm离心15min;4、在第3步离心快结束时,另取同样多eppendorf管,加入400ul于-20℃...

西安市17860655679： RNA提取方法有哪些 ？
进柏瑞白： RNAgents总RNA提取系统 1)Promega有哪些系统用于提取总RNA及poly(A)+RNA? 2)RNAgents®总RNA提取系统的工作原理怎样? 3)RNAgents®总RNA提取系统的一般...

西安市17860655679： 提取RNA的血清如何冻存 - ？
进柏瑞白：[答案] 、组织样品采集 1. 首先准备好用于包装样品的铝箔或冷冻保存管,并且用油性记号笔在铝箔或冻存管外表多处写明样品编... 白细胞便能有效地保存在RNAlater 中.不要将全血、血浆或血清中的RNA 保存在RNAlater 中,因为它们蛋白含量过高,与...