冈崎片段试验检测
冈崎片段实验通过两种不同的方法，揭示了DNA复制的独特机制。首先，脉冲标记实验采用E.coli为材料，通过在培养基中加入同位素[3H]标记的dTTP，观察新合成的DNA片段大小。结果显示，新合成的冈崎片段（Okazaki fragment）长度约为1000~2000核苷酸（Nt），而模板链则大20~50倍。沉淀系数为20S，这表明它们是长片段。而脉冲追逐实验则关注早期合成片段的后续变化，发现标记的DNA片段不再维持短片段状态，而是与总DNA的长片段相似，其沉淀系数为70S~120S，显示片段连接过程。
冈崎片段实验揭示了“不连续复制”现象，即DNA复制时，无论是前导链还是后滞链，都先形成小片段。然而，实验结果与理论预测不符，因为理论上只有一半标记应存在于小片段中，但实际上所有片段都含有标记。Olivera提出的半不连续复制模型解释了这一现象：前导链连续复制，而后滞链半连续复制。这是因为DNApolⅢ无法区分dTTP和dUTP，导致dUTP掺入形成A·U对，但E.coli细胞内的dUTPase和尿嘧啶N-糖苷酶能确保U的正确处理，避免其混入DNA。
实验数据支持这一理论：在dUTPase缺失的突变体中，冈崎片段更短，因为U掺入增多；在尿嘧啶N-糖苷酶缺失的突变体中，新合成DNA有一半由片段组成，表明其作用于清除混入的U。而在dut-和ung-双突变体中，DNA的半不连续复制特性更为明显，这进一步证实了上述机制。真核生物的冈崎片段成熟机制更为复杂，涉及多种蛋白质如Polδ、RNaseHI、FEN1、Dna2和DNA连接酶，通过精确的加工和连接，确保基因组的稳定性。
扩展资料
冈崎片段，相对比较短的DNA链（大约1000核苷酸残基），是在DNA的滞后链的不连续合成期间生成的片段，这是ReijiOkazaki在DNA合成实验中添加放射性的脱氧核苷酸前体观察到的。
冈崎片段试验检测
首先，脉冲标记实验采用E.coli为材料，通过在培养基中加入同位素[3H]标记的dTTP，观察新合成的DNA片段大小。结果显示，新合成的冈崎片段（Okazaki fragment）长度约为1000~2000核苷酸（Nt），而模板链则大20~50倍。沉淀系数为20S，这表明它们是长片段。而脉冲追逐实验则关注早期合成片段的后续变化，发现标...
冈崎片段的试验检测
是依然如旧的短片段，还是连接成了长片段。这个实验是先进行标记培养30秒，以后除去同位素继续培养几分钟，再分离DNA在碱中沉淀，检测结果。先合成的（带标记）的DNA不再是短片段，而和总DNA的情况相似，沉淀系数为70S~120S较长的片段，这意味着刚开始合成的片段都是短片段，以后再连接成长片段，人们就...
生物化学问题(高手或者老师进)
experiment）。冈崎利用T4噬菌体侵染E.coli(t-)菌株，并分别用dTTP(3H-T)进行2’’，7’’,15’’,30’’,60’’,120’’的脉冲标记，分离提取T4噬菌体DNA，变性后，进行Cscl密度梯度离心，以检测具放射性的沉降片断，判断片断大小。结果表明经不同标记时间的，被3H-T标记的新合成的DNA片段几乎...
证明DNA复制为半保留复制的细菌实验结果,是什么
标记是用同位素标记的，由于同位素有放射性，所以很容易被检测到。我们现在是已知半保留复制，而在当时只是一种猜想。用普通大肠杆菌啊无法检测复制行为的。但是用标记链就清晰多了，1代以后标记链占1\/2,2代2\/8,3代2\/16...以此类推，说明这两条分开并且被保留，这样就推翻了全保留复制、解体复制等...
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仅分子生物学阳性病人分类怎么写?
5、分子杂交的试验流程以及分类样品及探针制备--样品电泳分离---转膜---预杂交---杂交---洗膜---分析(压片、显色、荧光观察等)分类: Southern blot , Northern blot,Western blot,ISH, FISH6、简述DNA足迹试验的原理与应用 DNA结合蛋白结合在DNA片段上,能保护结合部位不被DNase破坏,DNA分子经酶切作用后遗留下...
分子生物学问答题总结
6、简述DNA足迹试验的原理与应用 DNA结合蛋白结合在DNA片段上,能保护结合部位不被DNase破坏,DNA分子经酶切作用后遗留下该片段(亦称“足迹”),进而可以确定它的序列。在电泳凝胶的放射性自显影图片上,相应于蛋白质结合的部位没有放射性标记条带 7、简述凝胶阻滞试验的原理 原理:蛋白质与DNA结合后分子质量将增加,在...
段干飘谷氨：[答案] 抄了一段,将就看吧. 冈崎片段(Okazaki fragment):相对比较短的DNA链(大约1000核苷酸残基),是在DNA的滞后链的不连续合成期间生成的片段,这是Reiji Okazaki在DNA合成实验中添加放射性的脱氧核苷酸前体观察到的. DNA复制过程中,...
八宿县18918871237： 冈崎片段的介绍 - ？
段干飘谷氨： 冈崎片段,相对比较短的DNA链(大约1000核苷酸残基),是在DNA的后随链的不连续合成期间生成的片段,这是Reiji Okazaki在DNA合成实验中添加放射性的脱氧核苷酸前体观察到的.
八宿县18918871237： 什么是冈崎片段? - ？
段干飘谷氨：[答案] 冈崎片段:相对比较短的DNA链(大约1000核苷酸残基),是在DNA的滞后链的不连续合成期间生成的片段,这是Reiji Okazaki在DNA合成实验中添加放射性的脱氧核苷酸前体观察到的. 是遗传学上的名词.
八宿县18918871237： 什么是dna的半不连续复制和冈崎片段 - ？
段干飘谷氨： DNA在复制过程中,在复制叉上,新合成的DNA链有一条是由5'端往3'端连续合成的,为前导链;另一条是由5'端往3'端不连续合成的,而是先合成若干小片段,叫做冈崎片段,再经过剪切引物并拼连接形成完整的DNA链,叫做滞后链.
八宿县18918871237： 岗崎片段的生物学意义? - ？
段干飘谷氨： DNA复制过程中,2条新生链都只能从5端向3端延伸,前导链连续合成,滞后链分段合成,这些分段合成的新生DNA片段称冈崎片段,细菌冈崎片段长度1000-2000核苷酸,真核生物冈崎片段长度100-200核苷酸.在连续合成的前导链中,U-糖苷酶和AP内切酶也会在错配碱基U处切断前导链,任何一种DNA聚合酶合成方向都是从5'向3'方向延伸,而DNA模板链是反向平行的双链,这样在一条链上,DNA合成方向和复制移动方向相同(前导链),而在另一条模板上却是相反的(后滞链).所以就用到了冈崎片段.
八宿县18918871237： 冈崎片段是什么?里面的5——3和3——5指得是什么? - ？
段干飘谷氨：[答案] 冈崎片段:相对比较短的DNA链(大约1000核苷酸残基),是在DNA的滞后链的不连续合成期间生成的片段,这是Reiji Okazaki在DNA合成实验中添加放射性的脱氧核苷酸前体观察到的. DNA复制过程中,2条新生链都只能从5端...
八宿县18918871237： 生物化学科:请问什么叫冈崎片段,谢谢! - ？
段干飘谷氨： 在DNA不连续复制过程中,沿着后随链的模板链合成的新DNA片段,其长度在真核与原核生物当中存在差别,真核生物的冈崎片段长度约为100~200核苷酸残基,而原核生物的为1000~2000核苷酸残基[百度百科]
八宿县18918871237： 获得mRNA - cDNA复合体和cDNA的过程都是酶促反应,此过程为什么会形成冈崎片段呢? - ？
段干飘谷氨： 冈崎片段是DNA双链复制时,由于一条链的方向正好是5'到3',而另一条要3'到5',所以在同一个DNA聚合酶的行进方向上出现前导链和后随链,后随链由于DNA聚合酶箍钳扭转方向之后的长度有限,所以是一段一段的,称之为冈崎片段,需要用DNA连接酶来补好. 而在逆转录的过程中,逆转录酶的行进方向是单向的,理论上来说,不会形成冈崎片段.
八宿县18918871237： DNA复制过程请用生物化学方面知识说明一下DNA复制过程及步骤 - ？
段干飘谷氨：[答案] DNA复制过程 以原核生物DNA复制过程予以简要说明 1.DNA双螺旋的解旋 DNA在复制时,其双链首先解开,形成复制叉,... 延长标记时间后,冈崎片段可转变为成熟DNA链,因此这些片段必然是复制过程中的中间产物.另一个实验也证明DNA复制...
