多重pcr引物设计的原理有哪些
这个要看你准备设计多少重了，如果是做taqman定量PCR，一般也就2-4重，引物之间互相干扰比较小，如果是做毛细管电泳，那一般在5-40重，引物之间影响就比较大了
如果需要设计定量PCR引物，可以参考网页链接
我们实验室有很多人做多重PCR，其实也很简单。如果你有3对引物进行PCR，第一保证每对引物单独扩增没有问题。第二保证引物对之间的退火温度相差不大，最好在3度内。第三，引物对与引物对之间形成的引物二聚体的△G的绝对值小于5。推荐使用oligo软件设计引物，使用说明百度文库有很多。当然，如果单对引物设计还存在问题，可以看如下链接http://wenku.baidu.com/view/12389815fc4ffe473368ab58.html，里面介绍的很详细。
1、多杀性巴氏杆菌的Km t 及toxA 基因 T +Pm具有Km t 及toxA 基因 T Pm具有Km t基因 PCR引物：P1: 5′- A TC CGC TA T TTA CCC A GT GG-3′ P2: 5′-GCT GTA AAC GAA CTC GCC AC-3′ P3: 5′- CTT A GA TGA GCG ACA A GG-3′ P4: 5′- GAA TGC CAC ACC TCT A TA G-3′ 引物P1，P2检测Pm,扩增片段为457bp; 引物P3，P3检测T +Pm，扩增片段为864bp.
退火温度56℃，时间30秒
2、禽多杀性巴氏杆菌基因序列（U51470） 引物：
上游引物：5’-TGC CAA AGT TGC CAA TAC TCC-3’ 下游引物：5’-TCC CGT CCT CAT TTC TTG CG-3’
退火温度45℃，时间1分钟
3、猪巴氏杆菌
参考GenBank中猪巴氏杆菌序列设计引物
上游PAS1：5’-AgggCACgCAggCggACTTTTA-3’ 上游PAS2：5’-ATCgACAgCgTTTACAgCgTggA-3’
退火温度56.5℃，时间1分钟
4、致病性嗜水气单胞菌（ 嗜水气单胞菌标准株Ah10501）
究针对GenBank 中登录的致病性嗜水气单胞菌的溶血素基因( hlyA ) 、气溶素基因( aerA ) 以及为气单胞菌属所特有的内参照基因16S rRNA 保守区设计了3 对特异性引，非致病性分离株均未扩增出毒力基因hlyA 和aerA ,而致病性分离株则至少含有hlyA 基因
多重PCR引物设计
这个要看你准备设计多少重了，如果是做taqman定量PCR，一般也就2-4重，引物之间互相干扰比较小，如果是做毛细管电泳，那一般在5-40重，引物之间影响就比较大了 如果需要设计定量PCR引物，可以参考网页链接
PCR的引物如何设计?
1、引物长度一般为15-30bp，常用的为18-27bp，但不能大于38bp；2、引物GC含量一般为40%-60%，以45-55%为宜，上下游引物GC含量和Tm值要保持接近；3、引物所对应的模板序列的Tm值最好在72℃左右，至少要在55-80℃之间，Tm值曲线以选取72度附近为佳，5'到 3’的下降形状也有利于引物与模板的...
在pcr实验中,引物的设计一般有哪些要求
引物设计原则：长度: 18~30 bp, 20 bp左右最为常用。引物过短易导致非特异性打增；较长引物特异性强，但退火效率低，且易形成二级结构，从而导致PCR产量少。二级结构:引物二聚体及发夹结构的能值过高(大于4.5 kcal\/mol )易导致产生引物二聚体带，并且降低有效引物浓度，使PCR反应不能正常...
如何利用多重pcr扩增一条长片段
如何利用多重pcr扩增一条长片段 多重PCR(multiplex PCR)，又称多重引物PCR或复合PCR，它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物，同时扩增出多个核酸片段的PCR反应，其反应原理，反应试剂和操作过程与一般PCR相同。一般PCR仅应用一对引物，通过PCR扩增产生一个核酸片段，主要用于单一致病因子等的鉴定。设...
多重巢式pcr需要设计几对引物
两对。多重巢式PCR是指利用两套PCR引物对进行两轮PCR扩增反应，是需要设计两对引物的。引物是指在核苷酸聚合作用起始时，刺激合成的具有特定核苷酸序列的大分子。
pcr引物的设计原理是什么?有什么要注意的?
1、引物的长度一般为15-30 bp，常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA聚合酶进行反应。2、 引物序列在模板内应当没有相似性较高，尤其是3’端相似性较高的序列，否则容易导致错配。引物3’端出现3个以上的连续碱基，如...
关于PCR和引物设计的几个困惑
1、PCR引物设计是否要选择保守区要看你的目的，如果你是要克隆一个未知的基因，那必须要在保守区设计，否则很可能扩不出来，如果仅仅是普通的测序，就没有那么严格，此外，有的人扩的是DNA，有的人扩的是cDNA,在保守区设计就不用重新设计了。2、引物与模板最多可以有3~4不一致的点，有时我为了...
PCR引物设计方法和原理
1、pcr中引物的作用是作为DNA复制开始时DNA聚合酶的结合位点，在细胞外的条件下，只有通过引物，DNA才可以开始进行复制。2、PCR的技术的主要步骤：DNA变性：（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA。退火：（60℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。3、...
PCR引物设计的原则是什么?
引物设计是决定PCR反应成败的最重要因素。引物设计有两个主要考虑因素：特异性和扩增效率。特异性是由错配的频率决定的，特异性差的引物易产生错误的扩增产物。扩增效率是指引物以每循环增加两倍扩增产物达到理论最优的能力。遵循原则如下：1. 引物长度：引物的最佳长度为24或25个碱基左右。但是如果需要调整...
pcr扩增的引物怎么设计
PCR扩增的引物设计需要遵循一定的原则，包括引物长度、GC含量、退火温度、特异性以及避免引物二聚体和发夹结构的形成。PCR（聚合酶链式反应）是一种在体外快速扩增特定DNA片段的技术，而引物是PCR反应中不可或缺的组成部分。引物的设计直接影响到PCR的效率和特异性。以下是设计PCR引物时需要考虑的关键因素：...
尔姚藻酸： 1、多杀性巴氏杆菌的Km t 及toxA 基因 T +Pm具有Km t 及toxA 基因 T Pm具有Km t基因 PCR引物: P1: 5′- A TC CGC TA T TTA CCC A GT GG-3′ P2: 5′-GCT GTA AAC GAA CTC GCC AC-3′ P3: 5′- CTT A GA TGA GCG ACA A GG-3′ P4: ...
省直辖行政单位18951938721： 重叠PCR的原理 - ？
尔姚藻酸： 重叠延伸PCR技术(gene splicing by overlap extension PCR,简称SOE PCR)由于采用具有互补末端的引物,使PCR产物形成了重叠链,从而在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸,将不同来源的扩增片段重叠拼接起来.此技术利用PCR技术能够在体外进行有效的基因重组,而且不需要内切酶消化和连接酶处理,可利用这一技术很快获得其它依靠限制性内切酶消化的方法难以得到的产物.重叠延伸PCR技术成功的关键是重叠互补引物的设计.重叠延伸PCR在基因的定点突变、融合基因的构建、长片段基因的合成、基因敲除以及目的基因的扩增等方面有其广泛而独特的应用.
省直辖行政单位18951938721： PCR的原理是什么 - ？
尔姚藻酸：[答案] 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术.它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点;能在一个试管内将所要研究 的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至...
省直辖行政单位18951938721： 什么是三重PCR - ？
尔姚藻酸： 一般PCR仅应用一对引物,通过PCR扩增产生一个核酸片段,主要用于单一致病因子等的鉴定.多重PCR(multiplex PCR),又称多重引物PCR或复合PCR,它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物,同时扩增出多个核酸片段的PCR反应,其反应原理,反应试剂和操作过程与一般PCR相同.三重PCR就是用了三对PCR引物.
省直辖行政单位18951938721： 在进行PCR实验扩增时如何设计引物?为什么要用引物?原理是什么? - ？
尔姚藻酸： ATCG......原理就是体外环境模仿人体内环境,完成人体内的DNA复制,大概就这样.
省直辖行政单位18951938721： pcr技术扩增 - ？
尔姚藻酸： PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95度时解旋,55度时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至72度左右DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链.由PCR技术制造的PCR仪实际就是一个温控设备,能...
省直辖行政单位18951938721： PCR的原理是什么? - ？
尔姚藻酸： PCR技术基本原理 PCR技术的基本原理 类似于DNA的 天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物.PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加 热至93℃左右一定时间后,使模板...
省直辖行政单位18951938721： PCR技术原理是怎样的?经典点 - ？
尔姚藻酸： PCR技术原理:以合成的两条已知序列的寡核苷酸为引物,在DNA聚合酶作用下,利用dNTP为原料,将位于两引物之间的特定DNA片段进行复制.这样经过变性、退火、延伸一个循环,每一个循环的产物作为下一个循环的模板,如此循环30次.每完成一个循环需2~4分钟,2~3h就能将带扩目的基因扩增放大几百万倍.
省直辖行政单位18951938721： PCR的原理是什么,它有什么用途? - ？
尔姚藻酸： PCR技术必须有人工合成的合理引物和提取的样品DNA,然后才进行自动热循环,最后进行产物鉴定与分析.引物设计与合成目前只能在少数技术力量较强的研究院、所进行,临床应用只需购买PCR检测试剂盒就可开展工作,PCR自动热循环...
省直辖行政单位18951938721： PCR技术原理是什么? - ？
尔姚藻酸： 原发布者:yqjklhq 一.简述PCR基本原理?PCR技术的基本原理 类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物.PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右...
