如何利用多重pcr扩增一条长片段
荧光定量PCR是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。|||原理不同：荧光定量pcr实时监测与dna结合的荧光染料激发的荧光；普通pcr通过检测插入dna中核算染料的量来测定pcr最终产物量，一般是紫外光。反应要求：荧光定量对扩增片段有较高的要求，一般为100-300bp；普通定量可以扩增长点的片段。如果不需要检测产物分子量大小，荧光定量可以不进行电泳就对产物进行定量分析，普通pcr必须电泳。结果：荧光定量可以实现精确定量，普通pcr则不行。荧光定量体现可以看到整个扩增过程，可以看到扩增效率，溶解温度，直接得到的标准曲线等，这些是普通pcr无法实现的。|||这个还真不大清楚|||貌似前者是定量，后者属于半定量。|||简单的讲PCR技术最早是用于扩增一段特异的PCR片段，用于克隆、测序等实验，后来也将其用于样本中特异的PCR片段有无或非很粗的相对定量，而荧光定量PCR技术则是为了测定样本中特异的PCR片段相对及绝对量，是一种测定特异的PCR片段含量的方式。如测定病人样本中病原体的含量、实验样本中某一特定的mRNA的含量等。前些年有人讲过普通PCR后，通过电泳也可以进行定量，其实是将PCR产物的定量与PCR样本中模板定量相混了。近两年没有人再讲这类的话了。|||引物设计是sybr定量PCR法的最大难点，机会好的话，设计一对引物就能得到很好的结果，机会不好的话7、8对引物也出不来，我就遇到过这样的问题，我在prime5.0上设计了8对引物，符合实验要求的一对也没有，我把退火温度提高到了68度也没能把引物二聚体搞定，后来我想通了，可能我这对引物把其它序列扩增出来了，而且扩增效率很高（我一个同学设计了十几对才找到一对好用的）。记住primer5.0设计出来的100%好的引物，到了定量PCR上不一定好使，这是我最大的经验。定量pCR的引物对匹配度要求不高，我现在使用的引物就有几个碱基不匹配，但实验结果很好。有一个办法可以帮助我们绕过引物设计这道坎，直接到罗氏网站上专区上找引物。罗氏网站在线有一个引物设计软件，你只要找好你目的基因的种属，输入你的片段序列就可以得到你要的引物。这个软件有很大的好处，他会自动地把你的种属序列背景扣除，最大限度地去除引物二聚体产生的可以。
可以.
如想要扩增n个片段,只要模板上存在,无论引物是否一样,都会扩增出n个条带（长度各不不同）.
在引物不同情况下那叫做多重PCR（multiple PCR）,一般比较难做,条件很难优化,很难将所有条带在相同参数下扩增出来的.最主要是Tm值很难一致,延伸时间不很重要.但理论上可以.
在引物相同情况下,很容易扩增出每个条带的.
（反之,长度相同的dna片段,无论引物是否相同,都不能以其扩增,因为你用电泳方法分不开）
多重PCR(multiplex PCR)，又称多重引物PCR或复合PCR，它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物，同时扩增出多个核酸片段的PCR反应，其反应原理，反应试剂和操作过程与一般PCR相同。一般PCR仅应用一对引物，通过PCR扩增产生一个核酸片段，主要用于单一致病因子等的鉴定。设计引物应遵循以下原则： ①引物长度：15-30bp，常用为20bp左右。 ②引物扩增跨度：以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。 ③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。
如何利用多重pcr扩增一条长片段
如何利用多重pcr扩增一条长片段 多重PCR(multiplex PCR)，又称多重引物PCR或复合PCR，它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物，同时扩增出多个核酸片段的PCR反应，其反应原理，反应试剂和操作过程与一般PCR相同。一般PCR仅应用一对引物，通过PCR扩增产生一个核酸片段，主要用于单一致病因子等的鉴定。设...
多重PCR的应用
多重PCR的主要用于多种病原微生物的同时检测或鉴定某些病原微生物、某些遗传病及癌基因的分型鉴定。多种病原微生物的同时检测或鉴定，是在同一PCR反应管中同时加上多种病原微生物的特异性引物，进行PCR扩增.可用于同时检测多种病原体或鉴定出是那一型病原体感染，可系统组合的有:①肝炎病毒的感染，...
多重PCR概述
在常规的PCR技术中，通常使用一对引物进行反应，其目标是通过PCR扩增出单个核酸片段，主要适用于识别单一病原体的存在。然而，多重PCR（Multiplex PCR），又称多重引物PCR或复合PCR，是一种更为先进的技术。它在PCR反应体系中引入两对或更多的引物，旨在同时扩增出多个不同的核酸片段。尽管名称中包含“...
提高分子标记的筛选效率的方法有哪些
(一)多重PCR方法 为了增加标记的筛选效率，当同时筛选到与2个或2个以上目标性状连锁的几个不同的分子标记时，如果这几个分子标记的扩增产物具有不同长度，则一对以上的引物可在同一PCR条件下同时反应，这称为多重扩增。利用这种方法时需注意，设计或选择引物时，必须考虑各引物复性温度是否相匹配，且在...
多重PCR(multiple PCR)
【答案】：又称多重引物PCR或复合PCR，它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物，同时扩增出多个核酸片段。根据不同长度序列的存在与否，检测是否有某些基因片段的缺失或突变的PCR反应，其反应原理、反应试剂和操作过程与一般PCR相同。主要用于多种病原微生物的同时检测或鉴定和病原微生物、某些遗传病及...
超多重检测,技术原理拆解——多重荧光PCR加多联管拼接。
多重PCR技术在单一反应体系内使用多对引物，各对引物分别作用于不同靶标，同时扩增多个核酸片段。配以实时荧光PCR，通过设计不同探针和荧光基团，一个反应体系能识别多个靶标。然而，荧光信号重叠问题限制了多重PCR的发展。荧光基团在相近波段的发射光谱相互干扰，导致目前最大支持4～6重荧光通道。实际操作...
多重PCR应用
多重PCR技术在医学领域有着广泛的应用，主要用于同时检测和鉴定多种病原微生物，以及某些遗传病和癌基因的类型。首先，它在病原微生物的检测上展现出了强大的能力。例如，对于肝炎病毒，多重PCR可以同时检测甲、乙、丙型肝炎病毒的重叠感染，帮助医生确定感染的具体类型。在肠道疾病的诊断中，如伤寒、痢疾...
多重pcr检测是什么意思?
在多重PCR检测中，需要同时使用多对引物或多种探针，使得不同目标DNA序列能够被扩增出来。引物或探针的设计需要特异性和互补性，以保证扩增的同时还能够准确地判定所扩增的目标序列。同时，不同扩增产物的特异性检测需要采用不同的检验方法，例如聚合酶链反应、荧光探针法等。多重PCR检测的应用现状和发展...
#微观探索人体奥秘# 018 多重PCR技术
杂交捕获法虽然细致，但存在DNA损失和污染风险，多重PCR则简化了建库流程，显著缩短了时间，其中泛生子的“一步法”建库技术更是将这一优势发挥到了极致。[6]“一步法”建库技术革新了PCR建库的传统步骤，通过优化反应条件，将多个步骤整合为一次PCR反应，减少了污染风险，显著提高样本利用率。它不仅适用于...
什么叫巢式PCR
巢式PCR，也被称为多重PCR，是一种特殊的技术，它在PCR扩增过程中运用了递归的概念。传统PCR可能在第一次扩增后得到的产物浓度不足，无法满足后续实验的需求。为了解决这个问题，巢式PCR采用了一种策略：首先进行一次常规PCR，得到的产物作为下一轮扩增的模板。在第二次扩增时，会使用一种称为内引物...
贰禄天香： 根据目标基因设计出好的引物 选择高保真的PCR扩增试剂盒(一般的pfu挺好的),仪器也很重要.优化PCR反应条件
灵川县18712282548： 如何用pcr扩增基因组目的片段 - ？
贰禄天香： PCR技术的基本原理 类似于DNA的 天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物. PCR是一种体外DNA 扩增技术,是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下,依赖于DNA聚合酶的酶促合反应,将待扩增的DNA...
灵川县18712282548： 怎么PCR克隆4500bp的DNA长片段 - ？
贰禄天香： 博凌科为-为你解答:你这个情况可以使用新英格兰的Phsion高保真酶来做PCR,如果实在不行的话,分段克隆吧,针对你的目的片段设计两对到三对引物,保证这两条或者是三条目的片段中相邻的两段上有20个左右的共同序列,然后把分别克隆出来的三个条带纯化后,在同一个PCR反应体系中反应(不用引物),最终可以得到你的长目的片段
灵川县18712282548： PCR扩增的扩增物 - ？
贰禄天香： PCR扩增产物 可分为长产物片段和短产物片段两部分.短产物片段的长度严格地限定在两个引物链5'端之间,是需要扩增的特定片段.短产物片段和长产物片段是由于引物所结合的模板不一样而形成的,以一个原始模板为例,在第一个反应周...
灵川县18712282548： 定点突变pcr时为什么会扩出比目的产物长的片段 - ？
贰禄天香： 定点突变是先把突变位点设计在引物上(通常是接近引物中央),正反引物最好互补,然后通过普通pcr扩增前后两个片段,胶回收.将两个片段的回收产物混合,用重叠pcr扩增得到全长.这样就通过在中间引物上设计突变的方式达到定点突变.
灵川县18712282548： 重叠延伸PCR求助 - ？
贰禄天香： 重叠延伸PCR技术(genesplicingbyoverlapextensionPCR,简称SOEPCR)由于采用具有互补末端的引物,使PCR产物形成了重叠链,从而在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸,将不同来源的扩增片段重叠拼接起来.此技术利用PCR技术能够在体外进行有效的基因重组,而且不需要内切酶消化和连接酶处理,可利用这一技术很快获得其它依靠限制性内切酶消化的方法难以得到的产物.重叠延伸PCR技术成功的关键是重叠互补引物的设计.重叠延伸PCR在基因的定点突变、融合基因的构建、长片段基因的合成、基因敲除以及目的基因的扩增等方面有其广泛而独特的应用.
灵川县18712282548： 已通过PCR方法得到一段基因片段,如何有它获得基因全长?两种以上实验方案? - ？
贰禄天香： 先用已有的片断DNA制成相应的标记抗体,然后做分子杂交,找出基因的位置,然后将合适的引物扩增出来然后再筛选.
灵川县18712282548： PCR扩长片段扩不出来,求助大神 - ？
贰禄天香： 超过1000bp 的片段,有时候都比较难扩增,如果实验熟悉的话,主要原因就是试剂,不同试剂对长片段的扩增差别还是很大的,换个试剂试试吧 如果需要设计定量PCR引物,可以参考网页链接
灵川县18712282548： 基因扩增的基因扩增 - PCR技术 - ？
贰禄天香： 多聚酶链式反应的原理类似于DNA的天然复制过程.在待扩增的DNA片段两侧和与其两侧互补的两个寡核苷酸引物,经变性、退火和延伸若干个循环后,DNA扩增2n倍. 1.变性:加热使模板DNA在高温下(94℃)变性,双链间的氢键断裂而形...
灵川县18712282548： 定量PCR可以扩增长片段吗 - ？
贰禄天香： 荧光定量PCR是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度.|||原理不同:荧光定量pcr实时监测与dna结合的荧光染料激发...
