PCR引物设计的原则是什么？
遵循原则如下：
1. 引物长度：引物的最佳长度为24或25个碱基左右。但是如果需要调整Tm值，引物的长度可以控制在21至28个碱基之间。当扩增≥10 kb长片段时，25-35个碱基之间的引物可以提供更好的结果。引物过短，会降低产物的特异性，每增加一个核苷酸，引物特异性可以提高 4 倍。引物过长，会使退火过程不完全，与模板结合不充分，以至引起扩增产物的明显减少。
2. 引物末端： 引物3’端最后一个碱基最好为G或者C；引物 3’端应避免出现发夹结构。
3. 引物G+C：含量 引物的GC含量控制在40%-60%之间。
4. Tm值：引物额外附加序列，即与模板非互配对序列，不应参与引物 Tm 的值计算；正向引物和反向引物的Tm值相差不超过5℃为佳，Tm值调整至55℃ -65℃为佳。
5. 碱基的分布：引物 A、G、C、T整体分布要尽量均匀，避免使用GC或者AT含量高的区域；避免连续出现4个及以上的相同碱基，或者某两个核苷酸连续重复出现（例如，ACCCC或ATATATAT；引物内部或者两条引物之间避免有5个碱基以上的互补序列；两条引物的 3’端避免有3个碱基以上的互补序列。
6. 序列特异性：引物设计完毕请使用 NCBI BLAST功能检索引物特异性，以避免非特异性扩增产生。注意: PCR的产量通常取决于PCR引物的3’端，引物间形成二聚体会降低扩增效率。
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尤雯前列： 引物长度与延伸温度基本呈正比,还影响PCR的特异性. 延伸温度一般在酶活性温度附近,从而去调整引物长度. 引物长度的上限并不很重要,主要与反应效率有关.由于熵的原因,引物越短,它退火结合到靶DNA上形成供DNA聚合酶结合的稳定双链模板的速率越大.一般,如果扩增有一定程度不均一性的序列,则需要28~35个碱基长的寡核苷酸链作引物.
德宏傣族景颇族自治州18134036217： pcr的技术的主要步骤及pcr引物设计的一般原则有哪些 - ？
尤雯前列： 1、引物长度一般为15-30bp,常用的为18-27bp,但不能大于38bp;2、引物GC含量一般为40%-60%,以45-55%为宜,上下游引物GC含量和Tm值要保持接近;3、引物所对应的模板序列的Tm值最好在72℃左右,至少要在55-80℃之间,Tm值曲线以选取72度附近为佳.
德宏傣族景颇族自治州18134036217： 设计PCR引物的主要原则是什么?？
尤雯前列： 不用那么复杂 网上那都是扯淡的 主要是这么几点注意的: 1.碱基组成,GC的含量 2.引物长度 3.不能有反向重复和自身互补序列 4.Tm值 5.3端最好为G或C等等 设计时最好用软件弄一下 不用面面俱到 没有太大问题就行 其实相当简单
德宏傣族景颇族自治州18134036217： PCR的引物怎样设计, - ？
尤雯前列：[答案] PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列.因此,引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否. 要设计引物首先要找到DNA序列的保守区.同时应预测将要扩增的片段单链是否形成二级结构.如这个区...
德宏傣族景颇族自治州18134036217： 实时荧光定量PCR中两种引物的设计有什么要求 - ？
尤雯前列： 参照以下real-time PCR引物设计原则:1.最好位于编码区5'端的300-400bp区域内,可以用DNAman,Alignment 软件看看结果.2. 产物不能形成二级结构(自由能小于58.61KJ/mol).3.引物长度一般在17-25碱基之间,上下游引物不能相差太...
德宏傣族景颇族自治州18134036217： 请问PCR引物怎么设计 - ？
尤雯前列： 普通PCR规则: 1、18-25 bp;2、Tm值在45-60;3、2个引物之间没有超过5bp的互补序列;4、CG%在40-60%;5、避免连续出现3个以上的CCC或GGG;6、不要迷信百度.
德宏傣族景颇族自治州18134036217： 如果让你来设计一段已知dna序列的上下游引物,应该注意哪些方面 - ？
尤雯前列：[答案] 引物设计原则:1、长度:15—30bp,其有效长度[Ln=2(G十C)十(A十T)]一般不大于38,否则PCR的最适延伸温度会超过Taq酶的最佳作用温度(74度),从而降低产物的特异性.2、G十c含量:应在45%一55%之间,PCR扩增中的复性温度一...
