什么是大肠杆菌质粒载体?
大肠杆菌中提取出的质粒
因为大肠杆菌的遗传背景清楚、各项优势明显。 像最常用的大肠杆菌质粒是pBR322质粒,因为其复制是松弛型(质粒能大量的复制),具有四环素和氨青霉素抗性基因标记(便于筛选),并具有一些便于应用的限制性核酸内切酶位点。
大肠杆菌质粒载体是应用最广泛的克隆载体,含有大肠杆菌源质粒的复制起始位点,能够在转化的大肠杆菌中按质粒复制的形式进行复制。pBR322是一种常用的典型质粒载体。pBR322由大肠杆菌源质粒emphasis:role=italicColemphasis:E1衍生的质粒pMB1作为出发质粒构建而成,含有emphasis:role=italicColemphasis:E1复制起始位点(Col-ori),能在大肠杆菌细胞中高拷贝复制。
pBR322具有四环素抗性基因(emphasis:role=italictetsuperscriptrsuperscriptemphasis)和氨苄青霉素抗性基因(emphasis:role=italicampsuperscriptrsuperscriptemphasis)两种抗性,作为筛选转化子的选择标记基因。在emphasis:role=italicampsuperscriptrsuperscriptemphasis基因区有限制性内切核酸酶emphasis:role=italicPstemphasisI、emphasis:role=italicScaemphasisI和emphasis:role=italicPvuemphasisI的识别序列,在emphasis:role=italictetsuperscriptrsuperscriptemphasis基因区有限制性内切核酸酶emphasis:role=italicBamemphasisHI、emphasis:role=italicSalemphasisI、emphasis:role=italicEcoemphasisRⅤ的识别序列,以及在emphasis:role=italictetsuperscriptrsuperscriptemphasis基因的启动调控区有emphasis:role=italicClaemphasisI和emphasis:role=italicHinemphasisdⅢ的识别序列。
并且这些限制性内切核酸酶在此质粒载体上只有一个识别序列,因此均可作为克隆外源DNA片段的克隆位点。pBB322分子大小为4363bp,虽然不是很小,但足以克隆10kb以下的外源DNA片段。此质粒载体主要用于基因克隆,此外也常常作为构建新克隆载体的骨架,或取其基本元件。为了便于外源DNA片段的克隆,在载体合适的位置组装一个多克隆位点(MCS)连杆,如常用的质粒载体pUC18和pUC19(link:xlinkhref=i010502图4-4link)。pUC18和pUC19两者的差别只是多克隆位点上各种克隆位点的走向相反。
设计这样一对质粒载体,便于用两种限制性内切核酸酶酶切产生的一个DNA片段以正、反两个方向组入载体,保证DNA片段中基因的信息链与质粒载体信息链连接,进行有效的表达。
什么是大肠杆菌质粒载体?
大肠杆菌质粒载体是应用最广泛的克隆载体,含有大肠杆菌源质粒的复制起始位点,能够在转化的大肠杆菌中按质粒复制的形式进行复制。pBR322是一种常用的典型质粒载体。pBR322由大肠杆菌源质粒emphasis:role=italicColemphasis:E1衍生的质粒pMB1作为出发质粒构建而成,含有emphasis:role=italicColemphasis:E1复制...
什么是大肠杆菌质粒载体
大肠杆菌质粒载体,是科学家们巧妙地利用大肠杆菌细胞内自然存在的物质——质粒,将外源基因嵌入其中,从而形成一个极其重要的分子生物学实验载体。这里的质粒,是原核生物如细菌内的一种附加的小型DNA分子。不同于细菌的常规染色体,它独立存在并具备自主复制的能力。由于其能够独立转录和翻译基...
质粒载体有哪些
1. 原核生物质粒载体:这类载体主要来源于大肠杆菌等原核生物的质粒。它们具有自主复制的能力,并能携带外源DNA片段在受体细胞中稳定存在。这些质粒载体常被用于基因克隆和表达研究。2. 真核生物质粒载体:这类载体是从真菌、酵母或动植物细胞中分离的天然质粒构建而成。由于真核细胞表达的调控机制复杂,...
请问什么是穿梭质粒载体和表达质粒载体?
穿梭质粒是指可以在多种宿主下复制。比如说通常能够在哺乳动物,酵母或者其他细菌复制表达的质粒,同时可以在大肠杆菌内复制。这样利于对质粒的分子生物学操作和大量制备。表达质粒就是指带有启动子,增强子等等,使其在宿主体内不仅仅是可以复制,还能够通过转录翻印,在宿主内表达出相应蛋白的质粒 ...
质粒载体,噬菌体载体和cosmid质粒载体各有何优缺点
使分子量尽可能减少,以便于基因工程操作。缺点:质粒对宿主生存并不是必需的。2、噬菌体载体:插入型载体只能承受较小分子量(一般在10kb以内)的外源DNA片段的插入。3、粘粒载体:外源片段克隆在粘粒载体中是以大肠杆菌菌落的形式表现出来的,而不是噬菌斑。这样所得到的菌落的总和就构成了基因文库。
大肠杆菌-酵母穿梭质粒载体有什么特点?
穿梭质粒是指可以在多种宿主下复制。比如说通常能够在哺乳动物,酵母或者其他细菌复制表达的质粒,同时可以在大肠杆菌内复制。这样利于对质粒的分子生物学操作和大量制备。
what is plasmid pBR322?
什么是质粒载体pBR322 pBR322是一个人工构建的重要质粒,有万能质粒之称。它是由pSF2124、pMB8及pSC101三个亲本质粒经复杂的重组过程构建而成的。优点 1质粒载体pBR322的大小为4361bp,相对分子质量较小 2它带有一个复制起始位点,保证了该质粒只在大肠杆菌的细胞中行使复制的功能。3具有两种抗生素抗性...
质粒载体是染色质外的双链共价闭合环形DNA
现代分子生物学使用的质粒载体已非天然,而是人工改造的结果,根据实验需求设计出各种类型。例如,pUC19质粒是最常用的大肠杆菌克隆载体,其复制起点序列优化可引发高频率复制,每个细菌可含有500-700个拷贝。此外,它还携带抗氨芐青霉素基因,可使细菌在含有该抗生素的培养基中存活。pUC19还包含lac操纵元相关...
高中生物,第二小题那三种大肠杆菌都是什么意思?
就是有三个大肠杆菌,一个是只有含环状目的基因的大肠杆菌,一个是只有含质粒载体的目的基因,一个是含插入了目的基因的质粒载体的大肠杆菌。总而言之就是一个只有目的基因,一个只有载体而没有插入目的基因,剩下的一个则两个都有---插入了目的基因的质粒载体 ...
大肠杆菌的分子克隆载体有哪些重要的结构特征
一、质粒 常用的有pBR322,pUC系列质粒等。(一)pBR322质粒是4362bp的环状双链DNA载体,有2个抗药性基因(四环素和氨苄青霉素),一个复制起始点和多个用于克隆 的限制酶切点。当缺失抗药性基因的大肠杆菌被pBR322成功地转化时,它便从该质粒获得了抗生素抗性。两个抗生素基因中均含供插入外源DNA用的不...
通陈安禾: 质粒是小型环状DNA分子,在基因工程中作为最常用,最简单的载体,必须包括三部分:遗传标记基因,复制区,目的基因. 质粒在所有的细菌类群中都可发现,它们是独立于细菌染色体外自我复制的DNA分子.自然界中,质粒是在营养充足...
海城区17597541153: 质粒载体pBR322是什么啊? ?
通陈安禾: 质粒载体pBR322是研究得最多,使用最早且应用最广泛的大肠杆菌炙粒载体之一.符号质粒载体pBR322中的“p代表质粒;“BR”代表两位两位研究者Bolivar和Rogigerus姓氏的字首,“322”是实验编号.
海城区17597541153: 什么是载体,哪种载体最好? - ?
通陈安禾: 载体(vector) ,能载带微量物质共同参与某种化学或物理过程的常量物质,在基因工程重组DNA技术中将DNA片段(目的基因)转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子.三种最常用的载体是细菌质粒、噬菌体和动植物病毒. 实验中通常用的载体是细菌质粒
海城区17597541153: 质粒pET的p的含义是什么,ET的含义是什么. - ?
通陈安禾: p—plasmid(质粒),一般质粒载体前面都要加一个p E—E. coli (大肠埃希氏菌,通常称为大肠杆菌),为了表明这个载体是用于原核表达的. T—在这里代表T7启动子,该载体含有一个不为大肠杆菌RNA 聚合酶识别的T7 启动子用于诱导表达目的蛋白.
海城区17597541153: 质粒载体的种类有哪些啊? - ?
通陈安禾: 在基因工程中,常用人工构建的质粒作为载体.人工构建的质粒可以集多种有用的特征于一体,如含多种单一酶切位点、抗生素耐药性等.常用的人工质粒运载体有pBR322、pSC101.pBR322含有抗四环素基因(Tcr)和抗氨苄青霉素基因(...
海城区17597541153: 大肠杆菌常作为基因工程的受体细胞是由于什么? - ?
通陈安禾: 大肠杆菌常作为基因工程的受体细胞是由于繁殖速度快. 解析:大肠杆菌是细菌,属于原核生物,具有繁殖快、操作简便等优点.
海城区17597541153: 质粒有哪些特性? - ?
通陈安禾: 原发布者:张哩哩613第四章基因克隆的质粒载体在大肠杆菌的各种菌体中找到了许多种不同类型的质粒,其中已经作了比较详尽研究的主要有F质粒、R质粒和Col质粒.①F质粒又叫F因子或性质粒(sexplasmid).它们能够使寄主染色体上...
海城区17597541153: 什么是质粒? - ?
通陈安禾: 质粒是染色体外能够进行自主复制的遗传单位,包括真核生物的细胞器和细菌细胞中染色体以外的脱氧核糖核酸(DNA)分子.现在习惯上用来专指细菌、酵母菌和放线菌等生物中染色体以外的DNA分子.在基因工程中质粒常被用做基因的载...
海城区17597541153: 什么是组成型表达载体 - ?
通陈安禾: 表达载体四部分:目的基因、启动子、终止子、标记基因 常用细菌质粒进行构建,构建过程中运用限制性核酸内切酶切割出与目的基因相合的末端(多为黏性末端,也有平末端),采用DNA连接酶连接,导入生物体实现表达.标记基因可帮助...