12孔板细胞多聚甲醛固定怎么操作
2、固定：加入4%多聚甲醛(PBS配制)固定20分钟。如暂时不能立即做组化检测，使用含0.4%多聚甲醛的PBSPH7.4浸泡细胞（免疫组化检测完成前不要让细胞变干，否则细胞收缩形态不好）。
3、除去多聚甲醛，使用PBS轻洗细胞3×3min。
4、通透：0.5%TritonX-100(PBS配制)室温通透20min（细胞膜上表达的抗原省略此步骤）。
5、除去TritonX-100，使用PBS轻洗细胞3×3min。
6、内源性过氧化物酶处理：3%H2O2孵育15min（选做，必做二抗连HRP，其他的如做免疫荧光染色不用做）。
7、除去H2O2，使用PBS轻洗细胞3×3min。
8、封闭：用10%的与二抗同源的血清(PBS配制)封闭半小时。封闭结束后不要洗，直接上一抗。
9、一抗：滴加足够量适宜浓度的一抗，4℃孵育过夜（或37℃，60min）；若有两种一抗（要是不同种属的）则同时孵育，两种二抗亦同时孵育（二抗同时使用时最好是同一种属）。
10、除去一抗，使用PBS轻洗细胞3×3min。
11、二抗：滴加足够量适宜浓度的二抗，37℃，30min（从加荧光二抗起，后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行）。
12、除去二抗，使用PBS轻洗细胞3×3min。
13、二氨基联苯胺（DAB）底物显色：室温下避光孵育5至10分钟，或直至样本出现棕褐色（选作，二抗连得是酶的必做，显色时间严格控制，要避免显色过度引起假阳性；二抗连的是荧光素的不用做）。
14、除去显色工作液，使用PBS冲洗细胞3~4次。
15、复染核：0.5ug/mlDAPI（或200nMHoechst33342）避光孵育5min。
16、使用PBS轻洗细胞4×5min，洗去多余的DAPI。
17、取爬片时将注射器针头针尖向背面做个小钩，将爬片轻轻勾起，用小镊子取出。
18、用吸水纸吸干爬片上的液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，在荧光显微镜下观察并采集图像。
19、保存细胞爬片，在培养皿底放一层面巾纸，放爬片，便于实验取片。在盖子上做标记，在-20℃可保存2-3个月。
多聚甲醛固定细胞要洗吗
多聚甲醛固定细胞不需要洗。细胞爬片就是让玻片浸在细胞培养基内，细胞在玻片上生长。主要用于组织学，免疫组织化学，冰冻切片，细胞涂片，原位杂交等。可根据自己的需要，到染色时再将之切开，这样既保证了细胞均一性，又可同时做几个指标的染色剪裁成合适大小，置于6孔板、12孔板或24孔板。细胞膜 细胞...
12孔板细胞多聚甲醛固定怎么操作
12孔板细胞多聚甲醛固定的操作步骤如下：1. 去除培养基并用PBS清洗：首先，轻轻去除12孔板中的细胞培养基，然后用预冷的磷酸盐缓冲液（PBS）轻柔地清洗细胞2-3次，以去除残留的培养基和细胞代谢产物。2. 加入多聚甲醛固定液：接下来，根据实验需要，将适量体积的4%多聚甲醛溶液加入到每个孔中，确保...
12孔板细胞多聚甲醛固定怎么操作
1、在培养板中培养好细胞后，吸除培养基，使用PBS轻洗细胞2×3min，做固定（凋亡的TUNEL染色等可以不清洗）。2、固定：加入4%多聚甲醛(PBS配制)固定20分钟。如暂时不能立即做组化检测，使用含0.4%多聚甲醛的PBSPH7.4浸泡细胞（免疫组化检测完成前不要让细胞变干，否则细胞收缩形态不好）。3、除...
transwell实验原理
2、24孔板（下室）加入600ul含10%胎牛血清培养基，将小室置于24孔板中，上室加100ul无血清培养基悬浮的细胞。3、37℃培养一段时间（24h、36h、48h，若48小时后仅转移零星细胞，不建议做转移实验。）4、倒扣小室于吸水纸上，弃去小室内部培养基，用PBS冲洗小室 5、小室置于4%多聚甲醛（（24孔板...
细胞爬片酒精固定后如何保存?
博凌科为解答：一批细胞爬片,如果细胞爬 片是在玻璃上，冷丙酮固定15-20分钟，然后放-20度，没有问题。如果细胞爬片是在24孔板或6孔板里进行，冷丙酮会腐蚀板子，最好 4%多聚甲醛。只要是贴壁细胞，这些方法都可用，悬浮细胞要用甩片机或（来自战友的建议）收集细胞少许，离心 1000r\/min，5分钟；...
细胞细胞爬片中为什么用3.7%的甲醛固定细胞
2. ）多聚甲醛(常用4%)：可用于免疫电镜；也可用于免疫荧光以及TUNEL染色。主要检测组织内一些性能娇弱的抗原特别是细胞表面抗原，例如各类淋巴细胸分化决定簇(CD)、主要组织相容性抗原等室温固定15分钟后，将表面液体吹干，入-20℃保存 3.） 95％乙醇，可用于免疫组化。优点：穿透性强、抗原性保存...
做细胞DHE检测需要使用细胞爬片吗
细胞免疫荧光的详细操作步骤1，取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里，PBS洗三遍。注意有的时候作的细胞爬片可能比较小，因此夹取的时候要小心。2，4%多聚甲醛固定20分钟，PBS洗三遍。3，0.2%TritonX100通透10分钟，PBS洗三遍。4，与二抗相同宿主的血清封闭30分钟，PBS洗三遍。5.，一抗4...
平板克隆实验中途需要换液么
细胞接种：于6孔板培养板中各实验组接种400-1，000个细胞\/孔（根据细胞生长情况确定，一般为700个细胞\/孔），3。继续培养到14天或绝大多数单个克隆中细胞数大于50为止，中途每隔3天进行换液并观察细胞状态，4。克隆完成后，在显微镜下对细胞进行拍照，然后PBS洗涤1次，每孔加入1，mL，4%多聚甲醛固定...
细胞爬片如何制作?
细胞爬片就是在圆形玻璃盖玻片上铺展细胞，把盖玻片用无水乙醇脱脂，放置到12或24孔板里（按照盖玻片大小决定），紫外杀菌，多聚赖氨酸处理（帮助细胞贴壁），PBS清洗，然后正常传细胞就可以了。
细胞的克隆形成,你必须要知道的事!
3、14天后，终止培养。弃去上清液，用PBS小心浸洗2次。加多聚甲醛固定30分钟。然后去固定液，加适量结晶紫染色液染30分钟，然后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥。4、将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片，用肉眼直接计数克隆，或在显微镜(低倍镜)计数大于10个细胞的克隆数。最后计算克隆形成率。克隆...
薄夏甘贝： 单位老师统一订的晶安生物12孔板细胞爬片,拆开即用,较为方便.
玉溪市19690929817： 细胞爬片具体步骤是什么? - ？
薄夏甘贝： 单位实验室做过,小编顺便推荐一下细胞爬片是从上海晶安生物公司买的,实验效果不错. 细胞免疫荧光步骤: 1.细胞爬片;首先是玻片的处理,普通的盖玻片用砂轮划成自己要的大小的小方块,先用洗衣粉洗干净,用水冲静烤干,然后泡酸过...
玉溪市19690929817： 表面经过多聚赖氨酸处理的细胞爬片有哪些规格? - ？
薄夏甘贝： 实验室用的晶安生物多聚赖氨酸细胞爬片常用的规格:圆形(φ24mm、φ20mm、φ14mm、φ8mm).分别对应6孔板配套用细胞爬片、12孔板配套用细胞爬片、24孔板配套用细胞爬片 、48孔板配套用细胞爬片
玉溪市19690929817： 有一盘细胞,6cm盘,细胞数未知,现在要把这盘细胞的一部分接种到12孔板,要求每个孔有10000个 - ？
薄夏甘贝： 你要进行细胞计数的~~用胰酶消化好后,把细胞悬浮在1ml培养基里,吸取5微升至1ml离心管中,加入45微升提前配好的含有台盼蓝的pbs,吹打均匀,然后用20微升的枪吸10微升至细胞计数板,显微镜下计数,计数后乘以10,此时的细胞数是1ml细胞培养皿中的细胞,你在计算10000个细胞需要多少体积,计算好后加入12孔板就好~~要是有什么不清楚的还可以在问~
玉溪市19690929817： 怎样才能铺得均匀 - ？
薄夏甘贝： 做细胞生物学实验,细胞铺板大概是最常见的一个实验了.但是有很多人不是很得要领,铺得不是均匀: 要么中间密周围稀,要么周围密中间秃顶.现分享我的实验技巧.一般 96 孔板我每孔是加 100 微升细胞悬液,从孔的左边靠近底部加入...
玉溪市19690929817： 如何从孔板中取出细胞做免疫组化 - ？
薄夏甘贝： 将处理好的挂胶的玻片,冷丙酮放入4度冰箱预冷,收集细胞后,调浓度1X106/ml,每张玻片可以滴2-3滴,每滴20ul左右,56度烤箱大约5分钟烤干,拿出后用冷丙酮固定10分钟即可,此方法做悬浮细胞的免疫组化很好,不脱片
玉溪市19690929817： 96孔板的使用注意事项 - ？
薄夏甘贝： 和普通细胞培养一样,使用96孔板请注意你的细胞、培养基、用具无菌,尤其注意操作时气流方向,可能带菌的物品、手不要在上风处移动.
玉溪市19690929817： 经多聚甲醛固定的冰冻切片要做抗原修复吗? - ？
薄夏甘贝： 冰冻切片一般不需要抗原修复,石蜡切片需要抗原修复.目前进行的常规石蜡切片标本,一般均用甲醛固定.事实上经甲醛固定的部分组织细胞,免疫组化标记敏感性明显降低,其原...
玉溪市19690929817： 请教,关于lipo2000转染效率低下的原因探讨 - ？
薄夏甘贝： 脂质体的转染毒性是最大的,很明显,那么多的细胞死亡是由于转染的细胞毒性导致的.对于这一点我有两个建议,一个是减少DNA的用量,我一般做转染,对于任何细胞,只要是12孔板,一般都是用1ugDNA,这个量绝对够了.,因为质粒转...
