流式细胞术中，线性设门是啥意思
1.我把门设得紧一点，是不是就没有必要设置FMO了啊？文献中那些直接在图上画双阳性的，是不是意味着他们没有做FMO？
2.还是不太理解。从最初的门一路画下了，里面的细胞应该是确定的，反向设门应该是最下级门内细胞一直在上级门内才对啊，和非特异性染色有关吗？
望不吝赐教。
FCM数据的存贮的方式是FCS2.0（flow cytometry standard），采用列表排队(List Mode)方式。易于加工处理分析，但缺乏直观性，数据的显示通常有一维直方图、二维点图、等高线图、密度图等几种；由数据还可以做出标准曲线进行定量分析。
Q1：坐标轴的意义？
1、 单参数直方图
每一个细胞单参数的测量数据可以整理成统计分布，以直方图的方式来显示。在图中，横坐标表示荧光信号或散射光信号相对强度的值，其单位是道数（channel），可以是线形（line）或者对数（log）。纵坐标一般是相对细胞/粒子数（count）！
2、 二维图
在二维图的中，横坐标/纵坐标都表示荧光信号或散射光信号相对强度的值，可以是线形（line）或者对数（log）。双参数图可以将样品细胞群分开，从而方便对感兴趣的细胞进行分析。
Q2：“Gate”和 “Regin”？
设门是流式细胞分析中一种重要的技术，只有通过最佳的设门方式，才能准确地获取和分析数据，从而得到临床诊断和科研中有价值的信息。
On-line gating(threshold gating)监测/获取数据
Off-line gating： 分析实验数据 散射光设门/荧光设门 散射光/荧光联合设门
多重逻辑门(组合门)多重逻辑门 G3=R1 and R2 (G3=R1×R2)
其它： G=R1 or R2 G=R1 not R2Q3:流式图中的颜色与荧光颜色?
流式图中的颜色为区分不同细胞群而人为指定, 与荧光颜色无关!!
Q4：流式图中的阴/阳（N/P）如何划分?
如何做M1阴性界限？实际上，这个M1的划分完全是根据阴性(同型)对照来的！如下图：左图为同型对照，即：您所检测的物质在阴性组中的基础表达量，可以理解为背景、静息状态下、基础水平、未受刺激时等。右图即阳性组，也就是接受刺激后，功能状态下、药物作用后等。
Q5: 这么巧，阴性正好在101划分？？
其实, 我们可以人为地将电压，放大倍数调到相应的大小，使阴性的右边界在某一个值上，（通常划在101附近）这样后期做sample时好看！当然也可以调到102，103次方。
Q6：为什么要进行荧光补偿？
流式细胞分析中经常要用到2种以上的荧光标记抗体进行染色，而目前所使用的多种荧光染料发射谱间有一定重叠。
“荧光补偿”这个术语是指修正荧光渗漏的过程，如从探测器除去除匹配荧光以外的任何荧光信号。
流式细胞仪技术参数
以保证分析的精度和效率。4. 样品浓度：仪器在工作时可以处理的样本浓度范围，一般在1010个细胞\/ml的级别。这些技术参数只是流式细胞仪性能的一部分，还有其他指标如动态范围、检测线性范围等，但这里仅作简要概述。在实际应用中，选择流式细胞仪时，需要根据具体实验需求和预期效果来综合考虑这些指标。
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单细胞分析方法
2、分离单个细胞 早期的单细胞捕获方法包括显微移液法、显微操作法和激光捕获显微切割法[26-27]。与目前常用的几种方法相比,这些方法通量低,技术上具有挑战性,需要费时费力,但在需要分析的细胞数量较少(如稀有细胞)时仍可使用。 荧光激活细胞分选(FACS)是一种特殊类型的流式细胞术,它提供了一种方法,根据细胞大...
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端木些急肝： 这个可以任意设置的啊.看你做的时候怎么设置的了.如果是histogram图,一般可以设为荧光强度(也就是信号的强弱). 如果是散点图,那可能性就太多了.
蓬安县19345497347： 流式细胞分析的反向设门是什么? - ？
端木些急肝： 流式细胞术数据分析目的就是需要确定所要研究的目的细胞器,这就涉及到设门.设门就是划定某一区域的细胞群体,对其单独加以分析或分选.门的形状可任意,方法有几种:(1)阈值设门.FSC(前向散射光)是最常用的阈值参数.FSC ...
蓬安县19345497347： 流式细胞仪 - ？
端木些急肝： 侧向角散射(side scatter,SSC), 流式细胞仪依靠激光器照射细胞所携带的不同荧光物质所产生的不同的荧光进行检测.由于散射光不依赖任何细胞样品的制备技术(如染色),因此被称为细胞的物理参数或称固有参数. 侧向角散射是指与激...
蓬安县19345497347： 流式细胞仪怎么用? - ？
端木些急肝： 流式细胞仪的结构 流式细胞仪是进行流式细胞分析的仪器,集电子、计算机、激光、流体理论于一体,被誉为试验室的“CT”.流式细胞术(Flow CytoMeter, FCM)是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手...
蓬安县19345497347： 流式细胞仪最多可同时测定几个参数?哪些参数与细胞的种类有关 - ？
端木些急肝： 具体的参数数目和机器的配置有关.比如高档的配置了五个激光的仪器,除了FCS, SSC外,还可以同时检测接近20种颜色(取决于PMT滤镜的设置).每个参数都可能和细胞的种类有关.
蓬安县19345497347： 流式细胞仪吸取样本的量可以调节吗 - ？
端木些急肝： 当然可以.通过设置每个样本所记录的细胞数,或者可以设置每个样本所检测的时间.如果是HTS系统,还可以自定义每个样本孔所吸取的样本体积
蓬安县19345497347： 请教,流式细胞术结果应该用设门法还是平均荧光强度统计 - ？
端木些急肝： 这个要看你具体的实验.一般的原则是先gate出所需要的细胞群,然后再看染色.流式检测大多数情况都是检测相对的百分比,而不是平均荧光强度.同一种荧光通道,都是阳性细胞,可以比较荧光强度
蓬安县19345497347： 如何看流式细胞图 - ？
端木些急肝： 流式的图一般是两种形式.一是柱状图,X轴是信号强度,Y轴是计数.数据通常显示为峰值.比如阴性或者信号弱的峰在左侧,而阳性或者信号强的就位于右侧.柱状图一次只能显示一个通道信号,通常用来判断阳性,阴性的区别或者单个通道信号在不同样本间的变化. 另外一种形式是散点图.就是把两个通道的信号同时显示在图上.优点是由于同时显示两个通道的信号,可以提供比柱状图更多的信息.多色流式样本检测一般都是通过上下级关系的图来显示不同的图.比如在上一级的图中先针对某个细胞群画了个门,然后该门内所有细胞又可以用其他通道的信号显示到另外一个图上进行进一步的分析.
蓬安县19345497347： 流式细胞仪,两通道,七色,能同时监测几种细胞表面分子? - ？
端木些急肝： 7种颜色在理论上是可以检测7种目标的.但是在实际上还要考虑到颜色之间的compensation,还有抗体.如果没有这么多已经标记好的一抗,在选二抗的时候就会受到限制.还有就是阳性对照的问题.所以要根据你的目标分子,具体情况具体分析.
蓬安县19345497347： 流式细胞仪显示nk细胞减少有什么临床意义 - ？
端木些急肝： 在临床上,单次检测这个指标没有意义. 临床检测NK细胞,必须做的检测是NKCP又叫做Natural Killer (NK) Cytotoxicity Profile.这个实验才反应NK细胞的功能和数量
